维生素类药物的分析-.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第十四章维生素类,药物的分析,公元前,3500,年,-,古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来的维,A,。,1600,年,-,医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。,1747,年,-,苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维,C,。,1831,年,-,胡萝卜素被发现。,1911,年,-,波兰化学家丰克为维生素命名。,1915,年,-,科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的,维生素发展史,1916,年,-,维生素,B,被分离出来。,1917,年,-,英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后,断定这种病是缺乏维,D,引起的。,1920,年,-,发现人体可将胡萝卜素转化为维生素,A,1922,年,-,维,E,被发现。,1928,年,-,科学家发现维,B,至少有两种类型。,1933,年,-,维,E,首次用于治疗。,1948,年,-,大剂量维,C,用于治疗炎症。,1949,年,-,维,B,3,与维,C,用于治疗精神分裂症。,1954,年,-,自由基与人体老化的关系被揭开。,1957,年,-Q,10,多酶被发现。,1969,年,-,体内超级抗氧化酶被发现。,1970,年,-,维,C,被用于治疗感冒。,1993,年,-,哈佛大学发表维生素,E,与心脏病关系的研 究结果。,VitA,、,D,2,、,D,3,、,E,、,K,1,等,脂溶性,水溶性,VitB,族,(B,1,、,B,2,、,B,6,、,B,12,),VitC,、叶酸、烟酸、泛酸等。,分类,按溶解度分,第一节维生素,A,的分析,分类：,A,1,、,A,2,、,A,3,A,1,存在于动物肝脏、血液和眼球的,视网膜,中，又称,为视黄醇,天然维生素,A,主要以此形式存在。脂溶性,淡黄色片状结晶，熔点,64,。,A,2,主要存在于,淡水鱼,的肝脏中。维生素,A,2,的化学,结构与,A,1,的区别只是在,-,白芷酮环的,3,4,位上,多一,个双键,。,功能：,维持视觉：,维生素,A,可,促进视觉细胞内感光色素的形成,。维生,素,A,可,调试,眼睛适应外界光线的强弱的能力，以降,低,夜盲症,和,视力减退,的发生，维持正常的视觉反应,有助于对多种眼疾,(,如眼球干燥与,结膜炎,等,),的治疗。,2.,促进生长发育：,与视黄醇对,基因,的调控有关,.,视黄醇也具有相当于类,固醇激素的作用，,可促进糖蛋白的合成。,促进生长、,发育，强壮骨骼，维护头发、牙齿和牙床的健康。,3.,维持上皮结构的完整与健全,视黄醇和视黄酸可以调控基因表达，减弱上皮细胞,向鳞片状的分化，增加上皮,生长因子,受体的数量。,保持,皮肤湿润,，防止,皮肤黏膜,干燥角质化，不易受,细菌伤害，有助于对粉刺、脓包、疖疮，皮肤表面,溃疡等症的治疗。,4.,加强免疫能力,维生素,A,有助于维持免疫系统功能正常，能加强对,传染病特别是呼吸道感染及寄生虫感染的身体抵抗,力；有助于对,肺气肿,、,甲状腺机能亢进症,的治疗。,富含维生素,A,的食物,梨、苹果、枇杷、樱桃、香蕉、桂圆、杏子、荔枝、西瓜、甜瓜。,水果类,蔬菜类,马齿菜、大白菜、荠菜、番茄、茄子、南瓜、黄瓜、菠菜,植物类,绿豆、大米、胡桃仁,一、结构与性质,（一）结构,R:-H,维生素,A,醇,-COCH,3,维生素,A,醋酸酯,-COC,15,H,31,维生素,A,棕榈酸酯,一个共轭多烯侧链的环己烯，有立体异构体,醋酸酯,相对生物效价,维生素,A 325.5 100%,新维生素,Aa 328 75%,新维生素,Ab 320.5 24%,新维生素,Ac 310.5 15%,异维生素,Aa 323 21%,异维生素,Ab 324 24%,（二）性质,1,、具紫外吸收：在,325,328nm,间有最大吸收,2,、不稳定性：,（,易氧化变质）,易被空气中氧或氧化剂氧化,易被紫外光裂解,在加热和金属离子存在时，更易氧化变质，生成无生物活性的环氧化物、维生素,A,醛及维生素,A,酸,或有金属离子存在时氧化,3,、能与三氯化锑呈色：产生不稳定的蓝色。,4,、溶解性：,维生素,A,能与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶,二、鉴别试验,（一）三氯化锑反应,原理：维生素,A,在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中，即显蓝色，渐变成紫红色。,注意：鉴别在,无水、无醇（,乙醇可以和碳正离子作用使其正电荷消失）,条件下进行。,CHCl,3,水中水解为氯化氧锑,（二）紫外吸收光谱：,5,个共轭双键,6,个共轭双健,去水,VitA,（,VitA,3,）,VitA,（三）薄层色谱,吸附剂：硅胶,G,展开剂：环己烷,-,乙醚,(80:20),点样量：各,2l,，不必挥散溶剂，立即展开,显色剂：三氯化锑溶液,结 论：比较供试品溶液和对照品溶液所显蓝色斑点位置,BP,杂质对照品法,显色剂 三氯化锑,USP,显色剂 磷钼酸,规定斑点颜色和,R,f,值,立体异构体,氧化降解产物,合成中间体,副产物,UV,法,（一）,三、,含量测定,维生素,A,2,维生素,A,3,环氧化物,维生素,A,醛,维生素,A,酸,1,、方法建立的依据,三点校正法,2,、测定原理,方法的依据：,主成分：,在,325,328nm,有吸收,杂质：,在,310,340nm,范围内 吸收呈一条直线，且随波长的增大，吸收度变小。,物质对光的吸收具有加和性。,3,、三点波长的选择,（,1,）第,1,点：选择维生素,A,的最大吸收波长,(,1,),（,2,）第,2,点和第,3,点：在,max,两侧各选一点,等波长差法：,3,-,1,=,1,-,2,测定,VA,醋酸酯，规定：,1,=328 nm,，入,2,=316nm,，,3,=340nm,等吸收度法：,A,2,=A,3,=6/7A,1,测定,VA,醇，规定：,1,=325 nm,，,2,=310 nm,3,=334 nm,4,、杂质吸收,(1),维生素,A,2,和维生素,A,3,(2),维生素,A,的氧化产物为环氧化物、维生素,A,醛和维生素,A,酸。,(3),维生素,A,在光照下产生的无生物活性的聚合物鲸醇。,(4),维生素,A,的异构体。,(5),合成时产生的中间体。,(1),(5),这些杂质在,310,340 nm,波长范围内有吸收，因此，在测定维生素,A,含量时，必须考虑这些杂质的干扰。三点校正法可以消除这些杂质的影响。,5,、测定方法,（,1,）基本步骤,:,第一步,A,的选择,选择依据：,所选,A,值中杂质的干扰已被基本消除,第二步：求百分吸收系数，,注意：,C,为混合样品的浓度,第三步,求效价,换算因数由纯品计算而得：,第四步：求标示量,(2),第一法,等波长差法，高纯度,VA,醋酸酯,测量方法：,计算各波长下的吸收度与,328nm,波长下的吸,收度的比值,判断 是否在,326,329nm,之间,在,326,329nm,之间,改用第二法,是,否,求算,并与规定值比较,规定值 差值,判断前提；最大吸收波长在,326,329nm,之间,A,的选取,直接用,A,328,A,328,A,328,校正,第一法不适用,0,3%,15%,3%,第二法,第二法,讨 论,V,A,醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导而来；,V,A,醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或称,6/7,定位法）推导而来。,在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。在测定前务必要校正波长。测定的样品应不得少于两份。,（,3,）第二法皂化法：适用于维生素,A,醇,加热回流,判断,max,是否在,323,327nm,之间,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,是,否,0.73,进一步判断,0.73,，杂质含量过高,0,3%,3%,二、三氯化锑比色法,优点 简便 快速,max,618nm,620nm,标准曲线法,缺点,呈色不稳定（,5 10s,内）,水分干扰,与标准曲线温差,1,专属性差,三氯化锑有腐蚀性,（三）高效液相色谱法,RP-HPLC,同时测定人血清中,VitA,和,VitE,的含量,1,、仪器与分析条件：,HPLC-UV,、,C,18,(300,3.9 mm,）、甲醇水（,96,：,4,）、流速：,1.2 ml/min,、,检测波长：,0,8min(,330 nm,),8 min,后,(,292 nm,）,内标：维生素,A,醋酸酯,血清样品的制备：,LLE,法制备,分析方法的建立：,线性,LOD,Recovery,Precision,Chromatogram:,作业：,维生素,AD,胶丸中维生素,A,醋酸酯的测定方法如下：取内,容物,0.0410g,，加环己烷溶解并稀释至,50ml,，摇匀，取出,2ml,加环己烷溶解并稀释至,25ml,，摇匀，在下列,5,个波长,处测定吸光度如下：,已知：平均丸重（平均内容物重）,=0.0910g,，标示量,10000IU/,丸，求维生素,A,醋酸酯的标示量,%,？,波长（,nm,）,测得,A,值,药典规定的吸收度比值,300,0.212,0.555,316,0.309,0.907,328,0.337,1.000,340,0.273,0.811,360,0.116,0.299,第二节 维生素,Bl,的分析,二、结构及性质,(,一,),结构,氨基嘧啶环,CH,2,噻唑环,(,季铵碱,),HCl,Cl,-,存在于米糠、麦麸和酵母中,人工合成,(,二,),性质,（,1,）溶解性：,在水中易溶，水溶液显酸性,在乙醇中微溶，在乙醚中不溶,（,2,）具有紫外吸收：,max=246nm,（,HCl,溶液）,（,3,）硫色素反应：,具有荧光,（,4,）碱性,可与酸成盐,与生物碱沉淀试剂反应，生成组成恒定的沉淀。,（,5,）氯化物特性,嘧啶环,伯胺,噻唑环,季铵,碘化汞钾、三硝基酚、碘溶液、硅钨酸等,三、鉴别试验,(,一,),硫色素反应,维生素,B,1,的专属反应,原理：,硫色素,【O】,注意事项：,(1),硫色素反应,为维生素,B,l,的专属反应，虽非定量完,成，但在一定条件下形成的硫色素与维生素,B,l,浓度,成正比，且回收恒定。故可用于维生素,B,l,及其制剂,的含量测定。,(2),本法为维生素,B,1,所特有，故不受氧化破坏产物的,干扰，测定结果较为准确。但操作繁琐，且荧光测,定受多种因素干扰；,(3),本法中使用的氧化剂，除铁氰化钾外、尚可用氯,化汞或溴化氰。其中，溴化氰能将维生素,B,l,完全定,量地氧化为硫色素，在较宽的浓度范围内与荧光强,度成正比，且尿液中某些,代谢产物,不干扰测定。故,亦适用于临床体液分析。,VitB,1,H,+,H,+,H,+,H,+,（二）,沉淀反应,S,元素反应,Cl,-,反应,（三）,其他反应,(,),2,1,PbS,NaS,VitB,NO,3,Pb,NaOH,四、含量测定,非水溶液滴定法（原料）和紫外分光光度法（制剂）、,硫色素荧光法（,USP,（,24,）。,（一）非水滴定法,1,、原理：,含有两个碱性的已成盐的,伯胺和季铵,基团，在非水溶液中可与高氯酸作用，用于含量测定。,喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）,2,、方法：,用冰醋酸作溶剂，滴加醋酸汞，,以喹哪啶红,亚甲蓝混合物作指示剂，,高氯酸作滴定液,3,、注意事项：,（,1,）加醋酸汞。,（,2,）滴定度为,16.86mg/ml,。,VB,1,有两个碱性基团，与高氯酸反应的摩尔比为,12,（,3,）非水容量法可用于弱酸性特别是弱碱性药物及其盐类的含量测定。,（,4,）此处仅适用于维生素,B1,的原料药含量测定。,（二）紫外分光光度法,1,、原理：,2,、,V,B1,片的含量测定,测定方法：以,盐酸,溶液,(91000),作溶剂，在,246nm,测,定吸收度，按,C,l2,H,l7,ClN,4,OS,HCl,的吸收系数,(,百,分吸收系数,),为,421,计算，即得。,片剂、注射剂,=421,（每片）相当于标示量的,%=,A=ECL,规格,g/,片,g/100ml,g,ChP,（每,ml,）相当于标示量的,%=,规格,g/ml,ml,差示分光光度法,简称,A,法,取两份相等的供试液，一份加酸，另一份加碱或缓冲,液或其他能够发生某种化学反应的试剂，有时也可不加任,何溶液，然后将两者分别稀释至同样浓度，一份置样品池,中，另一份置参比池中，于适当波长处，测其吸收度的差,值（,A,值）,在供试溶液的一定浓度范围内，,A,值与浓度,C,之间呈,线性关系。,优点：在不同,pH,介质中，或经适当化学反应后，供试物发,生了特征性的光谱变化，而赋形剂或其他共存物质不受,pH,条件或化学试剂的影响，未引起光谱变化，从而消除了它,们的干扰。,差示分光光度法,A,法使用：,1,、利用最大吸收波长进行药物的测定：紫外光谱对,pH,十,分敏感时，可测得,A,（碱,-,酸）或,A,（,pH7-,酸）。,2,、利用最大吸收与最小吸收之差（即振幅）进行药物测,定：某些药物共存物在某,pH,范围内的光谱与,pH,无关（即,吸收度不变）。而主药有最大和最小吸收，两者差值与,主药浓度成正比。,差示分光光度法,A,法使用：,3,、利用干扰杂质等吸收波长进行测定：于干扰物的等吸,收波长处进行测量，如测得供试物的相应吸收度，即可消,除共存物的干扰。,4,、利用最小吸收波长,(lmin),处的增色效应进行测定：某,些药物在碱性和酸性溶液中吸收重叠，但吸收值不同。但,在碱性或酸性溶液中于,lmax,或,lmin,处可产生增色效应，利,用此效应可测定药物浓度。,（三）,硫色素荧光法,原理,1,、,荧光,硫色素,异丁醇,铁氰化钾,1,VitB,NaOH,通过与对照品荧光强度的比较即可测得供试品含量,2,、实验操作,40 ml,具塞试管,3,支对照品溶液,5 ml,；其中,2,支加入氧化试剂,3.0 ml,，再迅速加入异丁醇,20 ml,，振摇。第三支试管中加入,3.5 mol/l,的,NaOH,，同法操作为空白。,另取三支试管加入供试品，同法操作。,各试管中加入无水乙醇,2 ml,，分取异丁醇，进行荧光测定,。,3,、结果计算,式中：,A,和,S,分别为供试品和对照品溶液测得的平均荧光读数；,b,和,d,则分别为其相应的空白读数；,0.2,为对照品溶液的浓度（,g/ml,）；,5,为测定时对照品溶液的取样体积（,ml,）。,特点,4,、,（,1,）灵敏度高，线性范围宽,（,2,）代谢产物不干扰，适用于体液分析,（,3,）该法适用于,VitB,1,的制剂含量分析,（,4,）可用,BrCN,为氧化剂，反应定量完全，适合于生物样本分析,第三节维生素,C,的分析,功效：,1,、促进胶原蛋白的合成,2,、治疗坏血病,3,、预防,牙龈萎缩,、出血,4,、预防动脉硬化,5,、,抗氧化,剂,6,、治疗贫血,7,、防癌,8,、保护肝脏的解毒能力和细胞的正常代谢,9,、提高人体的免疫力,10,、提高机体的应急能力,维生素,C,有,四,种光学异构体，其中以,L-,构,型右旋体的生物活性最强。,药典：维生素,C,原料、片剂、泡腾片、颗粒,剂和注射剂,一、结构及性质,(,一,),结构,具有烯二醇结构和内酯环,在,C,4,、,C,5,有两个手性碳原子,性质活泼,具有旋光性,（二）性质,1,、溶解性：,水中易溶,乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶,水溶液呈酸性,C,3,OH,的,pKa=4.17,C,2,OH,的,pKa=11.57,一元酸（与碳酸氢钠成盐）,2,、具有酸性,烯二醇结构,（抗坏血酸）,二酮基结构,（去氢抗坏血酸）,烯二醇结构,o-2H,+2H,3,、强还原性,有活性,有活性,无活性,L-,二酮古洛糖酸,L(+),抗坏血酸,活性最强,手性,C,（,C,4,、,C,5,）,*,*,4,、光学活性,与碱反应,内酯环,5,、水解性,糖类的显色反应,50,结构与糖类相似,6,、糖类的性质,7,、紫外吸收特性,二、鉴别试验,（一）利用,V,C,所具有的强还原性,1,、与硝酸银反应,(1),方法：取本品,0.2g,，加水,l0ml,溶解。取该溶液,5m1,，加硝酸银试液,0.5m1,，即生成银的,黑色,沉淀。,(2),原理：,烯二醇基，具强还原性,2,、与,2,，,6,二氯靛酚反应,(1),方法：取本品,0.2 g,，加水,l0ml,溶解。取该溶液,5m1,，加,2,，,6,二氯靛酚试液,1,2,滴，试液的颜色即消失。,原理：,氧化型,玫瑰红色,还原型,蓝色,OH,（玫瑰色）,（无色）,3,、与其他氧化剂反应,亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色碱性酒石酸铜 砖红色沉淀磷钼酸 钼蓝,或盐酸,吡咯,50,（二）利用维生素,C,所具有糖类性质的反应,H,+,吡咯,（三）利用,V,C,所具有的紫外吸收特性,维生素,C,在,0.0lmol/L,盐酸液中，在,243nm,波长处有惟一的最大吸收，利用此特征进行鉴别。,BP,中采用该法，并规定其吸收系数应为,545,585,之间,（四）薄层色谱,三、杂质检查,1.,溶液的澄清度与颜色：有色杂质,分光光度法,2.,铁、铜离子：原子吸收分光光度法,3.,草酸的检查：,四、含量测定,具有较强的还原性，可被不同氧化剂定量氧化。,（一）碘量法,1,、原理,指示剂 淀粉指示液,H,+,取本品约,0.2g,，精密称定，加新,沸过的冷水,100ml,与稀醋酸,10ml,使溶,解，加淀粉指示液,1ml,，立即用碘滴,定液（,0.1mol/L,）滴定，至溶液显蓝,色，在,30,秒内不褪。每,1ml,碘滴定液,(0.1mol/L),相当于,8.806mg,的,C,6,H,8,O,6,方法,2,、,3,、注意事项,防止样品氧化,减慢,VitC,被,O,2,氧化速度,用新沸冷水作溶剂,赶走水中,O,2,应用范围广,对维生素,C,原料、维生素,C,片、维生素,C,泡腾片、维生素,C,注射液、维生素,C,颗粒剂等的含量测定均采用。,差别仅在前处理：为了消除制剂中辅料对测定的干扰，滴定前要作些必要的处理。,4,、附加剂干扰的排除,片剂,滑石粉,过滤,注射剂,抗氧剂,丙酮,甲醛,Na,2,SO,3,NaHSO,3,Na,2,S,2,O,3,Na,2,S,2,O,5,2,，,6-,二氯靛酚滴定法,（二）,USP,JP,原理,1,、,酚亚胺,二氯靛酚,，,-,6,2,VitC,自身指示终点法,方法,2,、,（,2,）快速滴定,2min,内,（,1,）酸性环境,HPO,3,-HAc,稳定,VitC,防止其他还原性物质干扰,（,3,）剩余比色测定,（定量过量）,（测剩余染料）,讨论,3,、,（,4,）缺点,需经常标定,贮存一周,不稳定,干扰多,氧化力较强,（三）高效液相色谱法,人血浆中,VitC,浓度的,HPLC,法测定,1,、色谱条件,2,、标准溶液的制备,3,、血浆样品的处理：酸性溶液沉淀蛋白法,4,、方法学考察,5,、测定,是抗佝偻病维生素的总称。收载有：维生,素,D,2,、,D,3,原料药、维生素,D,2,胶丸和注射剂、,维生素,D,3,注射剂等。,第四节 维生素,D,的分析,维生素,D,3,胆骨化醇,一、结构与性质,维生素,D,2,骨化醇,24,（一）结构,（二）性质：,1,、性状：,D,2,、,D,3,无臭、无味，遇光易变质,2,、溶解性：在植物油中略溶，水中不溶,3,、不稳定性：含有多个烯键，不稳定，易氧化变质降低效价，毒性增加。,4,、旋光性：维生素,D,2,有,6,个手性碳原子,维生素,D,3,有,5,个手性碳原子,5,、显色反应：甾醇类化合物共有,6,、紫外吸收特性,二、鉴别试验,（一）显色反应,1.,醋酐,-,硫酸反应,D,2,黄 红,紫,绿,D,3,黄 红,紫、蓝绿,绿,2.,三氯化锑反应 橙红色渐变粉红,3.,三氯化铁反应 橙黄色,4.,二氯丙醇和乙酰氯反应 绿色,渐变,渐变,迅即,迅即,（二）比旋度鉴别,维生素,D,2,维生素,D,3,溶 剂,浓 度,比旋度值,无水乙醇,无水乙醇,40mg/ml,5mg/ml,+102.5,+107.5,+105,+112,注意事项：,应于容器开启,30,分钟内取样,在溶液配制后,30,分钟内测定,（三）区别反应：,以,96%,乙醇为溶剂，,加乙醇和,85%,硫酸,D,2,显,红色,，在,570nm,处有最大吸收,D,3,显,黄色,，在,495nm,处有最大吸收,4.,其他方法：,TLC,、,HPLC,、制备衍生物测熔点。,三、杂质检查,维生素,D,2,中麦角甾醇的检查,：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置,18h,不得发生浑浊或沉淀。,前维生素,D,的光照产物,四、含量测定方法,中国药典 采用正相,高效液相色谱法,(NP-HPLC,）,测定维生素,D,的含量，定量方法为内标法，内标物为,邻苯二甲酸二甲酯,。,根据样品的具体情况按以下三个方法进行分析。,第一法,：用于无维生素,A,醇及其它杂质干扰的情况,系统适用性试验：测定重复性和分离度。,固定相：硅胶流动相：正己烷,-,正戊醇（,997,：,3,）,照射,第二法,：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：,1,皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸发除乙醚、制备供试液,A,。,2,净化：供试液,A,经液相色谱分离，准确收集含有维生素,D,及前维生素,D,混合物的全部流出液，制备成供试液,B,。固定相：,ODS,流动相：甲醇,-,乙腈,-,水（,50,：,50,：,2,）,3,含量测定：取供试液,B,按第一法测定。,第三法,：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况,1,制备供试液：取供试液,A,，净化，水浴加热，,正已烷,溶解，得供试液,C,。制备对照液：对照品储备液（,异辛烷,溶解），稀释、加热。,2,含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样。,对照液和供试液，按外标法定量,讨论,1,、采用的是正相高效液相色谱法,2,、测定过程中应避免,VitD,的氧化,3,、皂化应剧烈振摇，水浴温度,40,，提取溶剂大多采用己烷或戊烷以消除苯的毒性,4,、若供试品中没有,VitA,醇及其它杂质干扰时，可以直接进样分析,5,、注意色谱系统适用性样品,VitD,、前,VitD,的制备方法,一、结构及性质,(,一,),结构,维生素,E,为,苯并二氢吡喃醇,衍生物，苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故又称生育酚醋酸酯。有,、,、,和,四种异构体，其中以,异构体的生理作用最强。,第五节 维生素,E,的分析,dl,生育酚醋酸酯,(,二,),性质,1,、溶解性,微黄色或黄色透明的粘稠液体,易溶于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中，不溶于水,2,、具有紫外吸收：苯环上有酚羟基,VE,的,0.lmg/ml,无水乙醇溶液在,284nm,波长处测定吸收度时，其吸收系数为,41.0,45.0,。,3,、易水解氧化：,在无氧或其他氧化剂存在时，对热稳定,在有氧或其他氧化剂存在时，遇光、空气可被氧化,二、鉴别试验,（一）硝酸反应,原理：,7515,橙红色,（橙红色）,生育红,HNO,3,强氧化剂,（二）三氯化铁反应,=41.0,45.5,max,=284nm,min,=254nm,0.01%,无水乙醇中,UV,法,（三）,薄层板 硅胶,G,展开剂 环己烷,-,乙醚（,4,：,1,）,显色剂 硫酸（,105,5,）,结果各物质的,R,f,值分别为：,-,生育酚为,0.5,-,生育酚醋酸酯为,0.7,-,生育酮为,0.9,（四）,TCL,法,三、特殊杂质,1,、酸度,目的：,制备过程引入的游离醋酸,方法：,以,NaOH,滴定液（,0.1mol/L0.5ml,）体积控制。,2,、游离生育酚的检查,原理：利用游离生育酚的还原性，用硫酸铈滴定液,(0.0lmol/L),滴定，以二苯胺为指示剂，杂质的限量为,2.15%,。,硫酸铈滴定液（,0.01mol/L,）,二苯胺（亮黄灰紫）,（二）试剂,（,M,生育酚,=430.8,）,取本品,0.10g,，加无水乙醇,5ml,溶解后，加二苯胺试液,1,滴，用硫酸铈液（,0.01,mol/L,）滴定，消耗硫酸铈液（,0.01,mol/L,）,不得过,1.0ml,。,2.15,限量,（三）,药典规定,消耗硫酸铈液（,0.01mol/L,）,1.0ml,若硫酸铈液浓度不是,0.01mol/L,，,应重新计算硫酸铈的消耗量,四、含量测定,（一）,GC,法（法定方法）,GC,特点,选择性好,灵敏度高,速度快,分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制,中国药典（,2005,年版）规定：,VE,的原料药、片剂、注射剂、胶丸、粉剂等都采用气相色谱法。,1,、色谱条件与系统适用性试验,载气：,氮气,固定相：,硅酮,(OV-I7),涂布于经酸洗并硅烷化处理的硅藻土或高分子多孔小球上，涂布浓度为,2%;,柱温：,265;,进样口温度高于柱温,30,50,检测器,：氢火焰离子化检测器,;,柱效：,理论塔板数按维生素,E,峰计算应不低于,500,分离度：,维生素,E,峰与内标物质峰的分离度应大于,2,2,、校正因子测定,内标：,正三十二烷，加正己烷溶解稀释成含,1.0mg/lml,进样量,：,1,31,3,、测定方法,取,1,31,注入气相色谱仪，测定，计算，即得。,(,二,)HPLC,用外标法可以测定,dl,生育酚,1,、色谱条件：,色谱柱：内径,4mm,长,15,30Cm,的不锈钢柱,;,填充以粒径,5,l0m,的十八烷基硅烷键合硅胶固定相,流动相：甲醇,-,水,(49:1),紫外检测器,;,波长为,292nm,维生素,E,比醋酸维生素,E,先出峰，且二峰的分离度应大于,2.6,。,需做重现性试验，即重复试验,3,次，峰高的相对标准偏差小于,0.8%,。,2,、测定方法：,取供试品液和对照品液各,20l,注入高效液相色谱仪,中，记录峰高,H,X,和,Hr,3,、计算：,供试品中维生素,E,的量,m,x,(mg)=,式中：,m,r,为生育酚对照品的量，,Hx,、,Hr,为生育酚供试品、对照品中检测得峰高。,（三）荧光分光光度法,1,、药物本身具有荧光,2,、溶剂产生的拉曼光谱影响测定方法的灵敏度和准确度,3,、采用同步荧光扫描法测定，消除干扰,同步荧光扫描法测定血清中,VitE,的含量,1,、仪器：荧光分光光度计,2,、样品液的制备,:,样品测定管,U,、标准管,S,、空白管,B,3,、测定方法：测定,F,u,、,F,s,、,F,b,4,、计算：,Discussion,激发波长,295 nm,发射波长,325 nm,普通荧光,同步荧光,选择合适的波长差来消除溶剂的干扰,第六节复方制剂中多种维生素的分析,离子对,HPLC,法测定多种维生素,以能溶解于甲醇和水的樟脑磺酸为离子对试剂，以二巯基丙烷磺酸钠为抗氧剂，采用,HPLC,法同时测定多种,Vit,的含量,1,、色谱条件：,色谱柱、流动相、检测波长,2,、样品液的制备：,水溶性,Vit(,配制内标苯酚,IS,、标准液、样品液）,脂溶性,Vit,（配制标准液和样品液）,3,、测定：,水溶性测定波长,272 nm,，脂溶性测定波长,280 nm,4,、计算,外标法和内标法,习题：,1.,在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、脱羧、失水后，加入吡咯即产生蓝色产物的药物应是,A.,氯氮卓,B.,维生素,A,C.,普鲁卡因,D.,盐酸吗啡,E.,维生素,C,2.,中国药典采用以下何法测定维生素,E,含量,A.,酸碱滴定法,B.,氧化还原法,C.,紫外分光光度法,D.,气相色谱法,E.,非水滴定法,3.,中国药典采用气相色谱法测定维生,素,E,含量，内标物质为,A.,正二十二烷,B.,正二十六烷,C.,正三十烷,D.,正三十二烷,E.,正三十六烷,4.,下列药物的碱性溶液，加入铁氰化,钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是,A.,维生素,A,B.,维生素,B,1,C.,维生素,C,D.,维生素,D,E.,维生素,E,5.,既具有酸性又具有还原性的药物是,A.,维生素,A,B.,咖啡因,C.,苯巴比妥,D.,氯丙嗪,E.,维生素,C,6.,维生素,C,的鉴别反应，常采用的试剂有,A.,碱性酒石酸铜,B.,硝酸银,C.,碘化铋钾,D.,乙酰丙酮,E.,三氯醋酸和吡咯,7.,测定维生素,C,注射液的含量时，在操作过程,中要加入丙酮，这是为了,A.,保持维生素,C,的稳定,B.,增加维生素,C,的溶解度,C.,使反应完全,D.,加快反应速度,E.,消除注射液中抗氧剂的干扰,8.,能发生硫色素特征反应的药物是,A.,维生素,A,B.,维生素,B,1,C.,维生素,C,D.,维生素,E,E.,烟酸,9.,维生素,A,的鉴别试验为,A.,三氯化铁反应,B.,硫酸锑反应,C.2,6-,二氯靛酚反应,D.,三氯化锑反应,E.,间二硝基苯的碱性乙醇液反应,10.,维生素,E,的鉴别试验有,A,硫色素反应,B,硝酸氧化呈色反应,C,硫酸,-,乙醇呈色反应,D,碱性水解后加三氯化铁乙醇 液与联吡啶乙,醇液呈色反应,11.,用三点校正法（三波长校正法）测定维生素醋酸酯含量时，采用未校正吸收度（实测值）计算含量，必须满足以下条件：,A,在环己烷溶液中，最大吸收波长在,326-329nm,之间,B,在异丙醇溶液中，最大吸收波长在,326-329nm,之间,C,在各测定波长处的吸收度与,328nm,波长处的吸收度比值的规定值之差在,-0.02-+0.02,之间,D,校正吸收度与未校正吸收度之差在未校正吸收度的,3%,之间,E,校正吸收度与未校正吸收度之差在未校正吸收度,-15%,-3%,之间,