细胞的形态与记数.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,湖州师院 杨建民,细胞的形态与记数,目的与要求,1.初步掌握临时制片技术和显微绘图的方法；,2.,熟悉光镜下动、植物细胞的基本形态、结构；,3.掌握活细胞计数的使用方法。,4.掌握显微测微尺的使用方法。,临时制片方法及细胞形态的观察,（一）人口腔黏膜上皮细胞制片与观察,取一载玻,片，夹持载玻片两端，用清洁纱布擦净；,在载玻片中央滴1滴0.5%次甲基蓝染液；,用消毒牙签的钝端轻轻刮取颊部内侧的口腔黏膜上皮细胞；,将牙签在载玻片的染液中来回滚动数次；,染色2-3分钟，盖上盖玻片，注意不要有气泡产生；,观察。先低倍，再高倍。细胞核被染成深蓝色。,（,二）洋葱表皮细胞的制片与观察,取一擦净的载玻,片，滴1滴1%碘液；,将洋葱嫩茎用小刀切成小块，取1块肉质鳞叶，用镊子在其内表面轻轻撕下一小块表皮，再用剪刀剪成小块，置于载玻片的染液中铺平；,染色2-3分钟，盖上盖玻片；,先低倍，再高倍。细胞核被染成深黄色。,细 胞 计 数,细胞计数的原理,细胞计数时，先将培养细胞或血细胞稀释成细胞悬液，然后将细胞悬液滴入细胞计数板内，计数计数板上计数室四大格内的细胞数。根据计数室的容积及稀释倍数，即可计算出细胞浓度。,1.制备血细胞悬液,取1只,乙醚麻醉过的蟾蜍，心脏取血1,ml，,用,Ringer,液稀释一定倍数制成细胞悬液；同时用蟾蜍血制备血涂片，室温晾干备用；,2.熟悉血细胞计数板,血,细胞计数板呈长方形，有2个计数室。每个计数室分为9个大正方格，每个大格边长1,mm,计数室的底与盖玻片间的距离为0.1,mm，,即每大格的容积为1,mm1mm 0.1mm=0.1mm,3,四角的每个大格被分为16个中格；中央的大格被分为25个中格，每个中格被分为16个小格。,3.滴片,将盖玻片擦,净，盖在血球计数板槽上，取制备好的蟾蜍血细胞悬液1滴滴于血球计数板的盖玻片一侧边缘，让细胞悬液自然流入计数室内。注血细胞悬液不可滴得过多，如溢出或盖玻片内有气泡必须重做，否则将影响计数结果。,4.计 数,在低倍镜下数出,计数板上计数室四角大格中的细胞数，如细胞压在格线上时，数上不数下，数左不数右。,5.细胞浓度计算,将四大格的,细胞总数除以4，得出平均每大格的细胞数，每大格的容积为0.1,mm,3,，,乘以10000即为1000,mm,3,（1ml）。,不同稀释倍数细胞悬液的细胞浓度可用下式计算：,细胞浓度（细胞数/,ml)=(,四大格的细胞数/4）,10000,稀释倍数,应用显微镜的成像原理，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，得出细胞的大小,显微,测量的原理,物镜测微尺,目镜测微尺,测微尺的使用操作,1.卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上，再旋上目镜的上透镜。2.将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好，使测微尺刻度位于视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。3.小心移动镜台测微尺和目镜测微尺(如目镜测微尺刻度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的“0”点一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重复的直线(图)。4.记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格的长度等于多少,m,目镜测微尺每格的长度/,m=,镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数,目镜测微尺量测倍率比照表,细胞生物学实验绘图方法与要求,1在仔细观察的基础上，选择典型结构进行描绘，要求真实、准确（注意各部结构的比例关系）。2用铅笔绘图，线条要明确清晰，图的深浅明暗一律以点的疏密来表示，点要圆而一致，不得用涂暗影或进行其他美术加工。3各部结构名称要在一侧引直线注明。各引线要平行不得交叉。4每幅图的大小、位置在纸面上必须安排得当并注意纸面的清洁。,实验报告,在,低倍镜下数出计数板四角四大格中血细胞数，然后取下盖玻片，将血细胞记数板冲洗干净，重新滴片、记数，共三次。取3次记数的平均数代入公式计算出结果。,一、分别求出使用低倍镜(10,X)，,高倍镜(40,X),时目镜测微尺每格代表的长度：低倍镜：目镜测微尺每格代表的长度=,XlO(m)=m,高倍镜：目镜测微尺每格代表的长度=,XlO(m)=m,二、分别绘制所观察的,高倍镜下人口腔黏膜上皮细胞,并注明基本结构。三,、,用测微尺测量不同材料各种细胞的大小后，制表格表示测量结果,四,、计算蟾蜍红细胞的核质比例。计算细胞、细胞核体积的公式：圆 形,V=4/3r 3(r,为半径)椭圆形,V=4/3ab2(a、b,为长、短半径)核质比,ND=Vn(VcVn)(Vn,为核的体积，,Vc,是细胞质的体积),