第七章2 凝胶渗透色谱(2012).ppt

*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第七章,色谱,第七章 色谱,7.1,色谱法的基本原理,7.2,气相色谱的基本原理,7.3,气相色谱在高分子中的应用,7.4,裂解气相色谱法,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,7.6,凝胶渗透色谱仪,7.7,凝胶渗透色谱的应用,1,凝胶渗透色谱法,(Gel Permeation Chromatography,，,GPC),是一种新型的液相色谱。,别名：体积排除色谱,(Size Exclusion Chromatography,，,SEC),；凝胶过滤色谱,(Gel Filtration Chromatography,，,GFC),等。,从分离机理看，使用体积排除色谱,(SEC),较为确切。,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,2,平均分子量计算公式,数均分子量,重均分子量,H,i,：峰高；,M,i,：分子量,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,应用,GPC,峰高法计算平均分子量,3,测定聚合物分子量的方法,直接方法,渗透压方法,(for,M,n,),光散射方法,(for,M,w,),粘度方法,(for,M,h,),超速离心方法,(for,M,z,),7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,4,测定聚合物分子量的方法,间接方法,GPC(for,M,n,M,w,and,M,h,),用标准品进样得到分子量校正曲线，间接算出聚合物样品的相对分子量。,如和标准品结构不同，还需进行相应的计算才能得到聚合物样品自身的分子质量。,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,5,为什么要用,GPC,方法？,相对分子量分布,(,多分散性指数,),对聚合物的性质有重要影响。经典方法不能同时测定聚合物的相对分子量及其分布。,凝胶渗透色谱,(GPC),的应用改善了测试条件，并提供了可同时测定聚合物的相对分子量及其分布的方法，使其成为测定高分子相对分子量及其分布最常用、快速和有效的技术。,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,6,1964,年由,J.C.Moore,首先研究成功,(,J.,Polym,.,Sci,.,Part A:,Polym,.Chem.,1964,2(2):835-843),以苯乙烯和二乙烯基苯在不同的稀释剂存在下制成了一系列孔径不同的凝胶，可以在有机溶剂中分离分子量从几千到几百万的试样；,第二年,Maly,用示差折光仪为浓度检测器，以体积指示器为分子量检测器制成凝胶色谱仪，从而创立了液相色谱中的凝胶渗透色谱技术。,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,7,主要特点：,操作简便快捷、进样量小；,数据可靠且重现性好、自动化程度高等。,应用领域：,聚合物分子量及其分布,聚合物的支化度、共聚物及共混物的组成,聚合物分级及其结构分析,高聚物中微量添加剂的分析等,测定高聚物的绝对分子量,(,多角度激光光散射）,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,8,当被分析的试样随着淋洗溶剂进入柱子后，溶质分子即向填料内部孔洞扩散。,较小的分子除了能进入大的孔外，还能进入较小的孔；较大分子则只能进入较大的孔；而比最大的孔还要大的分子就只能留在填料颗粒之间的空隙中。,随着溶剂的淋洗，大小不同的分子就得到分离，较大的分子先被淋洗出来，较小的分子较晚被淋洗出来。,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,9,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,10,V,t,V,0,V,i,V,g,V,t,:,色谱柱总体积,V,0,:,载体的粒间体积,V,i,:,载体内部的空洞体积,V,g,:,载体的骨架体积,溶剂分子：,V,0,中的溶剂称为流动相；,V,i,中的溶剂称为固定相。,高分子：,1),体积比孔洞尺寸大，淋出体积即为,V,0,;,2),体积远小于所有孔洞体积，淋出体积即为,V,0,+,V,i,;,3),体积中等，淋出体积则大于,V,0,，小于,V,0,+,V,i,。,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,11,V,e,：溶质的淋出体积；,K,：分配系数,(,孔体积,V,i,中可以被溶质分子进入的部分与,V,i,之比,),特别大的溶质分子：,V,e,V,0,，,K=,0,；,特别小的溶质分子：,V,e,V,0,V,i,，,K,=1,中等大小的溶质分子：,V,0,V,e,V,0,+,V,i,，,0,K,1,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,12,孔穴,填充物颗粒,大,中,小,样品,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,13,溶质分子的体积越小，其淋出体积越大。,这种解释不考虑溶质与载体之间的吸附效应以及在流动相和固定相之间的分配效应。,淋出体积仅仅由溶质分子尺寸和载体的孔尺寸决定，分离完全是由于体积排除效应所致，故称为,体积排除机理,。,GPC,柱,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,14,Log (M,W,),排阻极限,渗透极限,GPC,柱,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,15,排阻极限,指不能进入凝胶颗粒孔穴内部的,最小分子的分子量,。,所有大于排阻极限的分子都不能进入凝胶颗粒内部，直接从凝胶颗粒外流出，所以它们同时被最先洗脱出来。,排阻极限代表一种凝胶能有效分离的最大分子量，大于这种凝胶的排阻极限的分子用这种凝胶不能得到分离。,随固定相不同，排阻极限范围约在,400,至,6010,6,之间。,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,16,渗透极限,能够完全进入凝胶颗粒孔穴内部的,最大分子的分子量,。,7.5,凝胶渗透色谱的基本原理,在选择固定相时，应使欲分离样品粒子的相对分子质量落在固定相的渗透极限和排阻极限之间。,17,泵,进样器,色谱柱,柱温箱,检测器,THF,氯仿,DMF,示差检测器,GPC,系统配置,7.6,凝胶渗透色谱仪,7.6.1 GPC,仪器配置,18,Waters 1515,型凝胶渗透色谱仪,7.6.1 GPC,仪器配置,19,GPC,色谱柱选择,按照样品所溶解的溶剂来选择柱子所属系列,THF,、氯仿、,DMF,。,必须选择合适的溶剂来溶解聚合物。,按照样品分子量范围来选择柱子型号,样品分子量应处在排阻极限和渗透极限范围内，并且最好是处在校正曲线线性范围内。,7.6.1 GPC,仪器配置,载体是,GPC,产生分离作用的关键。,20,GPC,仪器对载体的要求：,1.,良好的化学稳定性和热稳定性；,2.,有一定的机械强度；,3.,不易变形,;,4.,流动阻力小；,5.,对试样没有吸附作用；,6.,分离范围越大越好（取决于孔径分布,),等；,7.,载体的粒度愈小，愈均匀，堆积的愈紧密，色谱柱分离效率愈高。,7.6.1 GPC,仪器配置,21,GPC,载体的种类：,1.,交联聚苯乙烯凝胶；,2.,多孔性玻璃；,3.,半硬质及软质填料包括聚乙酸乙烯酯凝胶及聚丙烯酰胺凝胶；,4.,木质素凝胶等。,7.6.1 GPC,仪器配置,22,柱效率,N,：,色谱柱的效率可借用“理论塔板数”,N,进行描述。,测定,N,的方法：,用一种相对分子量均一的纯物质，如邻二氯苯、苯甲醇、乙腈、苯等，作,GPC,测定，得到色谱图。,从图上可以求得从样品加入到出现峰顶位置的,淋洗体积,V,R,，以及由峰的两侧曲线拐点处作出切线与基线所截得的基线宽度即,峰底宽,W,，然后按照下式计算,N,：,7.6,凝胶渗透色谱仪,7.6.2,评价色谱柱性能的参数,23,对于相同长度的色谱柱，,N,值越大，意味着柱效率越高。,分离度,R,：,式中，,V,1,，,V,2,分别对应于样品,1,和样品,2,的两个峰值的淋洗体积；,W,1,，,W,2,分别为峰,1,和峰,2,的峰底宽。,显然，若两个样品达到完全分离，,R,应等于或大于,1,，如果,R,小于,1,，则分离是不完全的。,7.6.2,评价色谱柱性能的参数,24,聚苯乙烯,(,PSt,，溶于各种有机溶剂,),聚甲基丙烯酸甲酯,(PMMA),聚环氧乙烷,(PEO,，也叫聚氧化乙烯，溶于水,),聚乙二醇,(PEG,，溶于水,),7.6,凝胶渗透色谱仪,7.6.3,标样,PEO,与,PEG,的碳链骨架相同，但,合成原料和封端不同，使其产物的分子量和结构都有一定的区别。,PEO,常是指一端为甲基封端，一端为羟基封端的聚环氧乙烷，而,PEG,一般是两端都是羟基封端的聚乙二醇。,25,GPC,标样配制,由于凝胶色谱中浓度检测通常使用示差折光检测器，灵敏度不太高，所以试样的浓度不能配制得太稀。,但另一方面色谱柱的负荷量是有限的，浓度太大易发生“超载”现象。,分子量与样品浓度关系：,低于,5,千,1.0%;5,千,2.5,万,0.5%;,2.5,万,20,万,0.25%;20,万,200,万,0.1%;,高于,200,万,0.05%,7.6.3,标样,26,GPC,标样配制,应该严格按照标样说明书进行。,通常室温静置,12,小时以上，然后轻轻混匀。绝对不能超声或者剧烈振荡来加速溶解。,溶液进样前应先经过,过滤,，防止固体颗粒进入色谱柱内，引起柱内堵塞，损坏色谱柱。,7.6.3,标样,27,校正曲线法,逐一注入聚合物标样以确定分子量与保留时间的关系。,ID,Time(min),M,w,1,14.797,853000,2,15.559,380000,3,16.239,186000,4,16.888,100000,5,17.476,48000,6,18.032,23700,7,18.495,12200,8,19.005,5800,7.6,凝胶渗透色谱仪,7.6.4,分子量测定,28,校正曲线法,只能测定标样同类的化合物，更换高分子类型时必须重新标定。,7.6.4,分子量测定,29,普适校正法,用一种高聚物标样做校正曲线，常用,聚苯乙烯,；,样品结构可以与标样不一样，并且可以有支链；,样品及标样在流动相溶剂中的,K,和,值必须已知。,可以用粘度法来测定,K,和,的值：,=,K,M,7.6.4,分子量测定,30,GPC,反映的是淋洗体积与高聚物流体力学体积间的关系。根据,Einstein,粘度关系：,为特性粘度；,V,表示聚合物链等效的流体力学体积；,N,为阿佛加德罗常数；,M,为聚合物分子量。,根据上式可用,M,表示流体力学体积。,7.6.4,分子量测定,普适校正法,31,当样品与标样有相同的淋洗体积时，下式成立：,式中下标,1,为标样参数，,2,为样品参数。,将,Mark-,Houwink,方程,(,=,K,M,),代入，即得到：,从而得出：,如果,，,K,值已知，可由,1,的标准曲线换算,2,的标准曲线。,7.6.4,分子量测定,32,1.,高分子与低分子同时测定,由于小分子和高分子的流体力学体积相差较大，因而,GPC,可以同时分析而不必进行预先分离。,一般来说从高分子材料的,GPC,可以同时看到三个区域：,A,：高分子；,B,：添加剂和齐聚物；,C,：未反应的单体和低分子的污染物，如水。,7.7,凝胶渗透色谱的应用,33,(1),环氧树脂中树脂和齐聚物的同时分析,普通双酚,A,型环氧树脂有很宽的分子量范围,(,高，中，低）。,GPC,能快速可靠地鉴别不同类型环氧树脂的分子量特性。,三种不同分子量的,GPC,谱图如图所示，图上数字代表不同的聚合度,n,，树脂和齐聚物的峰形特征可用作指纹图，以区别不同厂家和批号的产品。,7.7,凝胶渗透色谱的应用,1.,高分子与低分子同时测定,34,7.7,凝胶渗透色谱的应用,1.,高分子与低分子同时测定,低、中和高分子量双酚,A,型环氧树脂的,GPC,谱图,色谱条件,：,四根微粒凝胶柱,(7.7mm,250mm),，孔径分别为,5,、,10,、,50,和,100nm,，颗粒直径,10m,；,280nm,下,UV,检测；流动相为四氢呋喃，流速,1mL/min,；柱温为,50,；样品量为,10L 0.2%0.5%,溶液,35,(2),高分子材料中小分子的定性鉴别,和其他色谱方法一样，,GPC,也可以用保留体积来鉴别或分离后用,IR,等方法鉴定中小分子物质。,如果能预测某未知峰属于某种化合物，则将该化合物加入该试样中，比较前后的谱图变化，如果未知峰强化，则很可能就是该物质。,7.7,凝胶渗透色谱的应用,1.,高分子与低分子同时测定,36,7.7,凝胶渗透色谱的应用,1.,高分子与低分子同时测定,用强化法鉴别高分子材料中的小分子化合物的示意图,37,2.,在高分子材料生产过程中的检测,(1),丁苯橡胶在塑炼时分子量分布的变化,在塑炼过程中定时取样分析，结果如图。,随时间的增加，高分子量组分裂解增加，,GPC,曲线向低分子量方向移动，经过,25min,以后，高分子量组分几乎完全消失。,如果塑炼的目的就是消除该组分，那么,25min,足够了。通过,GPC,数据可以帮助工作人员确定塑炼时间。,7.7,凝胶渗透色谱的应用,38,(1),丁苯橡胶在塑炼时分子量分布的变化,7.7,凝胶渗透色谱的应用,经不同时间塑炼后的丁苯胶的,GPC,谱图,塑炼时间为：,0,：,0min,；,1,：,4min,；,2,：,5min,；,3,：,25min,；,4,：,120min,；,5,：,180min,39,(2),控制聚合反应的终点,用,GPC,对聚合物进行中间反应分析，使生产人员能在达到预定的单体,/,聚合物比后即时终止反应。,7.7,凝胶渗透色谱的应用,2.,在高分子材料生产过程中的检测,用,GPC,对聚合终点控制分析的示意图,反应开始时全部是单体；反应进行一半，部分单体部分聚合物；,反应终点，大部分是聚合物，单体,/,聚合物比为,0.15,40,3.,高分子材料老化过程研究,可以研究高分子材料在使用过程中的老化，研究老化机理。以,HDPE,为例，必须加适量抗氧剂以提高耐候性。,7.7,凝胶渗透色谱的应用,在耐候试验不同阶段的,HDPE,样品的,GPC,谱图,1-,开始时；,2-,第一阶段；,3-,第二阶段；,4-,最后阶段,41,4.,高分子支化度的测定,表征高分子支化度的参数常用的是支化因子,g,：,显然对于相同分子量的高分子 ，所以支化程度越大，,g,越小。,7.7,凝胶渗透色谱的应用,42,另一个支化参数是,G,:,7.7,凝胶渗透色谱的应用,b,支化高分子的特性粘度；,l,线型高分子的特性粘度。,因为支化高分子的流体力学体积较小，所以,b,l,，,G,1,。,对于,G,和,g,之间有如下关系：,G,=,g,，对于无规轻度支化的高分子，,=1/2,。,4.,高分子支化度的测定,43,如果给出保留体积，即流体力学体积相等的情况下，支化高分子的分子量大于线形高分子的分子量。,测定时可用自动粘度计作为检测器，直接测得支化高分子每个级分的,，即,bi,。,对于同一级分，线型高分子的,M,与支化高分子的相等。,即可求得支化度。,7.7,凝胶渗透色谱的应用,4.,高分子支化度的测定,44,GPC,作业,1.GPC,的分离原理？,2.,举例说明,GPC,在高分子研究中有何应用。,45,