基因工程药物的制造.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,DNA分子中含有,特定遗传信息,的一段,核苷酸序列,是遗传物质的最小功能单位。,回顾：基因工程的基础知识,一、,基因,的概念:,二、,基因工程技术,是将,目的基因,插入载体，拼接、转入新的宿主细胞，构建成工程菌(或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使,目的基因在工程菌内进行复制和表达,的技术。,第二节,基因工程药物生产的基本过程,（,掌握,）,一 目的基因的获得,一、反转录法,反转录法,就是分离纯化目的基因的RNA，再反转录成,cDNA,，然后进行cDNA克隆表达。,二、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）,RT-PCR,是将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起，该法是,mRNA经反转录合成cDNA第一链,，在以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始协助下，PCR扩增，特异性的合成目的cDNA链（目的基因）。,三、化学合成法,合成,目的基因DNA不同部位的,两条链的寡核苷酸短片段,，再,退火,成为两端形成粘性末端的DNA双链片段，然后将这些双链片段,按正确的次序进行退火连接成较长的DNA片段,，再用,连接酶,连接成完整的基因。,问题：,来源于真核细胞的产生基因工程药物的目的基因，为什么不能进行直接分离？,基因表达,是指结构基因在生物体中的转录、翻译以及所有加工过程。,二 基因的表达,克隆载体,表达载体,受体细胞（菌）,表达系统,：,基因工程中用来获得有功能的异源蛋白质的体系,常用表达载体-,质粒pBV220的结构,融合表达质粒pBG-2的结构,真核基因在原核细胞中表达载体必须具备条件：,载体能够,独立复制,。,应具有灵活的,克隆位点和方便的筛选标记,，以利于外源基因的克 隆鉴定和筛选。,应具有很强的,启动子,，能为大肠杆菌RNA聚合酶所识别。,应具有,阻遏子,，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录。,应具有很强的,终止子,，只转录克隆的基因，所产生的mRNA较为稳定。,所产生的mRNA必须具有翻译的,起始信号AUG和SD序列,，以便转录后顺利翻译。,1.分批培养,2.补料分批培养,3.连续培养,4.透析培养,5.固定化培养,三 工程菌的培养,发酵液,细胞分离,胞内产物 胞外产物,细胞破碎,固液分离 浓缩 初步分离 高度纯化 制剂,产品,包含体 细胞碎片分离,变性,复性,四,基因工程药物的分离纯化,五,基因工程药物的质量控制,一、生物材料的质量控制,二、培养过程的质量控制,三、纯化过程的质量控制,四、目标产品的质量控制,五、产品的保存,