月季花药培养.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,花丝,花药：,囊状结构，内有很多花粉,花粉是由花粉母细胞（小孢子母细胞）经过,减数分裂,而形成的，因此，花粉是,单倍体的生殖细胞,。,花粉的发育要经历：,四分体,时期、单核期、双核期等阶段。,一、基础知识,（一）被子植物的花粉发育,雄蕊,花粉粒,被子植物花粉的发育过程,注意,：,二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成，,如棉花、桃、李、茶、杨、,）,三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。（,如水稻、,大麦,、小麦、,玉米,、油菜等的花粉,）,两个精子和一个营养核的基因型相同。,4,个小孢子,减分,有分,4,个花粉管细胞核,4,个生殖细胞核,有丝分裂,8,个精子,1,花粉母细胞,（二）产生花粉植株的两种途径,移栽,花药中的花粉,胚状体,脱分化,愈伤组织,花药中的花粉,脱分化,分化,丛芽,再分化,丛芽,诱导,生根,体细胞胚（胚状体）：,在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为,体细胞胚（胚状体）,。,人工种子,又称人造种子、合成种子或无性种子，就是将组织培养所产生的,体细胞胚、不定芽、顶芽、腋芽或小鳞茎等繁殖体,，包裹在能提供营养的胶囊（,人造胚乳,）里，再在外面包上一层具有保护功能和防止机械损伤的外膜（,人造种皮,），造成一种类似种子的结构，能在一定的条件下萌发生长，形成完整植株。,(,三,),、影响花药培养的因素,1,、材料的选择,不同植物,同一植物的不同生理状况,（花期早期初花期）,合适的花粉发育期,（单核居中期与靠边期之间）,此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等,2,、培养基的组成,1,、材料的选择,花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的,初花期,。,选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，在,单核期,，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。,为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾,。,2,、培养基的组成,月季花的培养基配方,在,1000mlMS,培养基配方中添加,2,，,4D 0.4mg,KT 0.2mg,IAA 4mg,调节,PH,为,5.8,二、实验操作,（一）材料的选择,选择花药时，一般要通过,镜检,来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。,最常用的方法有,醋酸洋红法,。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用,焙花青,-,铬矾法,，这种方法能将花粉细胞核染成,蓝黑色,。,（二）材料的消毒,1,、花蕾用,70%,的酒精,浸泡,30,秒,2,、无菌水清洗,3,、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分,4,、放入,质量分数为,0.1%,的氯化汞,溶液中,24,分钟（也可,质量分数为,1%,的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液,）,5,、无菌水冲洗,35,次,用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。,为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？,答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。,为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？,讨论：,（三,）接种和培养,灭菌后花蕾，要在无菌条件下,除去萼片和花瓣,，并立即将,花药接种,到培养基上。在剥离花药时，要尽量,不损伤花药,（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要,彻底去除花丝,，,因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。,通常每瓶接种花药,7-10,个，温度控制在,25,左右，,不需要光照,。幼小植株形成后才,需要光照,。,一般经过,20-30,天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到,分化培养基,上，以便进一步分化出再生植株。,如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。,在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现,染色体倍性的变化,。,（主要原因是,营养核和生殖核融合,造成的。）,故需对培养出来的植株作进一步的鉴定和筛选。,植物组织培养技术与花药培养技术的比较,项目,相同点,不同点,植物组织培养技术,离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。,外植体为体细胞，染色体数无需加倍。,花药培养技术,取材为花药，培养的为,单倍体幼苗,，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为,纯种,。,课题成果评价,选材是否恰当,选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。,课题成果评价,无菌技术是否过关,如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒或花药接种等有问题。,课题成果评价,接种是否成功,如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。,练习,1,F,2,代紫色甜玉米的基因型组成可能为,Aasusu,或,AAsusu,。如果运用常规育种方法，将,F,2,代中的紫色甜玉米与白色甜玉米（,aasusu,）进行,测交,，可以选择出基因型为,AAsusu,纯种紫色甜玉米。但这种方法比较繁琐，耗时也较长，需要至少三年的选种和育种时间。,如果利用花药培养的技术，在,F,1,代产生的花粉中就可能有,Asu,的组合，再将花粉植株进行染色体加倍，就可以直接得到紫色甜玉米的纯合子（,AAsusu,）。这种方法可以大大缩短育种周期。,练习,2,植物组织培养技术与花药培养技术的,相同之处,是：培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同。,不同之处,在于：花药培养的选材非常重要，需事先摸索时期适宜的花蕾；花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基；花药培养对培养基配方的要求更为严格。这些都使花药培养的难度大为增加。,THE END,