CRP临床意义.ppt
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1、 全程 C-反应蛋白的 检测及临床应用 一、特点一、特点二、定义二、定义三、三、CRP的发现及结构的发现及结构四、四、CRP的生理作用的生理作用五、常规五、常规CRP、hsCRP、全程、全程CRP的区别的区别六、检测方法六、检测方法七、健康人七、健康人CRP浓度正常参考范围浓度正常参考范围八、八、CRP检测的临床意义检测的临床意义九、全程九、全程CRP的应用建议的应用建议十、全程十、全程CRP的应用小结的应用小结全程全程CRPCRP(hsCRP+常规常规CRP)一、特点一、特点 全程全程CRP检测项目,包括:超检测项目,包括:超敏敏CRP和常规和常规CRP检测,检测线检测,检测线性范围:性范围
2、:0.5-200mg/L,一次检测同一次检测同时出具超敏时出具超敏CRP和常规和常规CRP两个两个检测结果,增加了检测结果,增加了CRP的临床运用的临床运用价值。价值。二二、定义、定义 CRP是一种急性相蛋白,健康人血清中浓度是一种急性相蛋白,健康人血清中浓度很低,当人体受了微生物等多种因子侵袭后,人很低,当人体受了微生物等多种因子侵袭后,人体的血清在几小时后很快产生一种急性期反应蛋体的血清在几小时后很快产生一种急性期反应蛋白,这种蛋白以与肺炎球菌白,这种蛋白以与肺炎球菌C多糖体超反应。多糖体超反应。CRP由肝细胞合成,在人的血清、脑脊液、胸腹由肝细胞合成,在人的血清、脑脊液、胸腹水等多种体液
3、中均可测出。水等多种体液中均可测出。三、三、C-反应蛋白反应蛋白(CRP)的发现与结构)的发现与结构19301930年由年由TilletTillet和和FrancisFrancis发现发现一种能在一种能在CaCa2+2+存在时存在时与肺炎链球菌与肺炎链球菌的荚膜的荚膜C C多糖结合多糖结合的蛋白质的蛋白质19411941年,年,AveryAvery等先后证实这是一等先后证实这是一种急性感染时出现的蛋白质(病情种急性感染时出现的蛋白质(病情恢复后恢复后/健康人血清中没有这种物健康人血清中没有这种物质)质)结构对称的盘状五聚体结构对称的盘状五聚体,归于五聚,归于五聚素家族素家族l由由5 5个完全相
4、同的非糖基化单体以个完全相同的非糖基化单体以非共价键联接形成非共价键联接形成l每个单体每个单体每个含每个含206206个氨基酸残基个氨基酸残基(相对分子质量相对分子质量23017)C反应蛋白(c-reactive protein,CRP)C-反应蛋白反应蛋白(CRP)的生成)的生成由肝细胞在由肝细胞在IL6、IL2、TNF刺激下刺激下合成,炎症局部巨噬细胞也可少量合成,炎症局部巨噬细胞也可少量产生。产生。正常合成率正常合成率1-10mg/d,急性炎症时,急性炎症时每天合成每天合成1g。半衰期半衰期19h,不耐热,不耐热,6530min破坏,沉淀系数破坏,沉淀系数615715S,等电,等电点点4
5、182。不能通过胎盘,在体内分布甚广,不能通过胎盘,在体内分布甚广,除血液外,胸水、腹水、心包液、除血液外,胸水、腹水、心包液、关节液中均可测出。关节液中均可测出。四、四、C-反应蛋白反应蛋白(CRP)的生理作用)的生理作用引发对侵入细胞的免疫调节和吞噬作用,引发对侵入细胞的免疫调节和吞噬作用,与配体结合,激活补体,调理吞噬功能,与配体结合,激活补体,调理吞噬功能,促使内源性或外源性配体物质(载有配体促使内源性或外源性配体物质(载有配体的病理物质或病原体)的清除,的病理物质或病原体)的清除,表现为炎表现为炎症反应症反应在在Ca2+存在下与磷酸胆碱、存在下与磷酸胆碱、DNA、组蛋白等结合、组蛋白
6、等结合与凋亡坏死细胞膜脂质双层结构破坏时暴露的磷脂或外部侵入的细菌、真菌、与凋亡坏死细胞膜脂质双层结构破坏时暴露的磷脂或外部侵入的细菌、真菌、寄生虫的细胞壁磷酸胆碱结合寄生虫的细胞壁磷酸胆碱结合CRP细菌细菌巨噬细胞巨噬细胞C-反应蛋白反应蛋白(CRP)是急性时相反应蛋白)是急性时相反应蛋白CRP升高见于急性和慢性炎症(如伴有升高见于急性和慢性炎症(如伴有细菌感染)、组织损伤(心梗、手术创细菌感染)、组织损伤(心梗、手术创伤、烧伤、放射线损伤等伤、烧伤、放射线损伤等)、恶性肿)、恶性肿瘤、风湿性疾病等瘤、风湿性疾病等 疾病后疾病后68h开始升高,开始升高,2448h达到达到高峰高峰比正常值高比
7、正常值高1001000倍,升高幅度与倍,升高幅度与感染的程度呈正相关感染的程度呈正相关病变好转时其含量急速下降,病变好转时其含量急速下降,1周内可周内可恢复正常(恢复正常(T1/2约约19 h),此反应不受放,此反应不受放疗、化疗、皮质激素治疗影响疗、化疗、皮质激素治疗影响 时相性时相性+灵敏性灵敏性N Engl J Med 1999;340:448-454.血清淀粉样蛋白A结合珠蛋白纤维蛋白原转铁蛋白白蛋白白蛋白五、常规五、常规CRP、hsCRP、全程、全程CRP的区别的区别8160mg/L 常规CRP(低水平区灵敏度较差)0.58mg/L hsCRP(准确的检测低水平的CRP和微小变化,更
8、敏感)0.5200mg/L 全程CRP=hsCRP+常规CRP(增强了临床高CRP标本的检测能力,同时也提高了低值的灵敏性,更利于动态监测)三者检测血中相同的物质(物质的唯一性,仅是检测方法和范围的差异)六、检测方法六、检测方法 方法方法 灵敏度灵敏度 参考献参考献试管内沉淀试验试管内沉淀试验 -JExpMed1930;52561JExpMed1930;52561毛细管内沉淀试验毛细管内沉淀试验 10 102020mg/Lmg/LAmJMed1950;8445AmJMed1950;8445改良平板双扩散法改良平板双扩散法 10 102020mg/Lmg/LIntArchAllergy1962I
9、ntArchAllergy1962改良琼脂柱扩散法改良琼脂柱扩散法 3.03.0mg/Lmg/LProcSocExpBiol1955ProcSocExpBiol1955改良单扩散法改良单扩散法 1.0 1.0mg/Lmg/L ActaPatholMicrobiolScandActaPatholMicrobiolScand琼脂糖凝胶电泳法琼脂糖凝胶电泳法 1.0 1.0mg/Lmg/LClinChimActa1969ClinChimActa1969放射电免疫扩散法放射电免疫扩散法 10 10g/Lg/LJClinLabInvest1973JClinLabInvest1973补体结合试验补体结合试
10、验 0.6 0.6mg/Lmg/LProcSocExpBiol1954ProcSocExpBiol1954胶乳凝集试验胶乳凝集试验 1.0 1.0mg/Lmg/LNature(London)1961Nature(London)1961高敏乳胶增强浊度高敏乳胶增强浊度 0.35mg/ml Dade Germany2000荧光抗体法荧光抗体法 Nature(London)1961Nature(London)1961放射免疫测定法放射免疫测定法 3 3gg/L JLabClinMed1976/L JLabClinMed1976CRP定量检测定量检测C方法学线性分析方法学线性分析序号序号 检测方法检测
11、方法 线性范围线性范围mg/L 线性线性范围有效倍数范围有效倍数 检测项目检测项目 1 免疫荧光免疫荧光 0.5-200 400倍倍 全程全程CRP 2 免疫比浊免疫比浊 8-160 20倍倍 常规常规CRP 3 金标金标 8-250或或5-150 32倍倍 常规常规CRP 4 紫外分光光度紫外分光光度 0.5-5或或5-50 10倍倍 常规常规CRP或超敏或超敏CRP 5 动态散射比浊动态散射比浊 0.08-3.4或或5-230 46倍倍 常规常规CRP或超敏或超敏CRPi-CHROMATM全程全程CRP检测原理检测原理i-CHROMATM全程全程CRP检测使用的是免疫荧光,检测使用的是免疫
12、荧光,双抗体夹心法,将血液样本和检测缓冲液充分混双抗体夹心法,将血液样本和检测缓冲液充分混匀,缓冲液中荧光标记的抗匀,缓冲液中荧光标记的抗CRP抗体和血液中的抗体和血液中的CRP抗原结合形成抗原抗体复合物。当混合样本抗原结合形成抗原抗体复合物。当混合样本加入到检测板的加样孔后,该复合物被固相在检加入到检测板的加样孔后,该复合物被固相在检测板上的抗测板上的抗CRP抗体所捕获。荧光信号强度反映抗体所捕获。荧光信号强度反映了被捕获的了被捕获的CRP数量。数量。i-CHROMATM全程全程CRP默默认是以认是以mg/L为单位为单位全程全程CRP检测步骤检测步骤检查并插入检查并插入ID芯片确定检测板和芯
13、片确定检测板和ID芯片相匹芯片相匹配配从冰箱中取出检测缓冲液,放置从冰箱中取出检测缓冲液,放置10分钟使其分钟使其平衡至室温平衡至室温吸取吸取15ul全血(全血(10ul血清,血浆或质控品,血清,血浆或质控品,EDTA抗凝)放入到有检测缓冲液的管子中,抗凝)放入到有检测缓冲液的管子中,充分混匀。充分混匀。取取75ul样本混合液加入检测板的加样孔中,样本混合液加入检测板的加样孔中,在室温下反应在室温下反应3分钟分钟将检测板放在将检测板放在i-CHROMATM免疫荧光分析仪免疫荧光分析仪的检测板承载器中的检测板承载器中 确保检测板方向正确并将确保检测板方向正确并将其完全推入,按其完全推入,按“选择
14、选择”键,仪器开始自动键,仪器开始自动扫描。扫描。13秒内屏幕上即可读取结果或直接打印结果秒内屏幕上即可读取结果或直接打印结果或通过或通过LIS系统输出数据。系统输出数据。七、七、健康人健康人CRP浓度浓度正常参考范围正常参考范围(A)Frequency distribution of CRP concentrations in sera from 100 healthy adults.(B)Serum CRP concentration in monthly samples over 10 months in 10 healthy subjects.Wilkins,J.et al.Clini
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