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*第九章第九章 不发酵革兰阴性杆菌不发酵革兰阴性杆菌张 楠*不发酵革兰阴性杆菌不发酵革兰阴性杆菌*定义：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌；多为条件致病菌。葡萄糖OF反应结果*不发酵菌主要特点不发酵菌主要特点*氧化酶：；不动杆菌，嗜麦芽窄食单胞 菌属除外,部分洋葱伯克霍尔德菌。*O/F试验：O/*动力试验：多数有鞭毛，但半固体动力试验不明显，常采用镜检或鞭毛染色*肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别鉴定试验鉴定试验肠杆菌科肠杆菌科非发酵菌非发酵菌弧菌科弧菌科氧化酶氧化酶葡萄糖氧化葡萄糖氧化/发酵（发酵（O/F）FOF鞭毛鞭毛周鞭毛周鞭毛单、丛、周单、丛、周单、丛单、丛常见不发酵革兰阴性杆菌的初步分群鉴定常见不发酵革兰阴性杆菌的初步分群鉴定试验试验假单胞菌属假单胞菌属无色杆菌属无色杆菌属黄杆菌属黄杆菌属不动杆菌属不动杆菌属产碱杆菌属产碱杆菌属丛毛菌属丛毛菌属莫拉菌属莫拉菌属氧化酶氧化酶+/-+/-O/F试验试验O/-OOO/-动力动力+/-+/-+/-+-注：注：+：90%以上阳性；以上阳性；-10%以下的阳性；以下的阳性；+/-：约：约70%为阳性；为阳性；O：为氧化。：为氧化。不发酵革兰阴性杆菌不发酵革兰阴性杆菌*第一节第一节 假单胞菌属假单胞菌属*假单胞菌属细菌根据rRNA-DNA同源性分为5群，其中群最多见共12种细菌，代表菌种为铜绿假单胞菌。*假单胞菌属多为条件致病菌，占非发酵菌感染的70-80%。*现把II、V群分别独立为伯克霍尔德属及窄食单胞菌属。*假单胞菌属共同点假单胞菌属共同点*革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单或丛鞭毛*专性需氧*氧化酶：*O/F：O*产生水溶性色素*二二 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌*假单胞菌属的代表菌种，假单胞菌感染主要为铜绿假单胞菌，分布广泛主要的条件致病菌。*铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌形态染色形态染色*革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单鞭毛（一）生物性状（一）生物性状形态染色性：革兰阴性菌杆，呈球杆状或长丝状，长短不一，单个或短链排列。无芽胞，无荚膜，单端单鞭毛，运动活泼。培养特性：专性需氧，4不长，42可生长。血平板：典型的菌落扁平、湿润、毛玻璃样、金属光泽、有透明的溶血环、生姜味、菌落和培养基灰绿色 普通平板：可产多种色素，主要有：绿脓素（兰绿色，可溶于水）和荧光素（即青脓素，黄或黄绿色，只溶于水）。从临床标本中分离的菌株大多产生此色素（90%）铜绿假单胞菌在血琼脂平板上的菌落特征（18-24h）*80-90%80-90%产生绿脓素和荧光素产生绿脓素和荧光素铜绿假单胞菌产荧光素铜绿假单胞菌产荧光素铜绿假单胞菌产绿脓素铜绿假单胞菌产绿脓素铜绿假单胞菌绿脓素铜绿假单胞菌荧光素 麦康凯上可形成5种不同形态的菌落：典型型：灰绿色，大小不一，扁平湿润，边缘不齐，表面可见金属光泽。大肠菌群型：圆形凸起，灰白色半透明。粗糙型：菌落中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。侏儒型：细小无光泽，半透明菌落粘液型：光滑凸起呈粘液状生化反应：氧化酶，O/F上能氧化分解葡萄糖、木糖产酸、精氨酸双水解酶，枸橼酸盐，硝酸盐。抵抗力：较强，临床分离株对多种抗生素耐药葡萄糖OF反应结果 （二）致病性：（二）致病性：可产生多种致病物质：菌毛、荚膜、胞外酶和溶血物质、内毒素、外毒素.除自然界外，也存在于人体皮肤上及与外界相通的腔道中。多为继发感染，如烧伤后的创面感染，也可引起肺炎、脑膜炎、尿道感染，严重时可引起败血症，死亡率甚高。（三）微生物学检验（三）微生物学检验*1、显微镜检查：标本直接涂片革兰染色镜检；鞭毛染色镜检*2、培养：标本接种血平板、Mac平板分离培养，血标本先增菌，再转种*3、鉴定：*初步鉴定：菌落特征、水溶性绿色色素、生姜气味、氧化酶、O/F*全面鉴定：色素不典型者需全面鉴定*铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌检验程序检验程序标本标本 增菌增菌 分离培养分离培养（血平板）（血平板）最后鉴定最后鉴定可疑菌落（性状、色素）可疑菌落（性状、色素）初步鉴定初步鉴定 涂片涂片染色镜检染色镜检血标本血标本涂片镜检涂片镜检氧化酶氧化酶菌落特征菌落特征绿脓素绿脓素气味气味色素鉴定色素鉴定生化反应生化反应42生长生长分型分型O/F：O枸櫞酸盐利用枸櫞酸盐利用精氨酸双水解精氨酸双水解乙酰胺酶乙酰胺酶明胶液化明胶液化*荧光假单胞菌荧光假单胞菌*革兰阴性杆菌，单端丛鞭毛*专性需氧*营养要求不高，普通平板、Mac平板可生长*最适生长温度2530，4生长，35、42不生长*产生水溶性荧光素（青脓素），不产绿脓素*氧化酶；O/F：O；卵磷脂酶；明胶液化*具有嗜冷性，可在冰箱储存血中繁殖*恶臭假单胞菌恶臭假单胞菌*革兰阴性杆菌，单端丛鞭毛*专性需氧*最适生长温度2530，4及42不生长*产生水溶性荧光素（青脓素），不产绿脓素；陈旧培养物有腥臭味*氧化酶；O/F：O；卵磷脂酶；明胶液化*第二节第二节 伯克霍尔德菌属伯克霍尔德菌属*属于rRNA第II群*主要有马勒伯克霍尔德菌、伪马勒伯克霍尔德菌、洋葱伯克霍尔德菌等*条件致病菌。*马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌菌*鼻疽病与类鼻疽病的病原体*2004年NCCLs称为可能成为生物恐怖的细菌*肺鼻疽病、皮肤鼻疽病、内脏脓肿、菌血症、脓毒血症*生物学特性生物学特性 *革兰阴性杆菌*无芽胞、无荚膜*伪马勒鼻伯克霍尔德菌一端有丛鞭毛(14 根)，42生长*马勒鼻伯克霍尔德菌无鞭毛无动力，42 不生长*洋葱伯克霍尔德菌洋葱伯克霍尔德菌染色：细小阴性杆菌菌落：细小透明的菌落、可产黄色素、紫色素生化:O/F非发酵，有动力，多数氧化酶阳性（缓慢阳性）。*三、嗜麦芽窄食单胞菌三、嗜麦芽窄食单胞菌*属于假单胞菌科的rRNA同源群*嗜麦芽窄食单胞菌（S.maltophilia）和S.africana分类分类*临床意义临床意义*为条件致病菌*呼吸道、泌尿道、伤口等部位感染，菌血症及心内膜炎。*在不发酵菌引起的感染中，仅次于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌，居临床分离阳性率的第三位第三位。*生物学性状生物学性状*形态与染色形态与染色：革兰阴性，端鞭毛，革兰阴性，端鞭毛，(18)根根 无芽孢、无荚膜无芽孢、无荚膜*培养特性培养特性:生长温度为生长温度为35，4不生长血琼不生长血琼 脂、普通培养基均能生长脂、普通培养基均能生长*血平板上血平板上:菌落中等大小、圆形、光滑、湿润、菌落中等大小、圆形、光滑、湿润、产生不溶血的产生不溶血的黄色色素黄色色素*嗜麦芽窄食单胞菌菌的菌落形态嗜麦芽窄食单胞菌菌的菌落形态*生化鉴定：氧化酶阴性氧化酶阴性 O/F氧化型氧化型 有动力有动力 液化明胶 水解七叶苷 赖氨酸脱羧酶阳性 氧化分解麦芽糖 DNA酶阳性*药物敏感试验及结果解释药物敏感试验及结果解释*治疗首选磺胺类：TMP/SMZ；喹锘酮类：环丙 氟派酸或替卡西林/棒酸*泰能泰能(Imipenem)天然耐药天然耐药*药敏试验纸片法仅有三种抗生素：左氧氟沙星、米诺环素、复方磺胺有折点。其他药敏试验应选用肉汤、琼脂稀释法作MIC，或采用E-TEST的方法。*洋葱与嗜麦芽的鉴别洋葱与嗜麦芽的鉴别 第四节第四节 不动杆菌不动杆菌 不动杆菌（Acinetobacter）为一群氧化酶阴性，不发酵糖类、无动力的革兰阴性菌。含6个种：醋酸钙不动杆菌 洛菲不动杆菌 溶血不动杆菌 鲍曼不动杆菌 琼氏不动杆菌 约翰逊不动杆菌 一、生物学性状 形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列，不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。培养特性 专性需养，营养要求不高。最适温度35，鲍曼不动杆菌42可生长。血平板上 圆形凸起、23 mm ，光滑、边缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶血不动杆菌可形成 -溶血环）；不产生色素。麦康凯平板 形成粉红色菌落。革兰阴性球杆菌，常成双排列，不易退色鲍曼不动杆菌在血琼脂平板上的菌落特征（18-24h）鲍曼不动杆菌在麦康凯琼脂平板上的深红色菌落（19-24h）生化反应 触酶阳性，葡萄糖O/F为氧化型。氧化酶（）硝酸盐还原（）硝酸盐还原（）。动力（），动力（），生化三阴生化三阴。二、致病性 该菌广泛存在于自然界，属条件致病菌，也是医院感染的常见病菌之一，常引起呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染。三、鉴定（1）直接镜检：）直接镜检：染色为革兰阴性球菌或球杆菌，染色为革兰阴性球菌或球杆菌，成双排列成双排列。（2）生化反应）生化反应：氧化酶（）氧化酶（），硝酸盐还原（）硝酸盐还原（）。动力（）动力（），不发酵葡萄糖不发酵葡萄糖。符合上述即可判定为不动杆菌属的细菌。符合上述即可判定为不动杆菌属的细菌。*4.两种不动杆菌的鉴别两种不动杆菌的鉴别*第五节第五节 产碱杆菌属产碱杆菌属粪产碱杆菌粪产碱杆菌木糖氧化产碱杆菌木糖氧化产碱杆菌木糖氧化产碱杆菌木糖氧化产碱杆菌 氧化亚种氧化亚种木糖氧化产碱杆菌木糖氧化产碱杆菌 脱硝亚种脱硝亚种*产碱杆菌属产碱杆菌属主要特征主要特征*革兰阴性杆菌、有周鞭毛、无芽孢、无荚膜*专性需氧*营养要求不高，普通平板和Mac平板上可生长*氧化酶、O/F：-/-、不分解任何糖*是医院感染病原菌之一，粪产杆菌多见*产碱杆菌属产碱杆菌属鉴定要点鉴定要点*革兰阴性杆菌*氧化酶*O/F：-/-*动力：+*硝酸盐还原；亚硝酸盐还原*KIA：底层斜面不变色*第六节第六节 黄杆菌科黄杆菌科*革兰阴性杆菌，无鞭毛*专性需氧、营养要求不高，普通平板上生长，形成黄色色素*麦康凯平板上不生长*氧化酶*O/F：O*黄杆菌：黄色色素黄杆菌：黄色色素*第七节第七节 莫拉菌属莫拉菌属*微生物特性微生物特性*革兰阴性球杆菌*呈双短链状排列，具有多形性*微生物检验微生物检验 分离培养：分离培养：*营养要求较高*生长温度3235*血琼脂平板上生长良好*针尖大小的圆形凸起、光滑、半透明、边缘整齐不溶血的菌落。*微生物检验微生物检验鉴定：鉴定：*酶阳化氧性*触酶阳性*无动力*不分解任何糖类*吲哚试验阴性*第六节第六节 军团菌属军团菌属*分类分类*军团菌属(Legionella)属于军团菌科（Legionellaceae）*常见的与人类疾病有关的军团菌：*嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）*米克戴德军团菌（L.micdadei）*长滩军团菌（L.longbeachae）*杜莫夫军团菌（L.dumoffii）*波兹曼军团菌（L.bozemanii）*临床意义临床意义*引起肺炎型和非肺炎型(庞蒂亚克热Pontiac fever)感染*肺炎型：多器官损害，肺部、消化道及神经系统症 状及体征，致死率高*医院感染可高达23%*慢性心、肺、肾病变、艾滋病或接受免疫抑制剂者 易发本病，且死亡率高达45%*临床意义临床意义 空气乳胶微粒传播 发病机制：内毒素和细胞产生的多种酶 裂解红细胞 消化卵黄囊*生物学特性生物学特性*革兰阴性杆菌*菌体呈线状*无芽胞，无荚膜，有端 鞭毛或侧鞭毛*严格需氧*触酶阳性*可液化明胶*不分解糖类*部份菌株氧化酶阳性*微生物检验微生物检验 分离培养：分离培养：*营养要求苛刻，生长缓慢*生长温度为35*最适pH6.77.0*初次分离必须采用(BCYE)*35天可形成12mm直径的光泽菌落*核酸检测核酸检测：是快速特异的方法，采用DNA探针及PCR扩增rRNA的方法均可用于军团菌的快速诊断*抗体检测：是抗体检测：是检测军团菌感染临床常用手段，常采用方法：IFA、MAA、TAT、ELISA法等 非发酵菌非发酵菌嗜麦芽窄食单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌葡萄糖产酸葡萄糖产酸无色杆菌属无色杆菌属土壤杆菌属土壤杆菌属假单胞菌属、洋葱伯克假单胞菌属、洋葱伯克动力动力+OXOX不动杆菌属不动杆菌属+葡萄糖产酸葡萄糖产酸黄色素黄色素莫拉菌属莫拉菌属黄杆菌属黄杆菌属+端鞭毛端鞭毛+产碱杆菌属产碱杆菌属尿素尿素+常见不发酵菌的鉴定双岐索引常见不发酵菌的鉴定双岐索引-思考题：1、什么叫非发酵菌？有何特点？2、铜绿假单胞菌在形态和培养特性有 何特性？如何鉴定铜绿假单胞菌？3、如何鉴定不动杆菌？*测验测验1*关于铜绿假单胞菌，错误的是 A 革兰阴性杆菌 B 氧化酶、触酶 C 硝酸盐还原 D 产生水溶性蓝绿色素 E 菌落有金属光泽*测验测验2*下列哪项是非发酵菌的主要特征 A 需氧或兼性厌氧 B 革兰阴性杆菌 C 营养要求不高 D 无芽孢 E 不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用糖*测验测验3*对革兰阴性杆菌出现下列哪种特征，可怀疑为非发酵菌 A 氧化酶 B 发酵葡萄糖 C 动力阴性 D 触酶 E 氧化利用麦芽糖*测验测验4*关于不动杆菌错误的是 A 氧化酶 B 硝酸盐还原 C 革兰阴性杆菌，形态多为球杆状 D 无动力 E 专性需氧