专题二微生物的实验室培养.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,到目前为止，几十项,Nobel,生理学和医学奖，化学奖 都与微生物学有关,课题1 微生物的实验室培养,专题,2:,微生物的培养与应用,微生物的分类,原生生物界,原核生物界,真菌界,变形虫、草履虫、衣藻,酵母菌、青霉菌、根霉菌,细 菌,放线菌,蓝 藻,支原体,衣原体,病 毒,无细胞结构,微生物基础知识,特点：,结构都相当简单,个体多数十分微小,.,通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构,.,且体内一般不含有叶绿素,.,不能进行光合作用,.,微生物包含了除,植物界,和,动物界,以外的所有生物,无细胞结构,原核细胞,真核细胞,细菌的外形与大小,图,1-1,常见的三种细菌典型形态,球菌（,coccus),杆菌（,bacilus),螺旋菌,观察细菌常用光学显微镜,以微米,(1um=1/1000mm),作为测量它们大小的单位。肉眼的最小分辨率为,0.2mm,观察细菌要用光学显微镜放大几百倍到上千倍才能看到。,细菌的结构,细胞质,核区,质粒,鞭毛,细胞壁,细胞膜,液泡,荚膜,菌毛,细菌的结构,基本结构,细胞壁：肽聚糖，保护,细胞膜,细胞质,(,核糖体、质粒,:,控制抗药性固氮抗生素形成,),核区：未成形的细胞核,(,拟核,),特殊结构,荚膜：粘性，保护作用,鞭毛：运动器官,芽孢：细菌休眠体，对恶劣的环境有抵抗力,细 菌,菌落,细菌的菌落特征因种而异,如：无鞭毛,的球菌，常形成较小较厚边缘较整齐的菌落，,有鞭毛,细菌形成大而扁平、边缘波浪或锯齿状菌落,放线菌,1,、结构：,单细胞原核,分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）,链霉素、土霉素、四环素、,氯霉素、红霉素、庆大霉素,微生物中发现了几千种抗生素，其中,2/3,是,由放线菌产生的,应用,:,病毒的结构,病毒,SARS,病毒、禽流感病毒,朊病毒（蛋白质病毒）,2,、病毒的增殖：,真菌,如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构,酵母菌和霉菌,青霉,1.,何为培养基？,3.,不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养元素？有何作用？请举例说明。,阅读教材,P14,15,相关内容，回答以下问题：,2.,按照不同的培养基划分标准，培养基有哪些种类、配制特点及其应用？,（一）培养基,一、基础知识：,（一）培养基,培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。,1.,培养基的类型和用途,根据,物理状态,分,固体培养基,纯化，增菌,半固体培养基,动力检测，保种,液体培养基,增菌,根据,化学成分,分,合成培养基,成分明确,常用于分类,鉴定,天然培养基,成分不明确,常用于工业生产,根据,功能,分,选择培养基,用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基,在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长,如：加高浓度的食盐,抑制多种细菌生长,分离到金黄色葡萄球菌,鉴别培养基,在培养基中加入某种,指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物,如：伊红和美蓝,和大肠杆菌的代谢产物结合,使菌落呈,深紫色,并带有金属光泽,可以用来鉴别大肠杆菌,基础培养基,含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）,选择培养基,加入青霉素的培养基,分离酵母菌、霉菌等真菌,加入高浓度食盐的培养基,分离金黄色葡萄球菌,不加氮源的无氮培养基,分离固氮菌,不加含碳有机物的无碳培养基,分离自养型微生物,加入青霉素等抗生素的培养基,分离导入了目的基因的受体细胞,液体培养基,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,固体培养基：菌落，菌苔,固体培养基,液体培养基,有,无,凝固剂琼脂,半固体培养基,无动力 有动力,(,弥散,),(,是否运动？,),【,例,】,以下是单克隆抗体制备流程示意图：,根据培养基的,_,分类，图中,HAT,培养基属于,_,培养基,选择,用途,2.,不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方,(,参考教材附录内容,),3.,不管哪种培养基，一般都含有,水,、,碳源,、和,氮源,、,无机盐,、,等,营养物质，另外还需要满足微生物生长对,pH,、,特殊营养物质,例如,:,生长因子,(,即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶,),以及,氧气,、,二氧化碳,、,渗透压,等的要求。,碳源,无机碳源：,有机碳源：,CO,2,、,CO,3,2,-,、,HCO,3,-,牛肉膏、蛋白胨等,自养微生物,异养微生物,氮源,无机氮源：,有机氮源：,N,2,、,NH,4,+,、,NO,3,-,、,NH,3,等,牛肉膏蛋白胨、酵母膏、尿素等,注：含,CHON,的,有机物,是,异,养型微生物的,碳源,、,氮源,、,能源,主要用于合成蛋白质、核酸及含,N,的代谢产物,合成微生物的细胞物质和一些代谢产物,异养微生物的能源,微生物生长不可缺少的,微量有机物,如：,维生素、氨基酸、碱基,等,生长因子：,牛肉膏当中含有,肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类。,的水溶性物质。,牛肉膏为微生物提供碳源、氮源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供,氮源,和,维生素,。,氮源、能源、生长因子,碳源、能源、生长因子,培养基配置原则,目的明确,营养协调,理化条件适宜,经济节约,根据不同的微生物的营养要求配制针对强的培养基。,培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累,如：,pH,练习,1,（多项选择）,1,、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是,A,光合细菌,B,根瘤菌,C,硝化细菌,D,乳酸菌,2,、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源是,A,糖、有机酸等,B,二氧化碳、碳酸盐,C,蛋白质,D,无机氮化物,3,、下列叙述不正确的是,A,培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质,B,液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同,C,微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌,A.C,A.C,B.C.,1.,何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？,2.,什么是消毒？灭菌？两者有何区别？,3.,常用的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求？,4.,请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。,（二）无菌技术,1.,无菌技术的概念,无菌操作泛指,在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。,无论是随后将要学到的,倒平板,、,平板划线,操作，还是,平板稀释涂布法,，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。,二、无菌技术,（,1,）对实验操作的,空间、操作者的衣着和手,，进行,清洁和消毒,。,（,2,）将用于微生物培养的,器皿、接种用具和培养基,等器具进行灭菌。,（,3,）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在,酒精灯火焰附近,进行。,（,4,）实验操作时应避免已经,灭菌处理的材料用具,与周围的物品相接触。,【2010,广州调研,】,下列实验方法及其结果合理的是,A,稀释的鸡蛋清溶液与蛋白酶混合后用双缩脲试剂检测会发生紫色反应,B,酒精溶液与重铬酸钾溶液混合后在沸水浴条件下才会出现灰绿色,C,在植物组织培养中，可用酒精对外植体进行灭菌,D,用二苯胺试剂鉴定,DNA,时，在沸水浴条件下溶液呈蓝色,（双选）,（）,消毒定义：,利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。区分为,高程度消毒,（,High-level Disinfection,）、,中程度消毒,（,Intermediate-level Disinfection,）、,低程度消毒,（,Low-level Disinfection,）三种方式。,2.,消毒与灭菌的概念及两者的区别,（,2,）灭菌的定义：,以化学剂或物理方法消灭,所有,微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到,完全无菌,之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。,煮沸消毒法,:100,煮沸,5-6min,巴氏消毒法：,70,75,下煮,30min,或,80,下煮,15min,。,如牛奶的消毒,化学药剂消毒法,:,用,75%,酒精进行皮肤消毒,;,用氯气消毒水源等,紫外线消毒,(1),消毒的方法,3,.,常用的消毒与灭菌的方法,概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。,(,不包括芽孢和孢子,),灼烧灭菌,干热灭菌：,160,170,下加热,12h,。,高压蒸气灭菌：,100kPa,、,121,下维持,15,30min.,(2),灭菌的方法,概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。,灼烧灭菌,微生物的接种工具,(,接种环、接种针,),或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧,注意适用范围,干热灭菌,160,170,；,1,2h,能耐高温的需要保持干燥的物品,(,玻璃器，金属用具,),高压蒸汽灭菌,100kPa 121,15-30min,通常用于培养基的灭菌，实验器具,煮沸,消毒,法,巴氏消毒法,化学药剂（,70%,酒精等）,紫外线,针对不耐高温的液体,接种室、超净工作台,能耐高温的，需要保持干燥的物品,灼烧法,干热灭菌,高压蒸汽灭菌,接种工具（接种环等）,吸管,实验操作者的双手,培养皿等玻璃器皿,培养基,1,、消毒方法,2,、灭菌方法,干热灭菌,最常用的灭菌方法是,高压蒸汽灭菌,，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。,有些玻璃器皿也可采用,高温干热灭菌,。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。,分类,定义,方法,灭菌法,杀灭一切微生物,物理法：热力、辐射、微波、等离子体,化学法：醛类、烷化剂,高效消毒法,杀灭一切致病微生物,紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等,中效消毒法,杀灭除芽孢外的致病微生物,超声波、碘类、醇类、酚类,低效消毒法,杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒,单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子,无菌技术,思考,:,1),消毒和灭菌有何不同？,2),为什么消毒牛奶要用巴氏消毒法,?,消毒,灭菌,条件,温和,强烈,作用,范围,物体表面或内部一部分,不包括芽孢和孢子,物体内外所有微生物,包括芽孢和孢子,营养成分不被破坏,1.,无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？,2.,请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。,（,1,）培养细菌用的培养基与培养皿,（,2,）玻棒、试管、烧瓶和吸管,（,3,）实验操作者的双手,答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。,答：（,1,）、（,2,）需要灭菌；（,3,）需要消毒,。,旁栏思考,编号,成分,含量,粉状硫,10g,（NH,4,）,2,SO,4,0.4g,K,2,HPO,4,4.0g,MgSO,4,9.25g,FeSO,4,0.5g,CaCl,2,0.5g,H,2,O,100ml,右表是某微生物培养基成分，请据此回答：,（,1,）右表培养基可培养的微生物类型是,。,（,2,）若不慎将过量,NaCl,加入培养基中。,如不想浪费此培养基，可再加入,。,自养型微生物,含碳有机物,（,3,）若除去成分，加（,CH2O,），,该培养基可用于培养,。,（,4,）表中营养成分共有,类。,（,5,）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行是,。,（,6,）右表中各成分重量确定的原则是,。,（,7,）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是,。,固氮微生物,3,调整,pH,依微生物的生长需要确定,琼脂（或凝固剂）,三,.,微生物实验室培养的基本操作程序,1,、器具的灭菌,2,、培养基的配制,3,、培养基的灭菌,4,、倒平板,5,、微生物接种,6,、恒温箱中培养,7,、菌种的保存,实验操作,(,一,),制备牛肉膏蛋白胨培养基,(,用于培养细菌,),牛肉膏蛋白胨固体培养基配方,牛肉膏,5.0g,蛋白胨,10.0g,NaCl 5.0g,琼脂,20.0g,将上述物质溶解后，添加自来水，定容至,1000mL,1.,计算：,培养基用量,依配方计算各成分的用量,2.,称量：,3.,溶化：,牛肉膏黏稠，用称量纸称取,牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖,先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至,100mL,。,4.,调,pH,、分装、封口：,操作步骤,分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。,5,灭菌,:,将,50ml,培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为,100kPa,、温度为,121,，灭菌,15,30min,。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在,160,170,下灭菌,2h,。,6,倒平板,:,待培养基冷却到,50,左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）,2d,后观察平板，无杂菌污染才可用来接种,.,7,无菌检查：,将灭菌的培养基放入,37,的温室中培养,2448,小时，以检查灭菌是否彻底。,倒平板技术,1.,将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。,1,2,3,4,倒平板技术,2.,右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。,1,2,3,4,倒平板技术,1,2,3,4,3.,用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基,(,约,1020mL),倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。,倒平板技术,1,2,3,4,4.,等待平板冷却凝固，大约需,510min,。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。,1.,培养基灭菌后，需要冷却到,50,左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,问题讨论,2.,为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,3.,平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,4.,在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,【,例,2】,进行细菌接种培养实验时，以下哪个操作步骤是非必要的？,A,双手带上胶手套,B,接种前后都灼烧接种环,C,接种前后都灼烧菌种试管口和待接种斜面,试管口,D,要丢弃带菌培养基前，进行高压蒸汽灭菌,或加热灭菌,（二）纯化大肠杆菌,接种方法有：,平板划线法和稀释涂布平板法,微生物的接种技术：,1.,平板划线法,通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。,在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称,菌落,。,平板划线的操作方法,一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；,二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。,一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；,二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。,问题讨论,1.,为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,2.,在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,3.,在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线,？,答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,稀释涂布平板法,将菌液进行,一系列的梯度稀释,，然后将不同稀释度的菌液分别,涂布到,琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成,单个的菌落,。,稀释涂布平板法,1.,将分别盛有,9mL,水的,6,支试管灭菌，并按,10,1,10,6,的顺序编号。,2.,用移液管吸取,1mL,培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。,3.,从,10,1,倍稀释的试管中吸取,1mL,稀释液，注入,10,2,倍稀释的试管中，重复第,2,步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。,注意：,移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰,12cm,处,.,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第,2,步应如何进行无菌操作？,应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,问题讨论,微生物的恒温培养,微生物的恒温培养,微生物的恒温培养,四、课题成果评价,（一）培养基的制作是否合格,如果未接种的培养基在恒温箱中保温,1,2 d,后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。,（二）接种操作是否符合无菌要求,如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习,。,（三）是否进行了及时细致的观察与记录,培养,12 h,与,24 h,后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。,随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。,这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。,4.,如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。,无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。,1.,试管低温临时保藏,将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，培养成菌落后，置于,4,O,C,的冰箱中保存（每隔,3,6,个月要重新接种培养后再保存）。,2.,甘油管长期保藏,在,3mL,的甘油瓶中加入,1mL,的甘油，高压灭菌。将,1mL,培养的菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于,20,O,C,的冷冻箱中保存。,五、课题延伸,-,菌种的保藏,本课题知识小结,:,2011,年新课标,39.,生物,选修,1,：生物技术实践,（,15,分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效,降解原油,的,菌株,。回答问题：,（,1,）在筛选过程中，应将,土壤样品稀释液,接种于以,_,为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于,_,培养基。,（,2,）纯化菌种时，,为了得到单菌落,，常采用的,接种方法,有两种，即,_,和,_,。,（,3,）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，,分解圈大,说明该菌株的降解能力,_,。,（,4,）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的,灭菌方法,有灼烧灭菌、,_,_,_,和,_,_,_,。,无菌技术,要求实验操作应在酒精灯,_,附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。,原油,选择,平板划线法,稀释涂布平板法,强,干热灭菌,高压蒸汽灭菌,火焰,39.【答案】（1）原油 选择 （2）平板划线法 稀释涂布平板法 （3）强,(1),（4）干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰,【解析】该同学筛选能降解原油的菌株，可以将样品稀释液置于以原油为唯一碳源的固体培养基中培养，该培养基功能上属于选择培养基。菌株的接种方法，常用的有两种：平板划线法和稀释涂布平板法。菌株分解周围的营养物质，出现分解圈，分解圈大说明该菌株的降解能力强。实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌；微生物的培养要求严格的无菌技术，操作时在酒精灯火焰附近进行，避免周围其他细菌的污染。,2010,年海南,25,（,18,分）选修模块,1,：生物技术实践,葡萄发酵可产生葡萄酒，请利用相关的知识回答问题：,（,1,）利用葡萄制作葡萄酒的过程中，发挥作用的微生物是。,（,2,）该微生物通过无氧呼吸可分解，产生的终产物是和。,（,3,）甲、乙、丙三位同学将葡萄榨成汁后分别装入相应的发酵瓶中，在温度等适宜的条件下进行发酵，如图所示。发酵过程中，每隔一段时间均需排气一次。据图分析，甲和丙同学的操作有误，其中甲同学的错误是,，,导致发酵中出现的主要异常现象是,。,丙同学的错误是,，,导致发酵中出现的主要异常现象是。上述发酵过程结束后，甲、乙、丙同学实际得到的发酵产品依次是,、。,（,4,）在上述制作葡萄酒的过程中，假设乙同学的某一步骤操作错误导致发酵瓶瓶塞被冲开，该操作错误是。,酵母菌,葡萄糖,乙醇,二氧化碳,未夹住发酵瓶的充气管,发酵液从充气管流出，导致发酵液变酸,瓶中发酵液过多，淹没了排气管在瓶内的管口,排气时发酵液从排气管流出,葡萄酒（果酒）,葡萄醋（果醋）,葡萄酒（果酒）,未及时排气,宁夏,2009,年,40.【,生物,选修,1,生物技术实践,】,（,15,分）,（,1,）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑,_,、,_,和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、,_,、,_,等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。,（,2,）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行,_,（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和,_,；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能,_,。,（,3,）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的,_,。,（,4,）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的,_,。,（,5,）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是,_ _,。,（,6,）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过,_,处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。,温度,酸碱度,易培养,生活周期短,灭菌,消毒,损伤,DNA,的结构,比例合适,鉴定,(,或分类,),将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生,.,灭菌,答案,:,（,1,）温度 酸碱度 易培养 生活周期短,（,2,）灭菌 消毒 损伤,DNA,的结构,（,3,）比例合适,（,4,）鉴定,(,或分类,),（,5,）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生,.,（,6,）灭菌,【,解析,】,（,1,）大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短,等优点，培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。,（,2,）灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,所以对培养基和培养皿进行灭菌,消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物,操作者的双手需要进行清洗和消毒,紫外线能使蛋白质变性，还能损伤,DNA,的结构,.,（,3,）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养,应保证样品稀释的比例适合,.,（,4,）对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定,.,（,5,）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生,.,（,6,）因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠管出现严重症状，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。,2008,年山东,34,（,8,分）,【,生物一生物技术实践,】,科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白。这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。,(l,）分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的,、大小及形状不同，在电场中的,不同而实现分离。,(2,）可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的体外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛肉膏和蛋白质主要为细菌生长提供,和,。,(3,）分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的,，确定该蛋白质的抗菌效果。,(4,）细菌培养常用的接种方法有,和,。实验结束后，对使用过的培养基应进行,处理。,(l）电荷（带电情况）迁移速度(2）碳源 氮源(3）数量(4）平板划线法 稀释涂布平板法（稀释混合平板法）灭菌,2007,年山东,34,（,8,分）,生物,生物技术实践,乙醇等“绿沟能源”的开发备受世界关注。利用玉米秸秆生产燃料酒精的大致流程为：,玉米秸杆糖液酒精,（,1,）玉米秸秆经预处理后，应该选用酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖，,（,2,）从以下哪些微生物中可以提取上述酶？（多选）,A,酶制果醋的醋酸菌,B,生长在腐木上的霉菌,C,制作酸奶的乳酸菌,D,生产味精的谷氨酸棒状杆菌,E,反刍动物瘤胃中生存的某些微生物,（,3,）若从土壤中分离产生这种酶的微生物，所需要的培养基为,（按功能分），培养基中的碳原为,。,（,4,）从生物体提取出的酶首先要检测，以便更好地将酶用于生产实践，在生产实践的过程中，为了使酶能够被反复利用，可采用,技术。,（,5,）发酵阶段需要的菌种是,，在产生酒精时要控制的必要条件是,。,纤维素（酶）,B,、,E,选择培养基 纤维素,34.,（,1,）纤维素（酶）,（,2,）,B,、,E,（,3,）选择培养基 纤维素,（,4,），酶的活力（活性）固定化酶（固定化细胞）,（,5,）酵母菌 无氧（密闭、密封）,2007,年宁夏,32,生物选考题（,15,分）,A,生物,选修,I,生物技术实践,某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。,（,1,）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了,_,和,_,。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是,_,和,_,。,（,2,）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是,_,。,（,3,）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于,_,中培养，培养的温度设定在,37,。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种,_,作为对照进行实验。,（,4,）培养,20,小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有,_,种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越,_,。,（,5,）如果提高培养基中,NaCl,的浓度，可以用于筛选耐,_,细菌，这种培养基被称为,_,。,氮源,碳源,无机盐、水,高压蒸汽灭菌,恒温培养箱,无菌水,多,；高,盐（或,NaCl,）,选择性培养基,A,生物,选修,1,生物技术实践,（,1,）氮源（碳源不作要求）碳源、无机盐、水,（,2,）高压蒸汽灭菌,（,3,）恒温培养箱 无菌水,（,4,）多；高,（,5,）盐（或,NaCl,），选择性培养基,