第二十二-二十三章 免疫学的临床应用.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,免疫学的临床应用,陈水亲,生化与分子生物学教研室,第二十二章 免疫学检测技术,第一节 体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素,一、抗原抗体反应特点,1,高度特异性,由抗原表位与抗体分子中的超变区互补结合所决定的。,2,表面化学基团之间的可逆结合,3,适宜的抗原抗体浓度和比例,抗原抗体结合后能否出现肉眼可见的反应取决于两者适当的浓度和比例。,4,抗原抗体反应的两个阶段,二、抗原抗体反应的影响因素,1,电解质,抗原、抗体通常为蛋白质分子，等电点分别为,pH35,和,56,不等。,实验中常用,0.85%,的,NaCl,溶液，以提供适当浓度的电解质。,2,温度,适当提高反应的温度可增加抗原与抗体分子的碰撞机会，加速抗原抗体复合物的形成。通常,37,是抗原抗体反应的最适温度。,3,酸碱度,抗原抗体反应的最适,pH,在,68,之间，,pH,过高或过低，均可直接影响抗原、抗体的理化性质。,第二十二章 免疫学检测技术,第二节 检测抗原或抗体的体外试验,一、凝集反应（,agglutination reactions,）,细菌、细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原的颗粒状物质（如聚苯乙稀乳胶等）与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团现象。,1.,直接凝集反应：,颗粒性抗原本身直接与相应的抗体反应出现的凝集现象，如红细胞凝集或细菌凝集。,2.,间接凝集反应：,将可溶性抗原或抗体先吸附在某些颗粒载体上，形成致敏颗粒，然后再与相应抗体或抗原进行反应产生的凝集现象。,直接凝集反应和间接凝集反应亦常用于溶血性疾病的诊断，如,Rh,血型不符的新生儿溶血症及药物相关的溶血性疾病。,第二十二章 免疫学检测技术,二、沉淀反应（,precipitation reactions,）,毒素、组织浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物。,1.,免疫比浊法,利用抗原抗体复合物在液相中形成浊度来测定抗原含量的方法。,2.,单向琼脂扩散,常用于血清中免疫球蛋白（,IgG,、,IgA,、,IgM,）、,C3,、,AFP,等定量测定。,第二十二章 免疫学检测技术,3.,双向琼脂扩散,检测可溶性抗原或抗体,对复杂的抗原或抗体成分进行纯度鉴定,免疫血清效价测定,第二十二章 免疫学检测技术,4.,免疫电泳,常用于血清蛋白的组分分析,第二十二章 免疫学检测技术,三、免疫标记技术（,immunolabeling,technique,）,将抗原抗体反应与标记技术相结合，以检测抗原或抗体的一类试验方法。,常用的标记物有酶、荧光素、放射性核素、胶体金及化学发光物质等。,1.,免疫酶测定法（,EIA,）,这是一种用酶标记一抗或二抗检测特异性抗原或抗体的方法。,双抗体夹心法,间接,EILSA,第二十二章 免疫学检测技术,血清检测中：,肝癌、骨肉瘤,-,血清,碱性,磷酸酶（,ALP,）升高。,前列癌,-,血清,酸性,磷酸酶升高。,2.,免疫荧光技术,是用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体的方法。,1,2,3.,放射免疫测定法,是用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫测定。敏感性可达到,pg/ml,水平，常用的放射性核素有,131,I,和,125,I,等。,第二十二章 免疫学检测技术,于,1977,年因创建,放射免疫测定法,而获得医学诺贝尔奖。,最敏感,4.,化学发光免疫技术,是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。,5.,免疫胶体金技术,用胶体金颗粒标记抗体或抗原，以检测未知抗原或抗体的方法称免疫胶体金技术。,四、蛋白质芯片技术,是指固定于支持介质上的大量蛋白质构成的微阵列。,6.,免疫印迹技术又称,Western blotting,第二十二章 免疫学检测技术,蛋白定性定量应用最广泛,第三节 免疫细胞功能的检测,一、免疫细胞的分离,1.,外周血单个核细胞的分离,第二十二章 免疫学检测技术,2.,淋巴细胞及其亚群的分离和分析,有：,免疫吸附分离法、磁珠分离法、,荧光激活细胞分离仪分离法,、,抗原肽,-MHC,分子四聚体技术,第二十二章 免疫学检测技术,流式细胞术,可用于,分离混合的,T,、,B,细胞,。用于,细胞分离鉴定的最好方法,。,二、免疫细胞功能的测定,1.T,细胞功能测定,T,淋巴细胞增殖试验：,T,细胞受到特异性抗原或有丝分裂原（,PHA,、,ConA,）刺激后可发生增殖，可通过以下三种方法检测。,形态计数法,3,H-TdR,或,125,-,UdR,掺入法,MTT,比色法,第二十二章 免疫学检测技术,迟发型超敏反应（,DTH,）的检测,此方法为体内检测细胞免疫功能的简便易行的皮试方法。,2.B,细胞功能测定,抗体形成细胞测定：常用溶血空斑试验。,3.,细胞毒试验,培养,4-6,小时,51,Cr,释放法,乳酸脱氢酶释放法,细胞染色法,凋亡细胞检测法,第二十二章 免疫学检测技术,4.,吞噬功能测定,硝基蓝四氮唑试验,巨噬细胞吞噬试验,5.,细胞因子的检测,生物活性检测法,免疫学检测法,酶联免疫斑点试验,第二十二章 免疫学检测技术,用于功能性细胞的定量检测,第二十三章 免疫学防治,第一节 免疫预防,特异性免疫的获得方式有自然免疫和人工免疫两种。,自然免疫,主要指机体感染病原体后建立的特异性免疫，也包括胎儿或新生儿经胎盘或乳汁从母体获得抗体。,人工免疫,则是人为地使机体获得特异性免疫，是免疫预防的重要手段，包括,人工主动免疫,和,人工被动免疫,。,一、疫苗的基本要求,习惯上将细菌性制剂、病毒性制剂以及类毒素等人工主动免疫制剂统称为,疫苗,。,1,安全,2,有效,3,实用,第二十三章 免疫学防治,二、人工主动免疫,用疫苗接种机体，使之产生特异性免疫，从而预防感染的措施。,1.,灭活疫苗,又称死疫苗，是选用免疫原性强的病原体，经人工大量培养后，用理化方法灭活制成。,2.,减毒活疫苗,用减毒或无毒力的活病原微生物制成。,3.,类毒素,用细菌的外毒素经,0.3%0.4%,甲醛处理制成。因其已失去外毒素的毒性，但保留免疫原性，接种后能诱导机体产生抗毒素。,第二十三章 免疫学防治,第二十三章 免疫学防治,三、人工被动免疫,给人体注射含特异性抗体或细胞因子的制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。,1.,抗毒素,用细菌外毒素或类毒素免疫动物制备的免疫血清，具有中和外毒素毒性的作用。,2.,人免疫球蛋白制剂,从大量混合血浆或胎盘血中分离制成的免疫球蛋白浓缩剂。,3.,细胞因子与单克隆抗体,细胞因子制剂与单抗制剂是近年来研制的新型免疫治疗剂，可望成为肿瘤、艾滋病等的有效治疗手段。,第二十三章 免疫学防治,第二十三章 免疫学防治,四、佐 剂,是一类与抗原合用时能增强抗原免疫效应的物质。,可能的作用机制,1.,在淋巴细胞接触抗原的局部可浓缩抗原，即储存效应；,2.,通过诱导细胞因子的产生，调节淋巴细胞的功能。,种类,氢氧化铝、磷酸铝、磷酸钙等无机盐以及结合细菌类毒素的百日咳杆菌。,1.,ISCOMs,是一种缓释的复合物。含磷脂、皂素、胆固醇及蛋白质，为,3040nm,直径的二十面体对称结构，能捕获大量抗原分子并释放给抗原提呈细胞。,ISCOMs,可上调,MHC,分子的表达，促进细胞免疫尤其是,CTL,活性。,2.,CpG,寡核苷酸,指人工合成的一段含非甲基化胞嘧啶,-,鸟嘌呤的寡核苷酸链，其受体是,TLR9,，能诱导细胞因子的产生，活化,B,细胞、,NK,细胞及树突状细胞，对蛋白疫苗和核酸疫苗均有明显佐剂活性。,第二十三章 免疫学防治,五、计划免疫,根据某些特定传染病的疫情监测和人群免疫状况分析，有计划地用疫苗进行免疫接种，预防相应传染病，确保儿童健康成长的重要手段，最终达到控制以至消灭相应传染病的目的而采取的重要措施。,第二十三章 免疫学防治,六、新型疫苗及其发展,1.,亚单位疫苗,去除病原体中与激发保护性免疫无关的甚至有害的成分，保留有效免疫原成分制作的疫苗。,2.,结合疫苗,能引起,T,、,B,细胞的联合识别，,B,细胞可产生,IgG,类抗体，明显提高了免疫效果。,3.,合成肽疫苗,根据有效免疫原的氨基酸序列，设计和合成的免疫原性多肽，以期用最小的免疫原性肽来激发有效的特异性免疫应答。,4.,基因工程疫苗,重组抗原疫苗：是利用,DNA,重组技术制备的只含保护性抗原的纯化疫苗。,重组载体疫苗：是将编码病原体有效免疫原的基因插入载体（减毒的病毒或细菌）基因组中，接种后，随疫苗株在体内的增殖，大量所需的抗原得以表达。,第二十三章 免疫学防治,DNA,疫苗：用编码病原体有效免疫原的基因与细菌质粒构建成重组体，经注射等途径进入机体，重组质粒可转染宿主细胞，使其表达保护性蛋白抗原，从而诱导机体产生特异性免疫。,转基因植物疫苗：用转基因方法，将编码有效免疫原的基因导入可食用植物细胞的基因组中，免疫原即可在植物的可食用部分稳定的表达和积累，人类和动物通过摄食达到免疫接种的目的。,七、疫苗的应用,1.,抗感染,抗感染仍是未来应用疫苗的首要任务。,2.,抗肿瘤,一些病毒的感染与肿瘤的发生密切相关，这些病毒的疫苗可被看作是肿瘤疫苗。,3.,计划生育,避孕疫苗也是近年来活跃的研究领域。,4.,防止免疫病理损伤,第二十三章 免疫学防治,第二节 免疫治疗,免疫治疗,是指利用免疫学原理，针对疾病的发生机制，人为地调整机体的免疫功能，达到治疗目的所采取的措施。,第二十三章 免疫学防治,一、分子治疗,分子治疗,指给机体输入分子制剂，以调节机体的特异性免疫应答，例如使用抗体、细胞因子以及微生物制剂等。,1.,分子疫苗,2.,抗体,3.,细胞因子,4.,微生物抗原疫苗,二、细胞治疗,细胞治疗,指给机体输入细胞制剂，以激活或增强机体的特异性免疫应答，例如使用细胞疫苗、干细胞移植、过继免疫治疗等。,1.,细胞疫苗,肿瘤细胞疫苗、基因修饰的瘤苗、树突状细胞疫苗。,2.,过继免疫治疗,取自体淋巴细胞经体外激活、增殖后回输患者，直接杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫效应。如,TIL,。,3.,造血干细胞移植,干细胞是具有多种分化潜能，自我更新能力很强的细胞，在适当条件下可被诱导分化为多种细胞组织。,骨髓、外周血、脐血,第二十三章 免疫学防治,三、生物应答调节剂与免疫抑制剂,1.,生物应答调节剂,2.,免疫抑制剂,免疫功能低下者有促进或调节作用。,常用于防止移植排斥反应的发生和自身免疫病的治疗。,化学合成药物：糖皮质激素、环磷酰胺、硫唑嘌呤。,微生物制剂：,环孢素,A,、,FK-506,、麦考酚酸酯、雷帕霉素。,第二十三章 免疫学防治,四、免疫治疗举例,谢谢！,