NY∕T 3144-2017 饲料原料 血液制品中18中β-受体激动剂的测定 液相色谱-串联质谱法(农业).pdf

ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3144一2017饲料原料血液制品中18种-受体激动剂的测定液相色谱-串联质谱法Determination of 18 -agonists in blood products feedstuff一Liquid chromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS) 2017 -12-22发布2018-06-01实施中华人民共和国农业部发布目。本标准按照GB/T1. 1一2009给出的规则起草。本标准*农业部畜牧业司提出。本标准由全同饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。NY/T 3144-2017 本标准起草单位:中同农业科学院农业质量标准与检测技术研究所同家饲料质盐监督检验中心(北京)J。本标准主要起草人:索德成、王培龙、李阳、王瑞罔、苏晓鸥、樊霞、周炜、冯令、李宏。I NY/T 3144-2017 饲料原料血液制品中18种p-受体激动剂的测定液相色谱一串联质谱法范围本标准规定了饲料原料血液制本标准适用于血球蛋白粉胶醇CSalbutamo)、莱克多他林CTerbutaline)、两CBrombuterol)、班布(Ritodrine)、沙A)18种R2 件。本标GB/ T GB/ T GB/ T 3 原理4 试剂除非另有说明，4. 1 甲醇:色谱纯。4.2 甲酸:色谱级。色谱-串联质谱法。罗CClenbutero)、沙丁( Clorprenaline)、特布buterol)、澳布特罗lobuterol)、利托君ylethanolamine 于本文4. 3 乙酸镀提取液(pH=5.2):珊IJII.副牛g，用1000且4用乙酸调pH至5.20 4. 4 样品稀释溶液:取甲酸0.1mL, 4. 5 氨水甲醇榕液:取5mL氨水与95mL甲醇混合。4.6 高氯酸溶液:取30mL高氯酸与70mL水混合。4. 7 克仑特罗、沙丁胶醇、莱克多巴胶、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、两马特罗、两布特罗、马布特罗、澳布特罗、班布特罗、克仑普罗、妥布特罗、利托君、沙美特罗、克仑塞罗、桶莫特罗和苯乙醇胶A对照品:纯度二三98%。4.8 -受体激动齐IJ标准储备液:分别精密称取各种-受体激动剂对照lHl至棕色容盐瓶中，用甲醇配成浓度为1mg/mL的标准储备液，20C80C冷藏保存，有效期12个月。4. 9 日-受体激动剂标准工作液:分别精密吸取各种R受体激动剂储备液(4.的，用样品稀释溶液稀释NY/T 3144-2017 成浓度为1g/mL的标准工作液。20C80C冷藏保存，有效期3个月。4. 10 -葡萄糖背酸酶/芳基硫酸醋酶:自-盐酸葡萄糖醒背酶二三85000u/mL。4. 11 氯气:纯度99.9%。4. 12 同相萃取小柱:混合型阳离子交换柱(3mL,60 mg)，或其他性能相当的小柱。4. 13 滤膜:0.22m，有机材质。5 仪器和设备5. 1 液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾电离源。5.2 氮吹仪。5. 3 离心机:转速不低于8000r/min。5. 4 粉碎机。5. 5 涡旋振荡器。5. 6 恒温水浴振荡摇床。5. 7 网相萃取装置。5. 8 天平:感量0.01g;感茧0.00001g。6 采样和试样的制备按GB/T14699. 1的规定抽取有代表性的样品，用四分法缩减取样，按照GB/T20195的规定制备样品，粉碎过0.45mm孔径筛，混合均匀，装入磨口瓶中备用。7 分析步骤7.1 提取称取2g(精确至O.01 g)样品于50mL离心管中，准确加入20mL乙酸镀提取液(4.3)和50L-葡萄糖昔酸酶/芳基硫酸酣酶，37C水解过夜(应大于16h)，然后于8000r/min离心5min，将 10mL上清液转移至另一离心管中，加人1.0 mL高氨酸溶液，涡旋j昆合30s，然后于8000r/min离心5min，上清液备用。7. 2 净化罔相萃取小柱依次用3mL甲醇、3mL水洞化。取适量或全部上清液过柱，用3mL水和3mL甲醇淋洗，抽干，用氨水甲醇榕液3mL洗脱，收集洗脱液，用氮吹仪在500C条件下吹干或用旋转蒸发仪蒸干，用1.0 mL样品稀释液(4.4)溶解，过O.22m滤膜。如果检测含量超出线性范罔c1g/L100g/U，应适当减少称样盐重新处理或减少过固相萃取小柱的溶液茧，将上机溶液所含药物的浓度稀释至线性范罔内上样。7.3 空白基质曲线的制备选取待测样品类型相同的空白血粉样品，称取6份或2份双平行，每份2g(精确至0.01g) ，于50mL离心管中，按7.1和7.2步骤处理，在净化、吹干后的残渣中，分别添加适量的混合标准工作溶液，配制成不同浓度。同/L100g/U的基质添加标准曲线或双平行单点标准榕液，供液相色谱-串联质谱测定，进行定量。7.4 参考液相色谱条件2 色谱柱:C18柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径1.7m(或其他效果等同的C18柱)。柱温:300C。进样量:10L。流动相及参考梯度洗脱程序见表10表1流动相及参考梯度洗脱程序时间，mtn流速，mL/minO 1.0 2. 0 6. 0 7. 0 8. 0 9. 1 10 7.5 参考质谱条件离子源:电喷雾离子源。扫描方式:正离子模式。检测方式:多反应监测。O. 3 O. 3 O. 3 O. 3 O. 3 O . 3 O . 3 O . 3 O. 1 % fT1 主溶液，%乙脯，%95 5 95 5 80 20 70 30 10 90 10 90 95 5 95 5 NY/T 3144-2017 rt11线6 6 6 6 6 6 6 6 脱、溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氯气及其他合适气体，使用前应调节各气体流盐以使质谱灵敏度达到检测要求。毛细管电压、锥孔电压、碰撞能茧等电压值应优化至最佳灵敏度。定性离子对、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见表20表218种?受体激动剂的定性离子对、定量离子对及锥孔电压、碰撞能量的参考值被测物名称定性离子对，m/z定量离子对，m/z锥孔电压，V碰撞能量，cV两马特罗220. 1 202. 1 10 220. 1 202. 1 16 220.1 160.1 16 马布特罗311. 1 237. 1 16 311. 1 237. 1 26 311. 1 217. 1 25 阿布特罗234. 2 162. 0 16 234. 2 62. 0 23 234. 2 216. 2 10 澳布特罗367. 0 293. 0 19 367. 0 293. 0 25 367. 0349. 0 12 莱克多巴胶302.4 164. 4 17 302.4 164.4 26 302. 4 284. 4 13 氯丙那林214.0 154. 1 17 214. 0 154. 1 25 214. 0 96.1 12 特布他林226. 3 152. 3 17 226. 3 152. 3 25 226. 3 170. 3 12 齐帕特罗262. 3 244. 3 13 262. 3 244. 3 24 262. 3185. 3 24 沙丁胶酶240. 3 48.3 20 240. 3 148. 3 22 240. 3 222.3 10 克仑特罗277. 0 203. 0 17 277. 0203.0 25 277. 0 259. 0 11 克仑普罗262. 8 244. 9 14 262. 8 202. 8 19 262. 8 202. 8 16 妥布特罗227.8 153. 7 14 227.8 153. 7 19 227. 8 171. 7 9 367.971. 7 30 tff.布特罗367. 9294.0 25 17 367.9 294. 0 3 NY/T 3144-2017 被测物名称苯乙醇胶A桶英特罗利托君克仑来罗t!、美特罗7. 6 定性测定定性离子对.m/z每种被测组分选择与混合标准溶液中对度接近的标准榕液8 计算算，也可按式。式中:P; 试样、溶液中待V1一一试样提取液体积，C; 待测激动剂标准榕V3一一上机前定容体积，单位为毫升(p$一一标准榕液峰面积平均值;m一试样质量，单位为克(g); 表2(续)定量离子对.m/z345.1 150. 0 345. 2 149. 0 288. 2270. 1 V2一-一净化时分取溶液的体积，单位为毫升(mL)。锥孔电压.V22 22 20 22 测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。9 重复性碰撞能量.eV待测物质的保留时间子的相对丰度与浓范围，则可判定为在重复性条件下，获得的2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于这2个值算术平均值的20%。NY/T 3144-2017 附录A(资料性附录)18种-受体激动剂标准溶液的液相色谱串联质谱离子流色谱图18种自受体激动剂标准溶液的液相色谱-串联质谱离子流色谱阁见阁A.1。LR M四0000000000000000000000000000向llIlli-s ES+ LUOl 48e4 ,70 二:MJ:M01 JU L.l1annel 262.2 244(QlAT 00 1.00 2. 3.00 4.00 5.00 6 7.00 8.00 9 2:MRM of 30 Channel 2 240 1咄SHADINGANS 1.00 2 3 4.00 5.00 6) 7.00 8.00 9.00 2MRM of 30fCrhEmBUn可el 3 226 152 1. 2 3. 4.00 5.00 6 7.00 8. 2.W lRM 9.o ,30 Channel 4 220.1 202.1 (XlMAT 2 00 1.00 2.00 3. 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 2:MRM of 30 Channel 5 234 160(XlUT ) 1.00 2 3. 4.00 5.00 6.00 7.00 8. 9 6 2:MRM 030 Channel 288 12!.2(UTU 1.) 2 3. 4.00 5.00 6.00 7.00 8 3:MRM9o f31 Channel 7 319.1 202.9(KELUNSAj 4 1.00 2 3. 4.00 5.00 6. 7 8 9 8 3:MRM of 31 Channel 302.2 163.9(LAlKEDUOf! 1.00 2飞73. 4.00 5.00 6 7.00 82:MRJtS电oChannel 9 263.1 245.2(阳LUNPU。1.00 2.00 3. 4.00 5.00 6) 7.00 8.00 9. 2:MRM of 30 Channel 10 213.9 153.9(LVBINGN, 5 l川2. 3 4.00 5.00 6. 7.00 83:MRJ-1 Channel 11 345 149(FUMATE l 00 1.00 2. 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 2:MRM of30 Channel, 12 228 154(lUOUg 2 ) 1.00 2. 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.2川MRM9 2oorm30ECLhUanNnTe号l, 13 00 1.00 2. 3 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 3MRM of 933 l Ch四114 367 293(XlU 00 1.00 2.00 3 4.00 5.00 6. 7.00 8 9 s ES+ HUN) .39e5 s ES+ TAUN) .66e5 els ES+ LUO .42e5 +灿73QJvf飞eUNU句3sL4 e els ES+ OJUN) .13e5 +日73句、Jr-、UEMmn nQU s ES+ AAN) .04e5 lsES+ LUOl 15e5 +、J、JSF!e EU口SAi1 els ES+ LUOl .56e5 els ES+ LUO) .35e5 ls ES+ LUOl .61e5 els ES+ UTELOl 2.45e5 ,ffiJfl 图A.l18种!受体激动剂标准溶液(浓度为10g/L)的液相色谱-串联质谱离子流色谱图r d NYjT 3144-2017 响应白，%6 15 0.00 1.00 16 O. 1.00 17 0.00 1.00 18 。0.001.00 说明:l一一齐帕特罗;2 沙丁胶醉;3一一特布他林;4一一四马特罗35一一澳布特岁;6一一手IJ托和;7 克仑塞岁，8 莱克多巳胶;9一一克仑普;2.00 3.00 4.00 2 3.00 4.00 2.00 3.00 4.00 2.) 3. 4.仪)5.99 5 6.00 6.44 5创)6.00 5.00 6.00 5.00 6.00 10一一认内fJl林;11一一初英特岁;12一-妥布特岁;13一-克仑中夺;14一一内布将;15一-班1特;16 马布特罗，17一一-苯乙醉!废A;18一一沙美特罗。图A.l(续)7.00 7.00 7.00 7.3:MRM of 31 Channels ES+ 368294(bMElmteiUleEJ Q 2.7 8.00 3:MRM9.o0f0 31Channels ES+ 31092169(mab2uM.2l7ueE5O 8.00 9.创)7.87 3:MRM of 31 Channels ES+ 5llT蚓8003R9M 89.o30f (O S3Hl ACMhaEnnneElls L0IU4iS e0+ 5 1 3:M 7.95tI6.2 8.00 9.00 t，町unhFON|寸寸轩的同MVZ中华人民共和国农业行业标准饲料原料血液制品中18种!受体激动剂的测定液相色谱-串联质谱法NY/ T 3144- 2017 兴中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼(邮政编码100125网址.ccap. corn. cn) 北京印刷一厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销长.* 关开本880rnrnX1230rnrn 1/16 印张O.75 字数15千字2018年5月第l版2018年5月北京第1次印刷书号16109 4387 定价18.00元关头版权专有僵权必究举报电话[phone] NY/T 3144-2017