实验动物基本操作.ppt

<p>单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验动物基本操作,第一节 实验动物的抓取与固定,抓取与固定,是动物实验的一项基本技术，其目的是使动物保持在安静的状态下，顺利地进行各项实验。,不同种类的动物的抓取与固定方法不尽一致。,同种动物不同实验目的、实验内容，抓取与固定方法也可以不同。,不同实验者的操作习惯上也存在差异。,一、小鼠,（一）、抓取,用右手拇指和食指的指腹抓住尾部中央提起。,（二）、固定,1,、徒手固定,（,1,）,将小鼠提起放在饲养盒盖子上，轻轻向后拉住。（,2,）用左手拇指和食指抓住颈、背部中央皮肤。,（3）翻转抓住颈背部的左手，右手拉住鼠尾再用 左手的小指压住尾根部，使整个小鼠呈一条直线。,2,、固定板（器）固定,（,1,）将小鼠麻醉后，用细绳捆住小鼠四肢。,（,2,）准备一个,15-20cm,，边缘钉有,5,个钉子 的方木板。,（,3,）将四肢用细绳固定在木版两侧的钉子 上，在上颚切齿处用细绳 固定在木版前方的钉子上。,固定板固定适用于大多数动物手术。,小鼠固定器适用于尾静脉注射。,二、大鼠和地鼠,（一）抓取,1,、,周龄较小的大鼠和地鼠，可以像小鼠一样抓住尾部提起。,2,、周龄较大的大鼠可张开左手虎口，迅速将拇、食指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身体中段，并将其保持仰卧位，然后调整左手拇指的位置，紧抵在下颌骨上即可进行实验操作。,12,注意：,操作者第一次抓取大鼠时，最好戴防护手套；不能捉提尾尖，也不能长时间将大鼠悬在空中。,（二）固定,1,、徒手固定：,对体重较小的大鼠可用拇指、食指捏住大鼠耳部及颈部皮肤，余下三指紧捏住背部皮肤，置于掌心，调整好大鼠在手中的姿势即可进行实验操作。,如：灌胃、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射等实验。,2,、固定板固定：,方法与小鼠固定板固定相同，,只是需选择更大一些的固定板。,3,、固定器（盒）固定：,方法与小鼠固定器（盒）,固定相同，只是固定器较小鼠的大。同样适用,于大鼠尾静脉注射。,三、豚鼠,（一）抓取,抓取幼龄豚鼠时，用两手捧起；成熟豚鼠可以用左手大把抓起。,16,注意：,豚鼠性情温和，一般不伤人，但胆小易惊，易造成自伤。抓取时，不能太粗野，更不能抓腰腹部，在操作过程中，如果豚鼠挣扎，手不要越握越紧，否则会造成豚鼠呼吸困难，甚至死亡。,（二）固定,1,、徒手固定：,先用左手轻轻扣、按住豚鼠背部。,顺势抓紧其肩胛上方皮肤，拇指和食指环箍其颈部。,用右手轻轻托住其臀部，即可将豚鼠抓取保定。,2,、固定板（器）固定：,与大、小鼠，豚鼠固,定板固定基本一致。,四,、实验兔,（一）抓取,抓住颈背部皮肤及两耳提起，并用左手托住兔腹部或臀部，使其重量主要落在左手上。,注意：,家兔温顺，一般不会咬人，但脚爪较锐利，要,防止被抓伤。另外抓取时不能只提兔耳或四肢，,也不能用单手只抓颈背部皮肤。,（二）固定,1,、徒手固定：,用一只手抓住兔的颈背部皮肤，另一只手抓住兔的两后肢，固定在实验台上。,也可以坐在椅子上用一手抓住兔颈背皮肤和两耳，大腿挟住兔的后半身，用另一只手抓住两前肢将兔固定。此固定方法适用于,腹腔、肌肉注射，及经口给药,。,2,、固定盒固定：,此固定方法适用于头、耳部位实验。,3、固定板（台）固定：,此固定方法可使兔俯卧、仰卧或侧卧固定，适宜于兔头、颈、躯干手术及其它实验操作。,兔子固定板固定,五,、实验犬,（一）抓取,对未经驯服和调教的外购犬抓取时，可用特制的长柄铁钳夹住犬的颈部，由另一人用布带或粗绳缚其嘴，并将布带、绳固定在狗耳后颈部，防止脱落。,（二）固定,实验台固定：,用特制的长柄铁钳夹住犬的颈,部后，麻醉动物。将麻醉的犬放在实验台上，,再用粗棉带（绳）固定四肢于实验台上。,并将,犬舌拉出。此固定方法仰卧位适用于口腔、颈、,胸、腹、四肢等部位的实验，俯卧位适用于脑、,背部位的实验。,注意：,狗性情凶恶、咬人，特别是对陌生人有攻击性。对刚购入的狗要特别小心，避免被其咬伤。,在缚嘴时，动作要迅速，捆绑松紧要适中。,六、实验猴,31,不管采用哪种抓取与固定方法，都应遵守的,基本原则是,：,1.,保证实验人员的安全。,2.,防止动物意外损伤，禁止采取粗暴的动作。,因此在抓取与固定动物时，应了解动物的生活习性，生理解剖结构，体重、体型，实验内容确定动物的抓取与固定方法。,第二节 年龄的大致判断,（一）大、小鼠,1,、根据形态鉴定日龄（大、小鼠情况基本一样）,日龄,/d,外观形态特征,1,仔鼠裸体鲜红,3,耳壳露出表皮,4,脐带瘢痕脱落,5,能翻身,8,能爬行,日龄,/d,外观形态特征,10,能听到声音,9,11,全身被白毛，门齿长出,13,15,眼皮张开，能跳跃，能抓取东西,18,以后,能自行采食，独立生活,2.,根据体重鉴定日龄,小鼠日龄与体重的对应,日龄,/d,初生,5 10 15 20 25 30,体重,/g,1.8 4.0 6.0 11.0 15.0 21.0 24.0,大鼠日龄与体重的对应,日龄,/d,初生,10 20 30 40,体重,/g,6,7 17,25 35,50 55,90 100,150,日龄,/d,50 60 70 80,体重,/g,150,210 170,240 210,270 240,320,（二）豚鼠,一般老年豚鼠牙齿和趾爪长，被毛稀疏无光泽，眼神呆滞，行动迟缓。而年轻豚鼠牙齿短白，爪短软，眼睛圆亮，行动敏捷，被毛有光泽，且紧贴身体。,也可根据体重来推断大致年龄。,同日龄豚鼠，雌性体重略高于雄性。与大鼠一样，其体重受多种因素的制约。实验对年龄要求比较严格时，必须由卡片记录提供准确年龄。,日龄,/d,初生,7 20 30 60,体重,/g,60,80 100,120 150,200 170,220 240,300,日龄,/d,90 120 180,体重,/g,330,400 400,470 520,600,家兔的,门齿和爪,随年龄增长而增长，是年龄鉴别的重要标志。,青年兔,门齿,洁白，短小，排列整齐；老年兔门齿暗黄，厚而长，排列不整齐，有时破损。白色家兔,趾,小基本呈红色，尖端呈白色。,1,岁家兔红色与白色长度相等；,1,岁以下，红多于白；,1,岁以上，白多于红。,还可根据,趾爪,的长度与弯曲度来区别。,青年兔趾爪较短，直平，隐在脚毛中，随年龄的增长，趾爪露出于脚毛之外，而且爪尖钩曲。另外，家兔皮薄而紧，眼神明亮，行动活泼的为青年兔；皮厚而松，眼神颓废，行动迟缓的为老年兔。,（三）家兔,犬的年龄主要以牙齿的生长情况、磨损程度、外形颜色等情况综合判定。,仔犬在出生后十几天即开始生出乳齿，,2,个月以后开始由门齿犬齿臼齿顺序逐渐更换为恒齿，,8,l0,个月齿换齐。但犬齿需要,1,岁半以后才能长坚实。饲养场饲养的品种犬，可以根据记录，明确了解年龄，而收购的杂种犬就无法知道确切年龄。实际中，可根据犬齿更换和磨损情况，估计犬的年龄。,（四）犬,年龄,犬齿更换和磨损情况,2,个月以下,仅有乳齿,(,白、细、尖,),2,4,个月,更换门齿,4,6,个月,更换犬齿,(,白，牙尖圆钝,),6,10,个月,更换臼齿,1,岁,牙长齐，洁白光亮。门齿有尖突,2,岁,下门齿尖突部分磨乎,3,岁,上、下门齿尖突大部分磨平,4,5,岁,上、下门齿开始磨损呈微斜面，并发黄,6,8,岁,门齿磨成齿根，犬齿发黄、磨损,9,10,岁,唇部、胡须发白,10,岁以上,门齿磨损，犬齿不齐全，牙根黄，唇边胡须全白,第三节 性别鉴定,小鼠性别鉴定,小鼠性别鉴定,小鼠性别鉴定,兔的性别鉴定,初生兔仔如阴部孔洞扁圆而略大于肛门，且与肛门相向、距离较近的是母兔；孔洞呈圆形而略小于肛门，孔洞向前而距肛门较远的是公兔。,三月龄以上的兔子，只要看有无阴囊即可区别公母。,兔子的性别鉴定（雌）,兔子的性别鉴定（雄）,第三节 动物编号,动物实验时，当使用的动物数或实验分组数大于,1,时，需要对动物个体间或组间区别开来，就需进行编号与标记。因此编号与标记的,目的,就是动物个体与组别的识别。,标记的方法很多，良好的标记方法应满足：,号码清楚、持久、简便易认和适用，不影响实验结果，对动物的刺激小，标记物对动物无毒性。,编号方法无定法，原则是使实验者能够识别动物个体和组别。,实验动物编号标记标准操作规程,1,目的：为了规范实验动物编号标记方法，对分组后的实验动物进行标记编号，制定本程序。,2,范围：适用于实验动物编号标记的活动。,3,职责：所有实验人员应遵守本规程，动物实验室负责人负责监督和管理。,4,工作程序：,4.1,良好的标记方法应满足标号清晰、耐久，简便、适用、无明显损伤、无毒和易辨认等要求。常用的标记方法有染色法、耳缘剪孔法、烙印法、挂号牌法、挂环法等。,4.2,染色法：染色法是用化学剂在动物身体明显部位如被毛、四肢等处进行涂染，或用不同颜色等代表一定的编号，来区别各组动物，是实验室最常用、最容易掌握的方法。,4.2.1,常用染色剂：黄色：,3,5,苦味酸溶液,红色：,0.5,中性红或碱性品红溶液,咖啡色：,2,硝酸银溶液（涂后需光照,10,分钟）,黑色：煤焦油的酒精溶液,紫色：龙胆紫溶液,4.2.2,编号的原则：如动物数在,10,只以下，,在左前腿上为,1,，左腰部为,2,，左后腿为,3,，头部为,4,，背部为,5,，尾基部为,6,，右前腿为,7,，右腰部为,8,，右后腿为,9,。,如果动物编号超过,10,，需要编,10,100,号码时，可采用在上述动物的不同部位，,再涂染另一种涂染剂,(,如,0.5,中性红或品红溶液,),斑点，,即表示相应的十位数，即左前腿上为,10,，左腰部为,20,。如在左前腿上标记红色和黄色斑点，表示为,11,，如果红色标记在左前腿上，而黄色标记在左腰部，是,12,，以此类推。如图。本设施大小鼠采用染色法编号标记。,4.3,烙印法：用刺数钳在动物耳上刺上号码，然后用棉签蘸着溶在酒精中的墨黑在刺号上加以涂抹，烙印前最好对烙印部位预先用酒精消毒。,4.4,号牌法：用金属制号牌固定于实验动物的耳上或系颈上。耳标签、项圈、腿圈，中、大型动物。,4.5,鼠尾标记编号,用苦味酸溶液涂擦在鼠尾部,(,图,),。,4.6,孔法或剪口法：,耳孔法是用打孔机直接在实验动物的耳朵上打孔编号，根据打在动物耳朵上的部位和孔的多少，来区分实验动物的方法。用打孔机在耳朵打孔后，必须用消毒过的滑石粉抹在打孔局部，以免伤口愈合过程中将耳孔闭合。耳孔法可标记三位数之内的号码。另一种耳孔法是用剪刀在实验动物的耳边上剪缺口的方法，作为区分实验动物的标记。,打耳孔法：小型动物,4.7,剪趾法：小型动物,第四节 分组,随机化分组,避免人为影响,例：将,14,只小鼠随机分成两组。,先将小鼠编为,1,14,号，,在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄,14,个随机数字。编排如下：,动物编号,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14,随机数字,16 22 77 94 39 49 54 43 54 82 17 37 93 23,归 组,B B A B A A B A B B A A A A,奇数代表,A,织，偶数代表,B,组,A,组：,3 5 6 8 11 12 13 14,B,组：,1 2 4 7 9 10,调整分组：接刚才随机数字,23,继续抄表得随机数字,78,，用,78,除以,8,（因为需要把,A,组的,8,个数字调整掉一个），得余数,6,，所以把,A,组的第,6,个动物，即,12,号动物调整到,B,组,最终分组,A,组：,3 5 6 8 11 13 14,B,组：,1 2 4 7 9 10 12,例：,12,只大鼠随机分为,3,组,大鼠编号,112,在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄,12,个随机数字,每个数分别用,3,除，记录余数,根据余数分组,大鼠编号：,1,，,2,，,3,，,4,，,5,，,6,，,7,，,8,，,9,，,10,，,11,，,12,随机数字：,08,，,27,，,01,，,50,，,15,，,29,，,39,，,39,，,43,，,79,，,69,，,10,余数：,2,，,0,，,1,，,2,，,0,，,2,，,0,，,0,，,1,，,1,，,0,，,1,组别：,B,，,C,，,A,，,B,，,C,，,B,，,C,，,C,，,A,，,A,，,C,，,A,A,：,3,，,9,，,10,，,12,B,；,1,，,4,，,6,C,：,2,，,5,，,7,，,8,，,11,调整分组：接刚才随机数字,10,继续抄表得随机数字,61,，用,61,除以,5,（因为需要把,C,组的,5,个数字调整掉一个），得余数,1,，所以把,C,组的第,1,个动物，即,2,号动物调整到,B,组。,最终分组,A,：,3,，,9,，,10,，,12,B,；,1,，,2,，,4,，,6,C,：,5,，,7,，,8,，,11,第五节 去毛,1,、剪毛：弯头剪毛剪。,2,、拔毛：大小鼠尾静脉、家兔耳缘静脉注射。,3,、剃毛：将剃毛部位先用剪刀粗剪一遍，蘸温肥皂水润湿，用剃刀顺着被毛方向剃毛，用电动剃毛推剪，则逆被毛向剃毛。,4,、化学脱毛：,常用脱毛剂,8%,硫化钠水溶液,硫化钠,3,份，洗衣粉,1,份、淀粉,7,份，加水调成糊状,硫化钡,50,克，氧化锌,25,克，淀粉,25,克，加水,100,毫升调成糊状,硫化钠,10,克，生石灰,15,克，加水到,100,毫升，适合犬和其他大动物。,第六节,实验动物的给药途径与方法,注射法,胃肠给药法,用于皮肤的涂布给药法,用于呼吸道的吸入给药法,在实验过程中，应根据实验目的、动物种类、药物类型选择给药途径和方法，若是临床前药物的动物实验，给药方法应与人的给药途径一致。,实验动物的给药方法,一,、,注射,皮内注射,皮下注射,肌肉注射,腹腔注射,静脉注射,脑膜下注射,脑内注射,胸腔内注射,腰椎内注射,关节腔注射,心内注射,皮内注射,(i.d),一般用于接种或过敏实验。将药液注射在真皮和表皮之间。,皮内注射时需将注射的局部脱去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮肤并使之绷紧，在两指之间，用注射器连,4(1/2),号细针头，紧贴皮肤表层刺入皮内，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射药液，此时可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。,皮下注射,(s.c),注射时以左手拇指和食指提起皮肤，将连有,5,（,1/2,）号针头的注射器刺入皮下。,注射量：,0.1ml,0.3ml,10,g,体重。,皮下注射部位：,狗、猫 大腿外侧,豚鼠 后大腿的内侧或小腹部,鼠 侧下腹部,兔 背部或耳根部,蛙 脊背部淋巴腔,肌肉注射,(i.m),原理：将药液注入动物的肌肉组织，经毛细血管吸收进入血液循环。,器材：,1ml,注射器,1,支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。,注射部位：一般选择,肌肉丰富而无大血管通过的臀部或大腿外侧,，回抽无血即可注射。,腹腔注射,(i.p),用大、小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推,0.5,1.0cm,，再以,45,度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液，,为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。若实验动物为家兔，进针部位为下腹部的腹白线离开,1cm,处。,1,、小鼠：尾静脉,2,、大鼠：尾静脉、,阴茎静脉、,舌下静脉、,浅背侧跖静脉,静脉注射,(i.v),大小鼠有上、左、右,3,根尾静脉，成品字型,小鼠尾静脉注射,1,2,3,4,平行下针,保定小鼠，静脉扩张,回血,打入，完成,大鼠阴茎静脉注射,大鼠舌下静脉注射,大鼠浅背侧跖静脉注射,3,、豚鼠：浅背侧跖静脉、耳静脉注射,4,、家兔：耳静脉注射,5,、猪：耳缘静脉,6,、猴：前肢桡静脉、后肢隐静脉注射,兔耳缘静脉注射,7,、猫、狗：前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉注射,猴的后肢皮下静脉注射,二、,胃肠给药法,自动口服给药,加入饲料或饮水,掰开口，放到舌根部,灌胃给药,直肠给药,灌胃（,i.g),1,、小鼠、大鼠、豚鼠,灌胃时将灌胃针按在注射器上，吸入药液。,左手抓住鼠背部及颈部皮肤将动物固定，右手持注射器，将灌胃针插入动物口中，沿咽后壁徐徐插入食道。动物应固定成垂直体位，针插入时应无阻力。若感到阻力或动物挣扎时，应立即停止进针或将针拔出，以兔损伤或穿破食道以及误入气管。,一般当灌胃针插入小鼠,3,4cm,，大鼠或豚鼠,4,6cm,后可将药物注入。常用的灌胃量小鼠为,0.2,1ml,，大鼠,1,4ml,，豚鼠为,1,5ml,。,2,、狗、兔、猫、猴,灌胃时，先将动物固定，再将特制的扩口器放入动物口中，扩口器之宽度可视动物口腔大小而定，如狗的扩口器可用木料制成长方形，长约,10,15cm,，粗细应适合狗嘴，约,2,3cm,，中间粘一小孔，孔的直途为,5,10cm,。,灌胃时将扩口器放于上述动物上下门牙之后，并用绳将它固定于嘴部，将带有弹性的橡皮导管（如导尿管），经扩口器上的小圆孔插入，沿咽后壁而进入食道，此时应检查导管是否正确插入食道，可将导管外口置于一盛水的烧杯中，如不发生气泡，即认为此导管是在食道中，未误入气管，即可将药液灌入。灌胃管插入长度狗为,20cm,，兔子为,12-15cm,。,动物最大灌胃量,97,第七节 采血方法,实验动物的采血方法很多，按采血部位不同，可分为：,尾部采血、耳部采血、眼部采血、心脏采血、大血管采血,等。,具体而言，,主要包括剪尾采血、鼠尾刺血、眼眶静脉丛采血、断头采血、心脏采血、颈静（动）脉采血,等等。,选择什么采血部位与使用何种采血方法，需视,动物种类、检测目的、试验方法,及,所需血量,而定。,1.,小鼠、大鼠采血法,（,1,）尾静脉采血法：用血量不多时，可采用本法。,A.,剪尾或切开尾静脉,动物固定后，露出尾巴，使尾部血管扩张，擦干，剪去尾尖（小鼠约,1-2mm,，大鼠,5-10mm,），血自尾尖流出，让血液滴入盛器或直接用吸管吸取。也可切开尾静脉一段，用试管等接住血液。,该法可反复多次使用。,0.5 C.C.,割沿着肛门下来的 尾动脉,B.,针刺尾静脉,固定动物，消毒，擦干。操作时，在尾尖部向上数厘米处用拇指和食指抓住，对准尾静脉用注射器刺入后立即拔出。采血后用压迫止血法进行止血。,如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。,尾部采血,（,2,）心脏采血,将动物仰卧固定在鼠板上，剪去胸前区部位的被毛，消毒。在左侧第,3-4,肋间，用左手食指摸到心搏处，右手持注射器选择心搏最强处穿刺。,当针穿刺入心脏时，血液由于心脏搏动的力量自动进入注射器。,心脏采血注意要点,A.,要迅速而直接插入心脏，否则心脏将从针尖移开。,B.,如果第一次没有刺准，将针头拔出重刺，但不要在心脏周围乱探，以免顺上心、肺。,C.,要缓慢而稳定地抽吸，否则太多的真空反而使心脏塌陷。,如不需保留动物存活时，也可麻醉后切开动物胸膛，直接用注射器刺入心脏内采血，也可剪破心脏直接用注射器或吸管吸血。,（,3,）摘眼球采血,此法常用于鼠类大量采血。所采的血液微眶动脉和眶静脉的混合血。,采血时，用左手抓住动物颈部皮肤，并将动物轻压在实验台上，稍微侧卧，左手拇指尽量将动物眼周围皮肤往眼后压，是动物眼球突出并充血，用弯头镊子迅速摘除眼球，眼眶内很快流出血液。,该法可避免断头取血时因组织液混入所导致的溶血现象，且由于取血过程中动物未死，心脏还在跳动，因此取血量多于断头法。,一般可取约为小鼠体重,4-5%,的血液量。,但该方法易导致动物死亡，只能一次采血。,（,4,）眶静脉丛（窦）采血,小鼠为眶静脉窦，大鼠、地鼠、沙鼠等位眶静脉丛。,将动物麻醉，采用侧眼向上固定体位，用左手拇指和食指从背部较紧地握住大（小）鼠颈部。取血时，左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，是头部静脉血液回流困难，眼球充分外突，眶静脉丛充血。,小鼠,0.2,0.3ml,大鼠,0.4,0.6ml,右手持注射器或长颈硬质毛细玻璃管将采血管与鼠成,45,角，在泪腺区域内，用采血管有眼内角在眼睑和眼球之间相喉头方向刺入，若为针头，其斜面先向眼球，刺入后再转,180,角使斜面对着眼眶后界。由于血压的关系，血液即自动流入玻璃管中，得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时拔出采血量。,刺入深度：小鼠约,2-3mm,，大鼠约,4-5mm,，达到蝶骨后管道阻力，再稍后退,0.1-0.5mm,。,2.,兔的采血方法,（,1,）耳缘静脉采血,将兔固定后选耳静脉清晰的耳朵，将耳静脉部位的,毛拔去,，用,75%,酒精,局部消毒,，待干。用手指轻轻摩擦兔耳，使,静脉扩张,，用注射器在耳缘静脉末端,刺破,血管待血液漏出取血或将针头逆血流方向,刺入耳,缘静脉取血，取血完毕用棉球,压迫止血,。,此种采血法一次最多可采血,5-10ml,。,(2),耳中央动脉采血,经兔耳中央的一条较粗、颜色鲜红的动脉采血，可采到约,10-15 ml/,次血。操作方法基本与静脉采血同。由动脉末端，朝向心方向进针，取血完毕后注意止血。,注意事项：,不要在耳近根部进针，因其耳根部组织较厚，血管游离，位置较深，不清晰，易刺透血管造成皮下处血。,兔胆小易惊，其外周血液循环对外界环境刺激极为敏感，耳中央动脉易发生痉挛性收缩，因此，抽血前必须让兔耳充血，并赶在动脉扩张，而未发生痉挛性收缩前立即抽血。,（,3,）心脏采血,方法同小鼠心脏采血。,可用于一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。,一次性开胸采血可得到,80,100ml,血量,3.,豚鼠：,1,）心脏采血：可用于一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。一次性开胸采血可得到,5,10ml,血量。,2,）背跖静脉采血：用于少量反复采血。,3,）耳缘剪口采血,4.,犬猫：和静脉注射部位相同，前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉。也可颈静脉（动脉）或心脏采血。,5.,猪：前腔静脉或耳大静脉采血,6.,羊：颈静脉采血,7.,猴：前肢头静脉、后肢皮下静脉或耳缘静脉等。,8.,禽类：翼下静脉,仔猪前腔静脉采血,（一）,采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在,25,28,，冬季，,15,20,为宜；,（二）,采血用具有采用部位一般需要进行消毒；,（三）,采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；,（四）,若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。,（五）,注意不同动物的采血量采血。,采血注意事项,部 位,动物种类,尾静脉,大鼠、小鼠,耳静脉,兔、狗、猫、猪、山羊、绵羊,眼底静脉丛,兔、大鼠、小鼠,d,舌下静脉,兔,e,腹壁静脉,青蛙、蟾蜍,f,冠、脚蹼皮下静脉,鸡、鸭、鹅,、取少量血,、取中量血,部 位,动物种类,后肢外侧皮下小隐静脉,狗、猴、猫,前肢内侧皮下头静脉,狗、猴、猫,耳中央动脉,兔,颈静脉,狗、猫、兔,心脏,豚鼠、大鼠、小鼠,断头,大鼠、小鼠,翼下静脉,鸡、鸭、鸽、鹅,颈动脉,鸡、鸭、鸽、鹅,、取大量血,部 位,动物种类,股动脉、颈动脉,狗、猴、猫、兔,心脏,狗、猴、猫、兔,颈静脉,马、牛、山羊、绵羊,摘眼球,大鼠、小鼠,4,、最大安全采血量与最小致死采血量,动物种类,最大安全采,血量,(ml),最小致死采,血量,(ml),小鼠,0.2,0.3,大鼠,1,2,豚鼠,5,10,兔,10,40,狼狗,100,500,猎狗,50,200,猴,15,60,实验动物循环血量,取血量上限及恢复时间,1,、肝素：抑制凝血酶活力，阻止血小板凝集。纯品肝素,1mg,125U,，,10U20U,抗,1ml,血凝集，但通常应用,23,倍剂量。,用法：可配成,1%,肝素溶液，用时取,0.1ml,于试管内，,100,烘干，每管可抗凝,510ml,血。或用,1%,肝素溶液湿润采血注射器。,肝素可改变蛋白质等电点，当用,盐析法分离蛋白作分类测定,时，不可用肝素抗凝。,常用抗凝剂,2,、枸橼酸钠：使凝血必需的钙离子失活。常用,35%,水溶液，碱性较强。,3,、草酸盐合剂：草酸铵,1.2g,，草酸钾,0.8g,，福尔马林,1.0ml,，加蒸馏水至,100ml,。使凝血必需的钙离子失活。每毫升血加草酸盐合剂,0.1ml,。,4,、氟化钠：每毫升血加,6mg,。,1,、胸水、腹水采集：穿刺,2,、消化液采集：唾液，胃液，胰液，胆汁,3,、精液采集：中、大动物用假阴道，小动物穿刺附睾来采集精液。,4,、脑脊液采集：手术或小脑延髓池抽取,5,、,骨髓采集：大动物活体穿刺，小动物处死后取股骨或胸骨骨髓。,其他体液采集,6,、尿液采集：,代谢笼收集,特点是能将动物排泄的大小便分开，达到采集尿液的目的。,大鼠、小鼠、豚鼠、兔等中小型动物的尿液采集。,导尿管采集,在动物的尿道或输尿管内插一根塑料导管采集尿液。,适用于兔、犬、猫等,膀胱穿刺,压迫排尿,第八节 实验动物的麻醉方法,麻醉类型及方法,实验动物的麻醉分为,全身麻醉,和,局部麻醉两种,类型。,（一）全身麻醉：,指麻醉药通过呼吸道吸入，静脉、肌肉或腹腔注射，使动物产生短时间的意识丧失，痛觉消失，肌肉松弛和反射抑制等中枢神经系统抑制现象。,分为吸入麻醉和注射麻醉。,1,吸入麻醉,指挥发性麻醉剂经动物呼吸道吸入体内从而产生麻醉效果的方法,。常见的吸入麻醉剂有,乙醚,。,1,）,准备容器,:,小型实验动物,:,5000ml,标本瓶,1,个,50ml,试管或离心管,1,个,。,如鼠类,中型实验动物,:,适当大小的玻璃箱,1,个,如猫、兔,大体形动物,:,麻醉口罩,。,如犬,（,1,）步骤与方法：,2,）操作步骤,:,放入挥发性麻醉剂,-,放入动物,-,密闭,4-6,分钟,-,麻醉,-,实验,-,小容器追加麻醉,.,吸入麻醉的注意事项,A,、容器密封性。,B,、防止麻醉窒息和过量。,C,、适时追加麻醉。,注射麻醉,通过注射的方法，将麻醉剂注入动物的体内，使动物进入麻醉状态的方法,静脉注射,肌肉注射,腹腔注射,麻醉前准备,1,、大动物禁食,8,12h,，防止呕吐，可饮水。,2,、根据实验部位和种类，给动物脱毛。,3,、犬、猪、猴等大动物可在麻醉前给予一些药物以减少动物紧张，减少支气管分泌。,（,1,）步骤与方法：,1,）准备器械,:,注射器,2),注射麻醉方法：,腹腔注射：固定动物,-,头下位,-,腹部后,1/3,处靠外侧。,静脉注射：固定动物,-,血管,-,注射,肌肉注射：固定动物,-,肌肉发达处,-,注射,(2),注射麻醉的注意事项：,A,、腹腔注射时使动物的头处于低位，使内脏向上腹移动，可避免注射时伤及内脏。,B,、静脉注射必须缓慢，过快会引起麻醉意外。,C,、肌肉注射应在肌肉较发达的部位注射，有利于麻醉剂的吸收。,腹腔注射、肌肉注射和静脉注射麻醉动物各有优缺点，应根据麻醉剂的特性，动物解剖特点选择方法简单，麻醉效果好的注射方法。,麻醉药物,1,、全麻药物,（,1,）乙醚：强挥发性、易燃。乙醚是最常用的吸入麻醉剂，各种动物适用。,机制：抑制中枢神经系统。,特点：,安全范围大，肌肉完全松弛，对肝肾毒性小，麻醉诱导期和苏醒期较长。,副作用：局部刺激大，引起上呼,吸道黏膜分泌增加，导致呼吸道,阻塞，可用阿托品对抗解救。,（,2,）巴比妥类：种类很多，有巴比妥钠，戊巴比妥钠，硫喷妥那，苯巴比妥钠等。适用于各种动物。如实验中大小鼠常用,3,戊巴比妥钠溶液腹腔注射进行麻醉。,特点：,安全范围广，毒性小，麻醉潜伏期短，麻醉维持时间长。可腹腔或静脉给药。,机理：阻断神经冲动传递到大脑。,副作用：过量使用可导致呼吸肌麻痹而死亡，同时抑制末梢循环，导致血压降低，并影响基础代谢，导致体温降低。,（,3,）氯胺酮：常用其盐酸盐。,特点：,麻醉潜伏期短，麻醉维持期仅,1020min,，麻醉浅，安全性高，可重复给药。,机制：阻断大脑联络途径。,副作用：兴奋心血管系统，使血压升高，心率加快，偶尔引起呕吐。,（,4,）水合氯醛：,作用特点和巴比妥类相似。但安全范围小，麻醉剂量和中毒剂量接近，对皮肤和黏膜有较强刺激。,2,、局麻药物,（,1,）普鲁卡因：是无刺激性的局麻药物。,特点：,麻醉速度快，注射后,13,分钟就可产生麻醉。可以维持,3045,分钟。,对皮肤和黏膜穿透力很弱，需要注射给药才能产生局麻效果。它可以使血管舒张，易被吸收入血液而失去效果。,在其溶液中加入肾上腺素（每,100ml,加入,0.1%,肾上腺素,0.20.5ml,）可以使麻醉时间延长,12,小时。,（,2,）利多卡因：效力和穿透力比普鲁卡因强。,（,3,）的卡因：化学结构和普鲁卡因类似，效力和穿透力比普鲁卡因强。,动物的麻醉效果直接影响实验的进行和实验结果。在麻醉过程中必须善于判断麻醉程度，观察麻醉效果。判断麻醉程度的指标有：,（,1,）,呼吸,：加快或不规则，则麻醉过浅，可再追加麻醉，若呼吸由不规则转变为规则且平稳，说明已达到麻醉深度。若动物呼吸变慢，说明麻醉过深，动物有生命危险。,麻醉效果的观察,（,2,）,反射活动,：角膜反射灵敏，则麻醉过浅；反射迟钝，麻醉程度适宜；反射消失，伴瞳孔散大，则麻醉过深。,（,3,）,肌张力,：亢进，麻醉过浅；全身肌肉松弛，麻醉合适。,（,4,）,皮肤夹捏反应,：麻醉过程中可随时用止血钳或有齿镊夹捏动物皮肤，若反应灵敏，则麻醉过浅；若反应消失，则麻醉程度合适。,使用全身麻醉剂的注意事项,给动物施行麻醉术时，一定要注意方法的可靠性，根据不同的动物选择合适的方法，特别是较贵重的大型动物。,（,1,）,麻醉剂的用量,，除参照一般标准外，还应考虑个体对药物的耐受性不同，而且体重与所需剂量的关系也并不是绝对成正比的。一般说，衰弱和过胖的动物，其单位体重所需剂量较小，在使用麻醉剂过程中，随时检查动物的反应情况，尤其是采用静脉注射，绝不可将按体重计算出的用量匆忙进行注射。,（,2,）动物在麻醉期体温容易下降，要采取,保温措施,。,（,3,）静脉注射必须,缓慢,，同时观察肌肉紧张、角膜反射和对皮肤夹捏的反应，当这些活动明显减弱或消失时，应立即停止注射。配制的药液浓度要适中不可过高，以免麻醉过急；但也不能过低，以减少注入溶液的体积。,常用实验动物全身麻醉药及用法和剂量,药物,适用动物,给药途径,给药剂量 （,mg/kg,）,给药体积（,ml/kg,）,配制浓度（,%,）,麻醉维持时间,戊巴比妥钠,大、小鼠,腹腔,45,3.8-7.5,1.2-0.6,2-4h,，中途加,1/5,量，可延长麻醉时间,1h,以上。,静脉,30,1.2-0.6,豚鼠,腹腔,40-50,2.0-2.5,2,静脉,30,犬、猫、兔,腹腔,40-50,1.4-1.7,3,静脉,30,1.0,3,绵羊,静脉,30,3,山羊,静脉,30,3,猪,静脉,15,3,猴,静脉,35,3,速眠新,ml/kg,大、小鼠,肌肉,0.3-0.8,1h-2h,兔,肌肉,0.2-0.3,杂种犬,肌肉,0.1-0.15,纯种犬,肌肉,0.04-0.08,猪,肌肉,0.1-0.15,羊,肌肉,0.1-0.15,硫喷妥钠,小鼠,腹腔,50,1,15-30min,静脉,25,1,大鼠、地鼠,腹腔,40,5-10,1,静脉,20,5-10,1,豚鼠,腹腔,55,静脉,20,犬,静脉,20-25,1.3-2.5,2,猫,静脉,28,1.3-2.5,2,兔,静脉,20,1.3-2.5,2,猪,45kg,静脉,9-10,2,猪,45kg,静脉,5,2,猴,静脉,25,腹腔,60,盐酸氯胺酮,大、小鼠,肌肉、腹腔,22-44,10-20min,猫、犬、猴,肌肉,10-40,猪,肌肉,10-15,氨基甲酸乙脂 （乌拉坦,大、小鼠,肌肉、腹腔,1350,7,0,20-25,2-4h,兔、猫、犬,静脉,750-1000,3-4,25,直肠,1500,6,0,25,乙醚,各种动物,吸入,第九节 安乐死,1,、吸入二氧化碳颈椎脱臼法：,小鼠、大鼠,处死方法,2,、空气栓塞法：,兔、猫、犬等大动物,一般兔、猫等静脉内注入,20,40ml,空气即可致死。每条狗由前肢或后肢皮下静脉注入,80,150ml,空气，可很快致死。,3,、麻醉法放血法：,如注射巴比妥类药物心脏放血或大血管放血,动物十分安静，对脏器无损伤，对活杀采集病理切片标本是一种较好的方法。,处死方法,</p>