高考生物复习第十五单元生物技术实践第50课时DNA的粗提取与鉴定全国公开课一等奖百校联赛示范课赛课特.pptx

,考纲导学教材研读考点突破,栏目索引,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,考纲导学教材研读考点突破,栏目索引,考纲导学教材研读考点突破,栏目索引,*,*,考纲导学教材研读考点突破,栏目索引,*,*,考纲导学教材研读考点突破,栏目索引,*,*,考纲导学教材研读考点突破,栏目索引,*,*,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,江苏版 生物,第50课时DNA粗提取与判定,第1页,考纲内容,要求,命题特点,备考指南,DNA粗提取与判定,b,考查内容:DNA粗提取,与判定,考查形式:常以文字叙述,形式或结合试验装置图进行综合考查,(1)熟悉教材试验内容,了解试验原理、惯用试剂及其使用方法与目标,(2)联络DNA化学性质,通过试验操作,掌握提取DNA原理、方法步骤和注意事项等,(3)经过“DNA判定”实验,掌握判定DNA原理、方法和注意事项等,考点突破,第2页,考点一DNA粗提取与判定原理,1.提取生物大分子基本思绪,选取一定,方法分离含有不一样,生物大分子。,2.DNA溶解性,(1)利用DNA溶解性分离DNA,a.DNA和蛋白质等其它成份在不一样浓度NaCl溶液中溶解度,。,教材研读,物理或化学,物理或化学性质,不一样,第3页,b.选择适当盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以到达,目标。,(2)DNA,酒精溶液,不过细胞中一些蛋白质则,酒,精。利用这一原理,能够将,深入地分离。,3.DNA对酶、高温和洗涤剂耐受性,(1)蛋白酶能水解蛋白质,不过对DNA,影响。,(2)大多数蛋白质不能忍受6080 高温,而DNA在,以上才会,变性。,(3)洗涤剂能够瓦解,但对DNA,影响。,分离,溶于,不溶于,DNA与蛋白质,没有,80,细胞膜,没有,在,条件下,DNA与,反应展现,因,此,能够作为判定DNA试剂。,4.DNA判定,沸水浴,二苯胺,蓝色,二苯胺,第4页,考点二“DNA粗提取与判定”主要步骤及注意事项,1.试验材料选取:,选取DNA含量相对,生物组织。,2.破碎细胞,获取含DNA滤液,(1)动物细胞破碎以鸡血为例,在鸡血细胞液中加入一定量,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收,集,即可。,(2)植物细胞破碎以洋葱为例,先将洋葱切碎,然后加入一定,和,进行充分地,和,过滤后搜集,。,较高,蒸馏水,滤液,洗涤剂,食盐,搅拌,研磨,研磨液,第5页,(1)方案一:利用DNA在不一样浓度NaCl溶液中溶解度不一样,经过控制,NaCl溶液,去除杂质。,(2)方案二:直接在滤液中加入嫩肉粉,反应1015 min,嫩肉粉中,能够分解蛋白质。,(3)方案三:将滤液放在6075 恒温水浴箱中保温1015 min,注意严格,控制温度范围,使,沉淀析出而DNA分子还未变性,能够将,DNA与蛋白质分离。,4.DNA深入提纯,利用DNA不溶于,溶液(体积分数为95%)这一原,理,可从滤液中析出较纯净DNA,此时DNA状态为,。,3.去除滤液中杂质,浓度,木瓜蛋白酶,蛋白质,冷却,酒精,白色丝状物,第6页,5.DNA判定,将呈,DNA溶解于5 mL物质量浓度为2 mol/LNaCl溶,液中,再加入4 mL,试剂,加热5 min,冷却后观,察溶液颜色。注意要同时设置,试验。,6.操作提醒,(1)以血液为试验材料时,每100 mL血液中需要加入3 g,防,止,。,(2)加入洗涤剂后,动作要轻缓、柔和,不然轻易产生大量泡沫。加入酒精,和用玻璃棒搅拌时,动作要,以免加剧DNA分子断裂,造成,DNA分子不能形成絮状沉淀。,(3)二苯胺试剂要,不然会影响判定效果。,丝状物,二苯胺,沸水浴,对照,柠檬酸钠,血液凝固,轻缓,现配现用,第7页,1.(江苏单科,16A)酵母和菜花均可作为提取DNA材料。,(),2.(江苏单科,4A)用洋葱进行DNA粗提取和判定试验中加入洗涤剂后,用力进行快速、充分研磨。,(),3.洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中溶解度。,(),4.DNA在不一样浓度NaCl溶液中溶解度不一样,在0.14 mol/LNaCl溶液中,溶解度最大。,(),5.DNA不溶于冷酒精,可用酒精深入提取DNA。,(),6.将丝状物溶解在2 mol/LNaCl溶液中,加入二苯胺试剂即呈蓝色。,(),7.制备细胞膜和DNA粗提取均以鸡血细胞作为试验材料。,(),第8页,突破一DNA提取方法,1.DNA和蛋白质溶解度比较:,考点突破,DNA,蛋白质,溶解规律,NaCl溶液浓度从2 mol/L降低过程中,蛋白质溶解度逐步增大,2 mol/L NaCl溶液,溶解,部分发生盐析沉淀,0.14 mol/L NaCl溶液,析出,溶解,体积分数为95%酒精,溶解度小,溶解度大,第9页,2.试验材料选择和制备,(1)试验材料选择,首先选择含有DNA生物材料。,选取DNA含量相对较高生物组织,成功率较大。如鸟类血细胞,其代谢,旺盛红细胞多。,选择试验材料应注意问题及理由,材料,注意问题,理由,动物细胞,除哺乳动物红细胞以外活细胞,成熟哺乳动物红细胞没有细胞核(或者不含有DNA),植物细胞,选取植物活细胞,植物活细胞含有细胞核,第10页,(2)材料制备(以动物鸡血为例),3.破碎细胞,获取含DNA滤液,动物细胞,加入一定量蒸馏水并用玻璃棒搅拌,细胞吸水涨破,玻璃棒搅拌加速细胞破裂,植物细胞,加入食盐和洗涤剂,搅拌时速度要迟缓,预防出现大量泡沫,食盐溶液能够溶解DNA并使研磨充,分,洗涤剂溶解细胞膜,第11页,知能拓展动物细胞核物质提取(以鸡血细胞为例),取血细胞液510 mL+20 mL蒸馏水,玻璃棒沿一个方向快速搅拌5 min,纱布过滤,滤液中含DNA和其它核,物质,如蛋白质,原理:血细胞细胞膜吸水涨破,玻璃棒快速搅拌加速血细胞破裂,第12页,方法与目标,理由,氯化钠、,蒸馏水,在含有DNA滤液中加入氯化钠使其浓度为2 molL-1,过滤,取滤液,除去不溶杂质,向中滤液中加入一定量蒸馏水,调整浓度为0.14 molL-1,析出DNA,过滤,除去溶液中杂质,再用2 molL-1氯化钠溶液溶解DNA,DNA在不一样浓度氯化钠溶液中溶解度不一样,NaCl浓度为0.14 molL-1时,溶解度最低,嫩肉粉,向含有DNA滤液中直接加入嫩肉粉,并反应1015 min,嫩肉粉中木瓜蛋白酶能够分解蛋白质,恒温水,浴箱,将含有DNA滤液放在6075 水浴中保温1015 min,在此温度范围内,蛋白质变性析出,DNA没有变性,4.去除滤液中杂质,第13页,尤其提醒试验中需要搅拌等动作,搅拌时要轻并沿同一方向,以预防,破坏DNA。,尽可能使用塑料器具,因为DNA易被玻璃制品吸附,影响最终提取量。提取,用于判定时可用玻璃棒卷出。,5.DNA纯化,(1)滤取含DNA黏稠物:用多层纱布过滤,含DNA黏稠物留在纱布上。,(2)DNA黏稠,物再溶解,溶解,第14页,(3)过滤含DNA2 mol/L NaCl溶液:用2层纱布过滤,滤液中含DNA。,(4)提取含杂质较少DNA:上述滤液+冷却体积分数为95%酒精50 mL,用玻璃棒迟缓搅拌,出现含杂质较少丝状物,用玻璃棒将丝状物卷起。,第15页,尤其提醒冷却酒精溶液含有以下优点:,抑制核酸水解酶活性,预防DNA降解。,降低分子运动易于形成沉淀析出。,低温有利于增加DNA分子柔韧性,降低断裂。,第16页,“DNA粗提取和判定”操作关键点分析,(1)获取较多DNA关键是向鸡血细胞液中加入足量蒸馏水,以使鸡血细胞膜和核膜破裂。,(2)试验中两次加入蒸馏水目标不一样,第一次加蒸馏水目标:使细胞吸水涨破,释放出核内DNA。加水后必须充分搅拌,时间不应低于5 min,使血细胞充分破裂。,第二次加蒸馏水目标:稀释NaCl溶液,使2 mol/LNaCl溶液浓度逐步下降到0.14 mol/L,使DNA充分析出,蛋白质溶解。,(3)试验中共有四次过滤,其目标各不相同,第一次过滤:为得到含DNA滤液,弃去生物膜等物质,丢弃滤渣。,第二次过滤:为得到含DNA滤液,除去不溶杂质。,第17页,第三次过滤:为得到含DNA丝状物,除去溶液中杂质。,第四将过滤:为得到含DNA滤液,待以深入提纯。,(4)动植物DNA提取方法比较:,动植物DNA提取原理相同,但植物细胞还有细胞壁结构和多糖等物质,所以提取植物DNA前要经过研磨破坏其细胞壁和细胞膜。可使用洗涤剂等一些去污剂,使植物细胞膜破碎,释放DNA。,第18页,考向一对DNA粗提取原理考查主要集中在对DNA溶解度和耐受性,考查,如对DNA在不一样NaCl溶液和冷却酒精中溶解度考查,1.在“DNA粗提取与判定”试验中,试验原理是利用DNA在不一样浓度,NaCl溶液中溶解度不一样来提取,DNA溶解度与如图所表示曲线对应,点相符合是,(),A.a点浓度最适合析出DNA,第19页,B.b点浓度最适合析出DNA,C.c点浓度最适合析出DNA,D.d点浓度最适合析出DNA,答案B由图可知,DNA在0.14 mol/L NaCl溶液中溶解度最小,故这,一浓度最适合析出DNA,伴随NaCl溶液浓度增大或减小,DNA溶解度逐,渐增大。,2.(江苏常州中学1月调研,20,2分)在DNA粗提取过程中,初步析出,DNA和提取较纯净DNA所用药品分别是,(),0.1 g/mL柠檬酸钠溶液2.00 mol/LNaCl溶液,0.14 mol/LNaCl溶液体积分数为95%酒精溶液,A.B.C.D.,第20页,答案D0.1 g/mL柠檬酸钠溶液是作为抗凝剂预防血液凝固,没,有用于DNA初步析出和提纯,错误;DNA能够溶于2.00 mol/LNaCl溶,液,该溶液用于从血细胞中提取DNA,未用于DNA初步析出和提纯,错,误;DNA在0.14 mol/L氯化钠溶液中溶解度最低,此时DNA会从溶液中析,出,可用于初步析出DNA,正确;因为DNA不溶于酒精,而其它杂质能够溶,于酒精,所以利用体积分数为95%酒精溶液,可提取较纯净DNA,正,确。故D符合题意。,第21页,考向二考查试验操作过程中加入物质及其作用和结果等内容,3.(江苏单科,25,3分)图1、2分别为“DNA粗提取与判定”试验中部,分操作步骤示意图,以下叙述正确是(多项选择),(),图1图2,A.图1、2中加入蒸馏水稀释目标相同,B.图1中完成过滤之后保留滤液,C.图2中完成过滤之后弃去滤液,D.在图1鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉有利于去除杂质,第22页,答案BCD图1加入蒸馏水目标是使鸡血细胞吸水涨破,图2加入,蒸馏水目标是稀释NaCl溶液,A错误;图1中加入蒸馏水后,DNA存在于滤,液中,B正确;图2中加入蒸馏水后,NaCl溶液浓度降低,DNA析出,所以弃去,滤液,C正确;嫩肉粉主要成份是蛋白酶,鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉可将,蛋白质水解成小分子肽或氨基酸,除去蛋白质,D正确。,4.(江苏南通高三第三次调研)下列图是利用鸡血粗提取DNA基本操,作,下表中操作目标不能实现是,(),第23页,选项,烧杯甲中试剂,烧杯乙中液体或物质,操作目标,A,蒸馏水,鸡血细胞液,使鸡血细胞吸水涨破,B,蒸馏水,含DNA浓NaCl溶液,去除不溶于低浓度NaCl溶液中杂质,C,冷却酒精,含DNA浓NaCl溶液,去除溶于酒精中杂质,D,2 mol/L NaCl,溶液,纱布上黏稠物,去除不溶于2 mol/L NaCl溶液中杂质,第24页,答案B在DNA粗提取试验中,鸡血中加入蒸馏水目标是使血细胞,吸水涨破,A正确;将烧杯甲中蒸馏水加入含DNA浓(2 mol/L)NaCl溶液,烧杯乙中,其目标是使NaCl溶液浓度降低至0.14 mol/L,此时DNA在,NaCl溶液中溶解度最小,从而使DNA析出,B错误;DNA不溶于酒精溶液,细胞中一些蛋白质则溶于酒精,据此,将冷却酒精加入含DNA浓Na-,Cl溶液中,可去除溶于酒精中杂质,C正确;将烧杯甲中2 mol/LNaCl,溶液加入烧杯乙中,纱布上黏稠物中DNA会溶解在2 mol/LNaCl溶,液中,可去除不溶于2 mol/LNaCl溶液中杂质,D正确。,第25页,DNA+二苯胺试剂,蓝色,突破二DNA判定方法,1.试验原理,第26页,2.试验步骤,取两支20 mL试管,各加入物质量浓度为2 mol/L氯化钠溶液5 mL,将,丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。然后,向两支,试管中各加入4 mL二苯胺试剂。混合均匀后,将试管置于沸水中加热5,min,待试管冷却后,观察并比较两支试管中溶液颜色改变。,第27页,考向结合DNA粗提取来考查DNA判定,1.(江苏扬州中学高三质检)以下相关“DNA粗提取与判定”试验,叙述,错误是,(),A.选择鸡血进行该试验是因为材料易得,核内DNA含量丰富且细胞易吸水,破裂,B.DNA释放和溶解是试验成功是否关键,调整NaCl溶液浓度利于DNA,释放,C.加入木瓜蛋白酶可分解杂质蛋白,使DNA与蛋白质分开,从而提取到较纯,净DNA,D.用二苯胺试剂判定提取DNA时,沸水浴加热冷却后会出现蓝色,第28页,答案B“DNA粗提取与判定”试验中,选择鸡血进行该试验是由,于材料易得,核内DNA含量丰富且细胞易吸水破,裂,A正确;DNA释放和溶解是试验成功是否关键,调整NaCl溶液浓度,利于DNA溶解与沉淀析出,B错误;加入木瓜蛋白酶可分解杂质蛋白,使,DNA与蛋白质分开,从而提取到较纯净DNA,C正确;用二苯胺试剂判定,提取DNA时,沸水浴加热冷却后会出现蓝色,D正确。,2.甲、乙两图为“DNA粗提取与判定”试验中包括两个操作装置,图。相关叙述正确,(),第29页,A.图甲烧杯和图乙试管中所用溶剂都为NaCl溶液,但二者浓度不一样,B.图乙试管经少许加热后即可观察到一支试管中溶液显著变蓝,另一支,试管中溶液不变蓝,C.图甲操作需用玻棒快速搅拌以使DNA成为絮状沉淀并缠绕在玻棒上,D.图乙操作中所用二苯胺需现配现用以到达很好判定效果,答案D图甲烧杯中所用溶剂是体积分数为95%冷却酒精,A,错误;图乙试管经沸水加热5 min后可观察到一支试管中溶液(含有DNA),显著变蓝,另一支试管中溶液(不含DNA)不变蓝,B错误;图甲操作需用玻,棒沿一个方向迟缓搅拌以卷起丝状DNA,C错误;图乙操作中所用二苯胺,需现配现用以到达很好判定效果,D正确。,第30页,