生化设计性实验.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,影响酶活性的因素,生化一组,4,小组：,叶蓁、闵泽楚、赵泽楠、袁野,一、实验目的,观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察不同底物、温度、,pH,、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。,二、原理,1,、影响酶活性的因素包括：底物类型、酶浓度、底物浓度、产物浓度、抑制剂、激活剂、,pH,值、温度等,2,、淀粉在淀粉酶的作用下被降解成单糖，这种降解过程是逐步进行的，降解的中间产物遇碘曾现不同的颜色：,3,、淀粉,红色糊精,无色糊精,麦芽糖,葡萄糖,（紫蓝色）（红色）（无色）,所以根据水解液和碘反应的颜色，可以判断水解是否已完全。,三、试剂和器材,1.,试剂,新鲜唾液稀释液、,1%,蔗糖溶液、,Benedict,试剂、,1%,淀粉溶液、,0.1,氯化钠溶液、,0.1,硫酸铜溶液,2.,器材,恒温水浴锅、冰箱、电磁炉,四、实验步骤,依据实验原理而定,实验一：酶对底物的特异性,一、实验目的：,了解酶的特异性并掌握检查酶的特异性的方法和原理。,二、实验原理：,酶的特异性是指一种酶只能对一种或一类化合物（此类化合物通常具有相同的化学键）起作用，而不能对别的化合物起作用。如淀粉酶只能催化淀粉水解，对蔗糖的水解无催化作用。,本实验以唾液淀粉酶（含淀粉酶和少量麦芽糖酶）对淀粉的作用为例，说明酶的特异性。淀粉和蔗糖都没有还原性，但淀粉水解产物为葡萄糖，蔗糖水解产物为果糖和葡萄糖，均为还原性糖，能与,Benedict,试剂反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。,三、试剂和器材,1.,试剂,新鲜唾液稀释液、,1%,蔗糖溶液、,Benedict,试剂、,1%,淀粉溶液,2.,器材,试管、控温水浴锅,四、操作方法,1.,检查试剂,取,2,只试管，按下表操作。,试管,编号,试剂处理,1,2,1%,淀粉溶液,/,mL,3,1%,蔗糖溶液,/,mL,3,Benedict,试剂,/,mL,2,2,沸水浴煮沸,2,3min,记录观察结果,淀粉酶的专一性实验,取,2,只试管，按下表操作。,试管编号,试剂处理,1,2,稀释的唾液,/,mL,1,1,1%,淀粉溶液,/,mL,3,1%,蔗糖溶液,/,mL,3,摇匀，置,37,水浴保温,10min,Benedict,试剂,/,mL,2,2,沸水浴煮沸,2,3min,记录观察结果,实验二：温度对酶活性的影响,一、实验目的：,1,初步学会探索温度对酶活性的影响的方法。,2,探索淀粉酶在不同温度下催化淀粉水解的情况。,二、实验原理：,1,淀粉遇碘后，形成紫蓝色的复合物。,2,淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖（淀粉水解过程中，不同阶段的中间产物遇碘后，会呈现红褐色或红棕色。）,3,酶的活性受温度的双重影响。在一定温度范围内，酶活性随温度上升而增高。温度每升高,10,，反应速度增加一倍左右；但是，温度过高会使酶蛋白质变性，致使酶活性降低或完全丧失。当酶促反应速度达到最大值时的温度，称为酶作用的最适温度。,三、试剂和器材,1.,试剂,1%,淀粉溶液、稀释唾液、碘液,2.,器材,试管、控温水浴锅,四、实验步骤：,按照下表进行实验,序号,加入试剂或处理方法,试管,A,B,C,a,b,c,1,1%,淀粉溶液,2mL,2mL,2mL,/,/,/,新鲜唾液,/,/,/,1mL,1mL,1mL,2,保温,5min,60,100,0,0,C,60,0,C,100,0,C,0,0,C,3,将,a,液加入到,A,试管，,b,液加入到,B,试管，,c,液加入到,C,试管中，摇匀,4,保温,5min,60,0,C,100,0,C,0,0,C,5,滴入碘液，摇匀,2,滴,2,滴,2,滴,6,观察现象并记录,实验三：,pH,对酶活性的影响,一、实验目的：,1,初步学会探索,pH,对酶活性的影响的方法。,2,探索淀粉酶在不同,pH,下催化淀粉水解的情况。,二、实验原理：,1,淀粉遇碘后，形成紫蓝色的复合物。,2,淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖（淀粉水解过程中，不同阶段的中间产物遇碘后，会呈现红褐色或红棕色。）,3,酶的活性受环境,pH,的影响极为显著。因,pH,影响酶蛋白和底物的解离状态，从而明显改变酶与底物的结合和催化作用。每一种酶发挥作用的最佳条件要求最适,pH,，此时酶的活性最大。当其他条件相同时，离最适,pH,越近，其活性越大，所催化的反应速率也最快。,三、试剂和器材,1.,试剂,1%,淀粉溶液、生理盐水、稀释唾液、班氏试剂、碘液、,0.1mol/L pH 58,磷酸盐缓冲液（配制见实验课本,207,页）,2.,器材,试管、控温水浴锅、吸量管、滴管,四、实验步骤：,按照下表进行实验,序号,加入试剂或处理方法,试管,1,2,3,1,稀释唾液,1mL,1mL,1mL,2,注入,pH,为,5,的磷酸盐溶液,1mL,/,/,3,注入,pH,为,6.8,的磷酸盐溶液,/,1mL,/,4,注入,pH,为,8,的磷酸盐溶液,/,/,1mL,5,1%,淀粉溶液,2mL,2mL,2mL,6,37,0,C,水浴保温,5min,7,加入班氏试剂，,边加边振荡,2mL,2mL,2mL,8,水浴加热煮沸,1min,9,观察,3,支试管中溶液颜色变化变记录,