T∕ZZB 0189-2017 饲料添加剂 维生素D3 微粒.pdf

T/ZZB 01892017 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 基本要求 . 1 4 技术要求 . 2 5 试验方法 . 2 6 检验规则 . 6 7 标签、包装、运输和贮存 . 7 8 质量承诺 . 7 附录 A（资料性附录） 化学名称、分子式、相对分子质量、化学结构式和性质 . 8 附录 B（资料性附录） 系统适用性图谱和维生素 D3标准溶液图谱 . 9 T/ZZB 01892017 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。 本标准由浙江省浙江制造品牌建设促进会提出并归口。 本标准由浙江省标准化研究院牵头组织制订。 本标准主要起草单位：浙江花园生物高科股份有限公司。 本标准参与起草单位：杭州下沙生物科技有限公司、浙江新和成股份有限公司、浙江医药股份有限公司（排名不分先后）。 本标准主要起草人：钱国平、刘晓明、吴妙兰、张彩菊、姚园园、方红进、杨金枢、梅娜。 本标准为首次发布。 本标准由浙江省标准化研究院负责解释。 T/ZZB 01892017 1 饲料添加剂 维生素 D3微粒 1 范围 本标准规定了饲料添加剂维生素D3微粒的基本要求、 产品要求、 试验方法、 检验规则、 标签、 包装、运输、贮存和质量承诺。 本标准适用于以饲料添加剂维生素D3 油为原料， 配以适量的抗氧化剂和辅料制成的饲料添加剂维生素D3微粒。 注：饲料添加剂维生素D3微粒的有效成分的化学名称、分子式、相对分子质量、化学结构式和性质参见附录A。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 5917.1 饲料粉碎粒度测定 两层筛筛分法 GB/T 6435 饲料中水分的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 10648 饲料标签 GB/T 13079 饲料中总砷的测定 GB/T 13088 饲料中铬的测定 GB/T 14699.1 饲料 采样 JJF 1070 定量包装商品净含量计量检验规则 3 基本要求 3.1 原材料 3.1.1 饲料添加剂维生素D3油应以羊毛脂胆固醇为原料制得， 杂质7-去氢胆固醇的含量不应大于3.0 %（面积归一法）。 3.1.2 明胶不应来源于牛羊源。 3.1.3 所有辅料应符合饲料原料目录、饲料添加剂品种目录的规定。 3.2 工艺及设备 3.2.1 乳化过程应采用微胶囊包埋技术。 3.2.2 干燥过程采用流化床干燥或喷雾干燥工艺系统。 3.2.3 包装过程应对金属异物进行在线报警及剔除。 3.2.4 干燥、筛分、包装过程所用电器应有粉尘防爆措施。 T/ZZB 01892017 2 3.3 检验检测 3.3.1 应具备稳定性考察的检测能力。 3.3.2 应具备产品技术指标全项检测能力，成品含量的检测设备应具备审计追踪功能。 4 技术要求 4.1 产品规格 500 000 IU/g。 4.2 外观和性状 本品为类白色至黄色微粒，具有流动性。 4.3 技术指标 技术指标应符合表 1 的要求。 表1 技术指标 项目 指标 维生素 D3的含量（占标示量） ，% 95.0110.0 粒度 100 %通过孔径为 0.85 mm 的试验筛 85 %以上通过孔径为 0.425 mm 的试验筛 干燥失重，% 5.0 重金属（以 Pb 计） ，mg/kg 10.0 总砷（As） ，mg/kg 1.0 铬，mg/kg 1.0 4.4 净含量 净含量偏差应符合 JJF1070 的规定。 5 试验方法 5.1 一般说明 5.1.1 试剂说明 除特殊说明外， 所用试剂均为分析纯； 色谱和光谱分析中所用水应符合GB/T 6682中一级水的规定，其它实验用水符合 GB/T 6682 中三级水的规定； 试剂和溶液的制备应符合 GB/T 601 和 GB/T 603 的规定。 5.1.2 操作警示 维生素D3含量检测应避光操作；氢氧化钾溶液、氢氧化钠溶液、硫酸是强腐蚀液，操作者需戴防护眼镜、手套，以防灼伤。 5.2 外观和性状检验 T/ZZB 01892017 3 取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下目测。 5.3 鉴别 5.3.1 试剂和溶液 鉴别试验所需试剂和溶液包括： a) 三氯甲烷； b) 乙酸酐； c) 硫酸。 5.3.2 鉴别试验 称取试样约 100 mg， 加三氯甲烷 （5.3.1.1） 10 mL， 研磨数分钟， 过滤。 取滤液 5 mL， 加乙酸酐 （5.3.1.2）0.3 mL，硫酸（5.3.1.3）0.1 mL，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后呈绿色。 5.4 维生素 D3含量 5.4.1 原理 试样中维生素 D3经皂化回流，正己烷萃取后，注入色谱柱，用流动相洗脱分离，在 254 nm 处测定，外标法计算维生素 D3的含量。 5.4.2 试剂和溶液 维生素 D3含量测定所需试剂和溶液包括： a) 正己烷； b) 正己烷（色谱纯）； c) 正戊醇； d) 95 %乙醇； e) 无水硫酸钠； f) 二丁基羟基甲苯（BHT）； g) 维生素 D3标准品，含量99.0 % （1 IU = 0.025 g）； h) 氢氧化钾溶液，500 g/L； i) 氢氧化钠溶液，c(NaOH) =1 mol/L，按 GB/T 601 的规定配制； j) L-抗坏血酸溶液：称取 L-抗坏血酸 3.5 g，于氢氧化钠溶液（5.4.2.9）20 mL 中溶解。本液应临用新配； k) 酚酞指示液，按 GB/T 603 的规定配制； l) 丙三醇淀粉润滑剂：称取丙三醇 22 g，加入可溶性淀粉 9 g，加热至 140 并保持 30 min，并不断搅拌，放冷； m) 氯化钠溶液，100 g/L； n) 标准贮备液：称取维生素 D3标准品 50 mg（5.4.2.7）（精确至 0.01 mg）于 50 mL 棕色容量瓶中， 用正己烷 （5.4.2.1） 溶解并定容， 摇匀后放于冰箱中保存。 该溶液含维生素 D3为 1000 g/mL。 5.4.3 仪器和设备 维生素D3含量测定所需仪器和设备包括： a) 分析天平，感量 0.1 mg 和 0.01 mg； b) 恒温水浴锅； T/ZZB 01892017 4 c) 超声波清洗器； d) 紫外灯； e) 高效液相色谱仪，带紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.4.4 测定方法 5.4.4.1 标准溶液制备 精密吸取标准贮备溶液（5.4.2.14）5 mL 于 100 mL 棕色容量瓶中，用正己烷（5.4.2.1）定容并摇匀。该溶液含维生素 D3约为 50 g/mL（相当于 2000 IU/mL）。 5.4.4.2 试样溶液制备 称取试样约 1 g（精确至 0.1 mg，相当于维生素 D3 5.0105 IU）于皂化瓶中，加入乙醇（5.4.2.4）30 mL、L-抗坏血酸溶液（5.4.2.10）5 mL 和氢氧化钾溶液（5.4.2.8）5 mL，置 90 水浴回流 30 min。自冷凝管顶端加水冲洗冷凝管内壁 2 次，每次用水 5 mL。取出皂化瓶用流水迅速冷却。将皂化液移至500 mL 分液漏斗（分液漏斗活塞涂以丙三醇淀粉润滑剂（5.4.2.12），皂化瓶先用水洗 2 次，每次 5 mL， 再用正己烷 （5.4.2.1） 洗涤 2 次， 每次 10 mL， 洗液并入 500 mL 的分液漏斗中， 加入正己烷 （5.4.2.1）60 mL 萃取； 静置分层， 水层转移至 250 mL 分液漏斗中， 再用正己烷 （5.4.2.1） 分 2 次萃取， 每次 50 mL；弃去水层，收集萃取液于 500 mL 分液漏斗中，正己烷层先用氯化钠溶液（5.4.2.13）80 mL 洗一次，再用水洗涤数次（每次用水 50 mL80 mL 洗涤，洗涤时应缓缓转动，避免乳化），直至水层遇酚酞指示液（5.4.2.11）不显红色为止。提取液用铺有脱脂棉与无水硫酸钠（5.4.2.5）的漏斗过滤，滤液放入 250 mL 棕色容量瓶，漏斗用正己烷（5.4.2.1）洗涤 35 次，洗液并入容量瓶中，再用正己烷（5.4.2.1）稀释至刻度，摇匀即得试样溶液。 5.4.4.3 测定 5.4.4.3.1 参考色谱条件 参考色谱条件如下： a) 色谱柱：硅胶，柱长 250 mm，内径 4.6 mm，粒度 5 m 或性能相当者； b) 流动相：正己烷（5.4.2.2）+ 正戊醇（5.4.2.3）= 99.6 + 0.4； c) 流速：2.0 mL/min； d) 检测波长：254 nm； e) 进样量：20 L。 5.4.4.3.2 系统适用性 量取维生素 D3标准贮备溶液（5.4.2.14）5 mL，置具塞玻璃容器中，通氮后密塞，置 90 水浴中加热 1 h，取出迅速冷却，加正己烷（5.4.2.1）5 mL，摇匀，置 1 cm 具塞石英吸收池中，在 2 支功率为8 W、主波长分别为 254 nm 和 365 nm 的紫外灯下，将石英吸收池斜放成 45 ，并距灯管 56 cm，照射5 min，过 0.45 m 滤膜，取该溶液注入液相色谱仪。所得色谱图应含有预维生素 D3、反式维生素 D3、维生素 D3和速甾醇 D3 4 个主要谱峰，且相邻色谱峰的分离度均大于 1.0。预维生素 D3色谱峰、反式维生素 D3 色谱峰和速甾醇 D3 色谱峰与维生素 D3色谱峰的相对保留时间分别约为 0.5、 0.6 和 1.1（参见附录 B 中图 B.1）。 5.4.4.3.3 预维生素 D3校正因子测定 T/ZZB 01892017 5 精密移取维生素 D3标准贮备溶液（5.4.2.14）5 mL100 mL 棕色容量瓶中，加入 BHT（5.4.2.6）20 mg，通氮排除空气后，密塞，在 90 水浴中加热 45 min，取出，迅速冷却，用正己烷（5.4.2.1）定容，摇匀，过 0.45 m 滤膜，该溶液按上述规定的色谱条件（5.4.4.3.1），至少做 5 个平行测定，得维生素 D3峰面积 A*和预维生素 D3峰面积 A*pre。同样取标准溶液（5.4.4.1）分析，得维生素 D3峰面积A 和预维生素 D3峰面积 Apre，按下述公式（1）计算预维生素 D3校正因子 F。 prepreAAAAF*= . (1) 式中： A 标准溶液中维生素 D3 的峰面积； A* 标准溶液 90 水浴加热后维生素 D3 的峰面积平均值； A*pre 标准溶液 90 水浴加热后预维生素 D3 的峰面积平均值； Apre 标准溶液中预维生素 D3 的峰面积。 5.4.4.4 试样定量测定 将维生素 D3 标准溶液（5.4.4.1）和试样溶液（5.4.4.2）过 0.45 m 滤膜，按上述规定的色谱条件（5.4.4.3.1）进样分析，得到维生素 D3 峰面积和预维生素 D3 峰面积。 5.4.4.5 计算和结果的表示 维生素D3 含量X1 ，以万IU/g 表示，按式(2)计算： 10000)()(r,1+=mAAFVCAAFXprerrspres . (2) 式中： F 预维生素 D3 校正因子； As，pre 试样溶液中预维生素 D3 峰面积； As 试样溶液中维生素 D3 的峰面积； Ar 标准溶液中维生素 D3 的峰面积； Ar，pre 标准溶液中预维生素 D3 的峰面积； Cr 标准溶液的上机浓度，单位为国际单位每毫升（IU/mL）； V 试样溶液的稀释总体积，单位为毫升（mL）； m 称取试样的质量，单位为克（g）。 维生素 D3 含量 X2（占标示量），以%表示，按式（3）计算： 10012=XXX. (3) 式中： X1 维生素 D3含量，单位为万国际单位每克（万 IU/g）； X 维生素 D3标示量，单位为万国际单位每克（万 IU/g）。 注：取两次测定结果的算术平均值为测定结果，计算结果表示至小数点后一位，两次平行测定结果相对偏差应不大于2.0 %。 T/ZZB 01892017 6 5.5 粒度 按 GB/T 5917.1 中的规定执行。 5.6 干燥失重 按 GB/T 6435 中的规定测定。 5.7 重金属 按中华人民共和国药典2015 版四部通则 0821 重金属检测法规定执行。 5.8 总砷 按 GB/T 13079 中的规定执行。 5.9 铬 按 GB/T 13088 中的规定执行，以原子吸收光谱法（火焰法）测定为仲裁法。 5.10 净含量 用适宜感量的衡器进行测定。 6 检验规则 6.1 采样方法 按 GB/T 14699.1 中的规定执行。 6.2 组批 以相同原料，相同生产工艺，连续生产或同一班次生产的均匀一致的产品为一个生产批次。 6.3 出厂检验 第 4 章所列项目中，外观、维生素 D3 含量、粒度、干燥失重、净含量为出厂检验项目。 6.4 型式检验 型式检验项目为第4章的全部要求。产品正常生产时，每半年至少进行一次型式检验，但有下列情况之一时，亦进行型式检验： a) 产品定型时； b) 生产工艺或原料来源有较大改变，可能影响产品质量时； c) 停产三个月以上，重新恢复生产时； d) 出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时。 6.5 判定规则 检验结果有一项指标不符合本标准要求时， 应重新从两倍量的包装单元中采样进行复验， 复验结果仍有一项指标不符合本标准要求时，则整批产品判为不合格品。 T/ZZB 01892017 7 7 标签、包装、运输和贮存 7.1 标签 应符合 GB 10648 中的规定。 7.2 包装 采用密闭、避光包装, 包装材料应无毒无害，并符合相应的标准要求。 7.3 运输 本品在运输过程中应避光、防潮、防高温、防止包装破损，不得与有毒有害物质混运。 7.4 贮存 应贮存在 25 以下的通风、干燥、避光处，禁止与有毒有害物质混储。 8 质量承诺 8.1 产品在正常运输和存储条件下，保质期为 24 个月。 8.2 产品应具有可追溯性。 8.3 产品质量有异议的，应在 24 小时内作出处理响应，及时为用户提供服务和解决方案。 T/ZZB 01892017 8 A A 附 录 A （资料性附录） 化学名称、分子式、相对分子质量、化学结构式和性质 A.1 化学名称、分子式、相对分子质量、化学结构式和性质 化学名称：(3,5Z,7E)-9,10-开环胆甾-5,7,10(19)-三烯-3-醇 分子式：C27H44O 相对分子质量：384.65(2016年国际相对原子质量) 化学结构式： 性质：本品遇热、见光或吸潮后易降解。 HOHCH2CH3HHHCH3CH3CH3 T/ZZB 01892017 9 B B 附 录 B （资料性附录） 系统适用性图谱和维生素 D3标准溶液图谱 B.1 系统适用性试验图谱见图 B.1。 说明： 1预维生素D3； 3维生素D3； 2反式维生素D3； 4速甾醇D3。 图B.1 系统适用性图谱 B.2 维生素D3标准溶液图谱见图B.2。 说明： 1维生素D3。 图B.2 维生素 D3标准溶液图谱 T/ZZB 01892017 10 B.3 维生素D3标准溶液经 90水浴处理后图谱见图B.3。 说明： 1预维生素D3； 2维生素D3； 图B.3 维生素 D3标准溶液 90加热后色谱图 _