单胞藻类的实验室培养.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,微藻的实验室培养,藻类的概述,培养的方式,实验室培养,绿藻,裸藻,黄藻,蓝藻门,二、微藻的营养模式和生长模式,（二）,、,微藻,的生长模式,藻类在培养过程中，生长繁殖的速度，出现一定的起伏，这种生长模式可划分为五个时期（延缓期、指数生长期、相对生长下降期、静止期、死亡期）,三,、培养方式,按培养的场所分,室内,培养和,室外,培养,按培养基的形态分,固体培养,和,液体,培养,按培养的纯度分,纯种培养,和,单种,培养,按藻液的流动情况分静止培养和循环流动水培养,按气体交换情况分充气培养和不充气培养,按藻液与外界接触程度分,封闭式培,养和,开放式培养,按培养规模和目的分,小型培养、中继培养和大量培养,（1）纯培养和单种培养,纯培养（axenic culture）,：是无菌培养，指排除了包括细菌在内的一切生物的条件下进行的培养。,纯培养操作要求十分严格，要求有无菌室、超净台等设备，容器、工具、培养液等均须彻底灭菌。培养成功率很高，是进行科学研究不可缺少的技术。,单种培养（single-species culture）,：指区别于纯培养的不排除细菌存在的培养（可以是生产性的，也可以是非生产性的）,（,3,）小型培养、中继培养和大量培养,小型培养,：,一级培养,，目的是培养和供应藻种,，用于科研等,。一般采用封闭式不充气一次性培养方式，培养容器一般采用1003000ml的三角烧瓶。,中继培养,：又称,二级培养,，目的是藻种扩大培养，供应生产性大量培养的藻种。一般在室内大的玻璃容器或塑料大袋中进行。,单胞藻生产性扩大培养常用流程,500mL藻种,5000mL三角烧瓶,细口玻璃瓶,塑料桶,封闭式塑料薄膜,水泥池,一级培养,二级培养,三级培养,实验室,培养过程,消毒,配制培养液,接种,培养管理,收获,1,容器、工具和水,消毒,方法总结,一级培养（,实验室的培养,）：,金属器具和试管口、瓶口：直接灼烧,玻璃器皿：,洗液,+烘箱,纸、棉花、纱布：烘箱,培养用水：砂滤水,脱脂棉,煮沸,冷却,洗液,：15g重铬酸钾+200mg浓硫酸混匀,粒径 厚度,细砂,0.1mm 6080cm,23层网目0.1mm的筛绢网布,粗砂,34mm 810cm,1层网目1mm的胶丝网布,碎石,2.53.5cm 58cm,1层网目12mm胶丝网布,筛板,筛孔2cm 5cm,培养用水,海水,沉淀,砂滤,脱脂棉,烧开,冷却,过滤器,水消毒池,一级培养,二、三级培养,以上用水量都是加至,1000mL,，,海藻培养液,用海水，如无海水可用,淡水,1000mL,加,30,克食盐代替。,如配制固体培养基，可在培养液内加入,1.5,的,琼脂。,藻种的获得,1 购买,2自行分离,稀释分离法,平板分离法,1藻种的选择：,特征：,生长迅速；,对极端的温度和辐射条件的耐性范围大；,蛋白质，脂类和糖类含量高，或有选择地积累一种特殊的代谢产物（如甘油）；,无毒性，且易于收获。,根据系统的要求和特殊的方法，还可有其他要求。,按种后瓶口用,灭菌纸包扎,，放在适宜光、温条件下培养，每天轻轻摇动,二次,。大约二周后进行一次移植。藻种在培养过程中必须定期用显微镜检查，保持不受其他生物污染。,3藻种的保存：,一旦藻种分离得到，就要保存好以便在一定的时间内供接种用。为此，要将藻种消毒，避免其他来源的污染。给以适当的光照和温度。,在液体培养中，为了,快速增殖,，可用5400lx。再得到良好生长后（12周），培养液移到,更低的光照条件,（5401100lx），以求缓慢生长及储藏。,4.,培养管理：主要是使已接种培养物在相对稳定适宜环境中大量繁殖生长。要注意以下因素：,1）二氧化碳浓度在开放式不通气方法培养中，,搅拌是十分必,要的，可以增加水和空气的接触面，使空气中二氧化碳溶解到培养液中，而且帮助沉淀藻类细胞上浮获得光照。在通气培养中，培养液内应维持二氧化碳浓度在0.15之间。,4）无机营养 应不断添加新鲜培养液，及时补充被藻吸收后减少了的某些元素。,5）注意pH变化 如变动过大，可用酸、碱调节。,6）适当控制培养物中藻细胞浓度 过高会引起光照和无机营养不足，并导致pH上升。一般控制在0.3g（干重）/L范围内。,收获,根据水色的由浅变深,绿藻类：由嫩绿色变为深绿色,硅藻类：由浅褐色变为深褐色,金藻类：金黄色,静止期后的老化藻对扩大培养或投喂都不利,thank you！,