人体发生发育学：发育生物学第六讲 不孕不育、辅助生殖技术与克隆技术.ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Company Logo,第六讲,不孕不育、辅助生殖技术与克隆技术,不孕不育,辅助生殖技术,克隆技术,主要内容：,参考书籍,：,现代辅助生育技术,（黄荷凤主编）,不 孕 不 育,Infertility,概 述：,发生率一般在,8%15%，,工业化程度越高的地区不孕不育者增加越多。,环境质量的恶化,感染,生殖健康的状况和观念,社会、心理因素,卫生部 2013.2.5：全国不孕症发生率约为7%-10%；2011年全国辅助生殖技术治疗患者约35万。,定 义：育生育 孕受孕,不孕症,(,Infertility,),：,育龄夫妇婚后同居，性生活正常，未避孕，两年以上未怀孕者。,女方原因引起不孕,女性不孕,男方原因引起不孕,男性不育,原发性不孕：婚后2年从未受孕者,继发性不孕：曾有生育或流产，又连续2年以上不孕者。,原 因,百分比,女方因素,4055,男方因素 2540,男、女双方因素 20,免疫因素、不明原因者 10,原 因：,卵巢排出正常卵子；,精液正常并有正常的精子；,生殖管道畅通；,子宫内膜提供适合于受精卵着床的环境。,正常受孕必须具备下列条件：,排卵障碍,(,约占,1/3),盆腔因素,卵巢本身的因素,全身性疾患,中枢性影响,先天性无卵巢、多囊卵巢综合征、高泌乳素血症、肿瘤等,糖尿病、肾上腺功能紊乱等,下丘脑,-,垂体,-,卵巢轴失调（如甲状腺疾病、垂体肿瘤）等,原因不明,先天性生殖器官畸形，子宫病变，子宫内膜异位症等。,输卵管因素（约占,1/3,）,炎症，阻塞，粘连，积水等,女性不孕的原因,男性不育的原因,精液异常,先天发育异常,如双侧隐睾，先天睾丸发育不全症,全身因素,长期营养不良，抽烟，酗酒，精神过度紧张,局部因素,腮腺炎并发的睾丸炎，睾丸结核，精索静脉曲张，附睾炎，前列腺炎等,精子转运受阻,输精管道异常如先天性输精管发育不全，阴茎及尿道畸形等,免疫因素,抗精子抗体，射出的精子发生自身凝集而不能穿透宫颈粘液,检查方法：,女性,首检：,病史采集,全面体格检查,妇科检查,再次检查：,排卵功能监测,输卵管功能检查,盆腔超生检查,男性,病史采集,体格检查,实验室检查：,精液常规检查,精子穿透仓鼠卵试验（,SPA,）,精子低渗肿胀试验（,HOS,）,1,血孕酮（,P,）的测定,2,基础体温（,BBT,）,3,连续,B,超监测卵泡发育,4,动态测定体液中,E,2,水平,5 LH,峰监测,6,子宫内膜活检,1,子宫输卵管通气术,2,输卵管通液试验,3 X,线下子宫输卵管造影,4,子宫输卵管超声检查,5,输卵管镜检查（输卵管内膜评分：通畅程度，上皮情况，扩张程度，血管情况，粘连程度等）,诊断先天性生殖器官畸形、子宫病变（肌瘤、息肉、粘连等）、输卵管积水、卵巢囊肿、子宫内膜异位症、多囊卵巢综合征等,治疗原则：,原 因,排卵障碍,输卵管因素,发育因素,免疫因素,精子活力不足,遗传疾病,外科手术后,不明原因者,治 疗,诱发排卵、促排卵治疗,药物、输卵管整复术,外科手术治疗,免疫抑制剂,以上均失败,Assisted Reproductive Technologies,(ART),辅助生殖技术,辅 助 生 殖 技 术,Artificial Reproduction Technology,概 述:,辅助生殖技术（,Artificial Reproduction Technology，ART,）:是指对配子、胚胎或者基因物质体内外系统操作而获得新生命的技术。,观察胚胎早期发育过程，揭示生殖奥秘。,可以治疗不孕不育症；,辅助生殖技术的主要方法:,1.人工授精（AI）,2.,体外受精与胚胎移植（,IVF-ET,）,(,试管婴儿,),3.IVF-ET,衍生技术,1.人工授精(Artificial Insemination,AI,),定义：,指以非性交方式将精液置于生殖管道内(多为女性阴道和宫腔内)，使精卵结合达到妊娠生育的一种辅助生殖医学技术。,分类：,精液来源不同,：,夫精（,AIH,）,/,供精（,AID,）人工授精,储存精液时间长短：,鲜精,/,冻精人工授精,授精部位不同：,ICI,IUI,DIPI,TITI,等,宫腔内人工授精（Intrauterine Insemination,IUI）,超排卵结合IUI是目前最常用的人工授精方法。,方法：,将洗涤处理过的精子悬液通过导管直接注入宫腔内，注入精子悬液限于0.11ml（平均0.5ml）。,适应症：,广泛，如少、弱、畸形精子症，精液不液化症，免疫性不孕症，宫颈因素不孕，原因不明不孕症等。,接受人工授精所要具备的基本条件：,女方：,输卵管通畅；子宫发育正常或虽有异常但不影响人工授精的操作和胎儿的孕育；卵巢功能正常。,男方：,能在体外收集到精液，并有精子。,精液量不少于,0.5ml；,精子密度510,6,/ml；,活动率30,步骤：,月经周期第二,(,三,),天投予诱导排卵药物,超音波扫描卵泡成长,抽血或测尿中,LH,，监测排卵時间,注射,HCG,诱发特定時间排卵,排卵日丈夫之精液收集送至实验室筛选，洗涤浓缩,利用细导管将精液经阴道、子宫颈注入子宫腔,黃体素生成素补充,追踪检查是否受孕,影响人工授精成功率的因素：,采用超排卵后人工授精周期妊娠率为5.923.1；,影响因素：,年龄,/卵巢年龄/不孕的年限/不孕的原因/精液处理方法。,并发症：,1.,出血，腹痛，感染，休克,；,2.,多胎妊娠；,3.,卵巢过度刺激征（,OHSS,）：腹水、恶心、,呕吐、腹泻、卵巢增大等反应；,2.体外受精与胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET，试管婴儿),1978,年,7,月,25,日,，世界上第一例,“,试管婴儿,”,路易斯布朗在英国诞生。,1988,年,3,月,10,日，中国第一例“试管婴儿”在北京大学附属第三医院诞生。,2006,年,8,月首例试管婴儿顺利生下一男婴,1978,年,7,月,25,日，爱德华兹怀抱着刚刚出生的路易斯,布朗。,英国生理学家,“,试管婴儿之父,”,罗伯特,爱德华兹获得,2010,年诺贝尔生理学或医学奖。,是用人工方法让精子和卵子在体外受精并进行早期胚胎发育，然后移植到母体子宫内发育而诞生的婴儿。,试管婴儿：,1.一般要求年龄40岁；,2.输卵管因素、盆腔与腹膜因素、子宫内膜,异位症导致不孕的患者；,3.排卵障碍；,4.男方和（或）女方体内存在抗精子抗体；,5.精液异常；,6.不明原因不孕患者多次IUI失败。,适应症：,超促排卵,卵泡及排卵监测,取卵,体外受精,体外胚胎培养,胚胎移植,步骤：,取精,胚胎移植后激素支持,妊娠确定,IVF-ET的结局/影响因素：,分娩率：,20%-30%,结局：,失败（10-20%）、流产（15-30%）、宫外孕、宫内死亡、早产、畸形、多胎妊娠（15-31%）、单胎妊娠（61.8%）。,影响因素：,年龄、对超排卵反应、卵母细胞的数量和质量、精子的质量、ET的数量及质量。,试管婴儿双/多胞胎,3.IVF-ET衍生技术,“,试管婴儿,”,的发展：,第一代：即体外授精和胚胎移植,第二代：指胞质内单精子注射(,ICSI,),第三代：着床前遗传诊断学技术(,PGD,),第四代：,卵胞质置换术,各自适应症不同，不能相互代替,克 隆 技 术,Cloning,克隆（,clone,）,：,生物体通过细胞进行的无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。,目前把人工遗传操作动物繁殖的过程称克隆。,克隆技术,不经过雌雄两性生殖细胞的结合，只用一个单一细胞内的反应来生育后代的方式。,一、克 隆 的 概 念,Fertilization,vs,.,Cloning,(somatic cell nuclear transfer),二、克 隆 简 介,1.,微生物克隆,2.,植物克隆,3.,动物克隆,胚胎细胞克隆,体细胞克隆,4.,细胞克隆,5.,基因克隆,三、人 体 克 隆,治疗性克隆,生殖克隆,人工无性生殖,History of Somatic Cell Nuclear Transfer(Cloning),1952 Briggs and King cloned tadpoles,1984 Steen Willadsen cloned sheep from embryonic cells,1998 Mice cloned,1998 Cows cloned,1996 The first mammal cloned from,adult cells,was Dolly,the sheep.,2000 Pigs cloned,History of Cloning,History of Cloning,2001 Cat cloned,2002 Rabbits cloned,2003 Mule cloned,“,CC”Carbon Copy,2004 Bull serial-cloned,2005 Dog cloned,2007.11,科学家首次从成年灵长类动物身上克隆可存活的胚胎,被克隆的是一只,10,岁的雄性恒河猴。,2009.02,我国科学家获得人类体细胞克隆胚胎（山东，李建远，遭质疑）,四、克隆技术应用前景,培育优良畜种和生产实验动物；,生产转基因动物；,生产人胚胎干细胞用于细胞和组织 替代疗法；,复制濒危的动物物种。,五、克隆技术的伦理问题,2003.12,中国,人胚胎干细胞研究的伦理指导原则,2004.08,英国成为欧洲第一个允许,“,治疗性克隆,”,研究的国家,2005.02 59,届联大法律委员会以决议形式要求各国禁止有违人类尊严的任何形式的人体克隆,第五条用于研究的人胚胎干细胞只能通过下列方式获得：,（一）体外受精时多余的配子或囊胚；,（二）自然或自愿选择流产的胎儿细胞；,（三）体细胞核移植技术所获得的囊胚和单性分裂囊胚；,（四）自愿捐献的生殖细胞。,第六条进行人胚胎干细胞研究，必须遵守以下行为规范：,（一）利用体外受精、体细胞核移植、单性复制技术或遗传修饰获得的囊胚，其体外培养期限自受精或核移植开始不得超过,14,天。,（二）不得将前款中获得的已用于研究的人囊胚植入人或任何其它动物的生殖系统。,（三）不得将人的生殖细胞与其他物种的生殖细胞结合。,法国女科学家布里吉特,布瓦瑟利耶,帕诺斯,-,扎沃斯医生,2004.5,月,5,日，安蒂诺里在新闻发布会上称已有,3,名克隆人出世,Thank You,！,精液分析：,精液常规分析包括,:,精液量、色、酸碱度及精子形态、数目、活动力、存活率、精液中白细胞计数的检测。,精液常规正常范围,：,Volume:,2-6ml，PH：7.5-7.8,Total count:40,10,6,-20010,6,Concentration,2010,6,/ml，50%motile，Normal morphology 60%,Liquefaction:15-30 min.,年龄（岁）妊娠率（）,26 18.9,2630 13.9,3135 12.4,3640 11.1,4145 4.7,45 0.5,与年龄相关的IUI妊娠率,卵胞浆内单精子注射,适应症：,先天性睾丸发育不全、睾丸功能损害或排精管阻塞导致严重少精症，精子活力不足，精子畸形甚至无精症。,存在抗精子抗体。,常规,IVF,反复受精失败。,卵子冻存后受精。,不明原因不孕。,胚胎活检,留美博士刘家恩,胚胎在,植入前,采用分子生物学检测技术,进行,遗传学分析,挑选正常胚胎移植。,目的：,避免将遗传病,传给下一代。,2004,年,2,月第四代试管婴儿武汉出生，将是唯一一例。,“,3P”,婴儿,卵胞质置换术(,第四代试管婴儿,):,卵胞质对卵子质量有重要影响,将健康卵子胞质移植到老化卵子内以改善卵子质量,意义：如提高高龄妇女,胚胎存活及试管婴儿成功率,A.,人工诱发超排卵，采集卵细胞,超排卵（,superovulation,）,是指以药物的手段在可控制的范围内诱发多个卵泡的发育和成熟。,药 物,:,促性腺激素（,FSH,，,LH,，,HCG,）、促性腺激素释放激素（,GnRH,）及其类似物、,生长激素（,GH,）等。,常规使用：,GnRH-a-FSH/HMG-HCG,长,方案促排卵。,取卵方法:,最常用的是在局部麻醉下，经阴道超声引导，将取卵针穿过阴道穹窿直达卵巢吸取卵子，并立即在显微镜下将卵子移到含胚胎培养液的培养皿中，置培养箱中培养。,在获得卵子后，从供精者取得精液，室温20，2030min后精液液化进行常规检查。然后对精液进行一系列处理：清洗精子；去掉精浆；增强精子活力，培养液50min孵育，使精子获能和去除顶体酶后即可受精。,B,.,体外受精和体外培养,体外受精：,取卵后2-4小时，将处理后精子与卵子放在同一培养皿中，共同培养,18,小时后，可在显微镜下观察受精情况。,胚胎体外培养：,受精卵在体外培养2-3天后，可发育到4-16细胞期胚胎。,C.胚胎移植,时间：受精后的第2-3天移植。,移植数量：一般移植,24,个胚胎，多余的胚胎可冷冻保存。,卵裂期胚胎质量评估：,移植多个胚胎的原因：,经胚胎移植后的妊娠率只有2530，胎儿娩出成活率仅为1015。,一般移植2-4个胚胎为宜：,单,胚移植妊娠成功率为10.7,2个胚胎移植的成功率为32,4个胚胎移植的成功率为37.8,5个胚胎的成功率仅为13。,冷冻胚胎：,体外授精、胚胎移植后多余的胚胎，可以冷冻储存。,冷冻胚胎仪,面临的主要问题,：克服冷冻损伤，提高复温后胚胎的存活率。,涉及精子、卵子及胚胎的冷冻保存,2006年2月，国内诞生第一例“三冻”试管婴儿：,2003年11月冻存全部成熟卵细胞共19枚 17个月后解冻精子库冷冻精子经ICSI获13枚正常受精卵及胚胎,再次冻存胚胎 2005年5月解冻移植三胚，获宫内单活胎,同种体细胞克隆,细胞克隆,细胞培养技术,Cell Cloning,