外周血BDNF、miR-132及NfL对遗忘型轻度认知障碍患者向阿尔茨海默病转化的风险预测价值.pdf

:1008外周血BDNF、m i R-132 及NfL对遗忘型轻度认知障碍患者向阿尔茨海默病转化的风险预测价值Modern Practical Medicine,August 2023,Vol.35,No.8张金娜，颜蓉【摘要】目的评估外周血脑源性神经营养因子(BDNF)、m i-RNA 132(m i R-132)及神经丝轻链蛋白(NfL)水平对遗忘型轻度认知障碍（aMCI）患者向阿尔茨海默病（AD）转化的风险预测价值。方法选取2 0 18 年6 月至2 0 2 2 年9月绍兴市第七人民医院神经内科确诊的AD患者9 0 例（AD组）,aMCI患者8 3例（aMCI组）。采用ROC曲线分析评估外周血BDNF、m i-RNA 132 及NfL对aMCI向AD转化的风险预测价值，采用Logistic回归分析外周血BDNF、m i-RNA 132 及NfL对aMCI向AD转化的影响。结果外周血BDNF、m i-RNA 132 及NfL对aMCI向AD转化的风险预测ROC曲线，得到AUC分别为0.7 2 9、0.6 52 和0.8 0 4，mi-RNA132曲线效能低于NfL曲线（P0.05）。Lo g i s t i c 回归分析显示，外周血BDNF、mi-RNA 132 及NfL对aMCI向AD转化的OR分别为0.7 2 4、0.0 10和1.2 0 3。结论外周血BDNF、m i-RNA 132 及NfL水平对aMCI患者向AD转化有风险预评估价值，其中BDNF表现出稳定且良好的评估价值；mi-RNA132单因素风险评估价值偏低，在多因素分析条件下预测价值较高；NfL诊断指标特异度较好，可用于排除假阳性样本。【关键词】阿尔茨海默病；遗忘型轻度认知障碍；脑源性神经营养因子；mi-RNA132；神经丝轻链蛋白doi:10.3969/j.issn.1671-0800.2023.08.008【中图分类号】R749.1*6【文献标志码】A阿尔茨海默病（AD）相关症状具有隐匿性与进展性的特点，约33.7%的老年人在认知正常阶段，已经存在AD相关病理改变。因此,早期诊断与干预对改善预后具有重要意义。轻度认知障碍(MCI)是痴呆前认知障碍症状存在期，该时期可早于痴呆发病10 2 0 年，患者通常表现为主观认知功能下降，但客观认知、日常生活及社会功能相对完善。现阶段较为成熟的进行性神经损伤检测方式为脑脊液生物标志物检测（诸如A蛋白、Tau蛋白)与影像学检测（PET或MRI等），其多具有侵入性，且成本较高。本研究评价外周血脑源性神经营养因子(BDNF)、mi-RNA132（m iR-132）及神经丝轻链蛋白（NfL）水平对aMCI患者向AD转化的风险预测价值，旨在为早发现，早诊断，早期系统、正规及全面干预提供依据，报道如下。1资料与方法1.1样本选取1.1.1样本量预估本研究中以认知损害不同阶段，即“aMCI或AD”作为因变量，以患者人口学特基金项目：绍兴市卫生健康科技计划项目(2 0 2 2 KY055)作者单位：312000浙江省绍兴，绍兴市第七人民医院通信作者：颜蓉，Email：51448 9 2 41 q q.c o m【文章编号】16 7 1-0 8 0 0(2 0 2 3)0 8-10 0 8-0 4征、疾病与健康因素、影像学改变、外周血分子生物学指标和神经心理评估共5个方面16 项指标作为自变量，根据二元Logistic回归样本量EPV法则的相关要求，再考虑5%的样本删失率，最终得到样本168例，可满足回归分析统计需求。1.1.2样本采集选取2 0 18 年6 月至2 0 2 2 年9 月绍兴市第七人民医院神经内科确诊的AD与aMCI患者共18 2 例，剔除依从性低及研究资料不全样本9例，最终得到样本17 3例。其中AD组患者9 0 例，包括男38 例，女52 例；年龄56 7 8 岁，中位年龄6 7.0 0(62.50,70.50)岁。aMCI患者8 3例，包括男42 例，女41例；年龄46 7 6 岁，平均6 4.0 0（58.0 0,6 8.0 0)岁。本研究经绍兴市第七人民医院伦理委员会审批通过。1.1.3纳入及排除标准纳入标准：（1)AD诊断，参考精神和行为障碍分类(ICD-10)中AD的诊断标准；（2)aMCI诊断，采取记忆域心理测评，分别包括听觉词语学习测验及延迟检测（AVLT与AVLT-R)、逻辑记忆检测及延迟检测(LMT和LMT-R)、St r o o p色词测验(SCWT)、符号数字模式测验、波士顿命名测验（BNT)等，如患者具备两项评分均低于年龄矫正均值的1个标准差(SD)，则判断为aMCI5，（3)患者知情同意，主动参与。排除标准：（1）患有其他类型的痴呆患者；（2)具备语言域和执行域认知功能减现代实用医学2 0 2 3年8 月第35卷第8 期低现象，但记忆域测试评分不符合aMCI评估标准的MCI患者；（3）合并颅内其他器质性病变或重要器官、系统病变患者；（4)存在其他神经精神障碍患者；（5)合并影响本研究外周血分子生物学指标水平的病变患者；（6)无法提供完整的研究相关数据或依从性欠佳者；（7)非知情同意者。1.2方法1.2.1外周血分子生物学指标检测院第2 天晨起空腹静脉血3ml2个抗凝管。1号管4恒温静置后上离心机（2 0 0 0 r/min）离心20min，取上清液分装，于一8 0 低温保存。2 号管低温冻存后，于RNA提取前行充分解冻，取0.2 5ml与Trizol液以1：3比例混合震荡，室温静置5min后，2 0 0 0 r/min，4恒温离心10 min，静置后取上清。加入氯仿0.2 ml后重复离心10 min，静置后取水相（约50 0 l)。加入异丙醇50 0 l后震荡，室温静置30min后重复离心10 min去上清保留RNA沉淀，加入7 5%乙醇重复离心3min，静置3min后，上超微量紫外分光光度计（赛默飞）测定总RNA纯度良好。以双抗体一步夹心法酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清BDNF、Nf L水平，采用实时荧光PCR法(RT-PCR)测定miR-132。1.2.2RMI脑部形态学检测采用1.5TMRI(明峰)，选择T,WI、T,W I、FLA I R、D W I 序列（常规扫描）以及TOF-3D-MRA扫描。视野(FOV)=240mm240mm;厚度6 mm，层距1mm，矩阵2 56 2 56。患侧时嘱患者取卧位，扫描范围从炉顶至颅底。横轴位、矢状位定位线与大脑下缘连线、大镰相平行；冠状位定位线与海马长轴相垂直。FLAIR序列垂直于海马长轴斜进行冠状位扫描（厚度0.5mm），获得斜冠状面海马图像后，经三维体积分析得到海马体积。1.2.3量表指标评估（1）认知障碍评估采用蒙特利尔认知评估量表（MoCA)，该量表针对记忆、语言、注意力集中、执行、抽象思维、视空间结构及计算/定向力7 个方面内容进行系统评估。（2）抑郁状态评估采用PHQ-9健康问卷7,该问卷涵盖心情、睡眠、疲乏感、饮食、负性注意与负性信念及行动等方面，共9 个条目。9 分提示无或轻度抑郁，10 14分提示中度抑郁，1519 提示中重度抑郁，2 0 分提示重度抑郁8。（3)焦虑状态评估采用广泛性焦虑障:1009:碍7 项(GAD-7),该量表同样基于DSM-IV相关标准，针对患者焦虑情绪、担忧、难以放松、坐立不安、烦躁等7 个方面进行评估，4分提示被试无焦虑，59 分提示轻微焦虑，10 13提示中度焦虑，1418 提示中重度焦虑，19 分则提示重度焦虑可能。（4）失能状态评定采用Barthel指数进行评估，该量表包含吃饭、穿越、洗澡、大小便、装饰、如厕、修采集患者入饰、床椅移位、平地行走（45m）、上下楼梯等共10 个项目。10 0 分提示被试独立性良好，7 59 5分提示轻度依赖，50 7 0 分提示中度依赖，2 545分提示重度依赖，0 2 0 分提示完全依赖。1.3统计方法采用SPSS23.0统计软件进行分析。正态计量资料以均数土标准差表示，两组比较采用t检验或t检验；非正态计量资料以M(P25,Prs)表示，采用Mann-WhitneyU检验；计数资料比较采用x?检验。预测价值评估采用ROC曲线分析，求曲线下面积(AUC)；多因素分析采用Logistic 回归分析。P0.05表示差异有统计学意义。2结果2.1两组评估指标比较两组年龄、受教育程度、高血压、糖尿病、海马体积缩小、MoCA评分、GAD-7评分、Barthel指数以及外周血BDNF、m iR-132 和NfL水平差异均有统计学意义（均P0.05)，见表1。2.2BDNF、m i R-132 和NfL对aMCI向AD转化的风险预测价值外周血BDNF、m iR-132 和NfL水平对aMCI向AD转化风险的ROC曲线下面积分别为0.7 2 9、0.6 52 和0.8 0 4，具体灵敏度、特异度、临界值等指标见表2。外周血NfL水平对aMCI患者向AD转化的风险预测价值高于miR-132(Z=2.917,P0.05)。2.3影响aMCI向AD转化的多因素分析将组间差异有统计学意义的指标作为自变量，认知减退程度（aMCI或AD）作为因变量带入Logistic回归方程。结果得到，Hosmer-Lemeshow拟合度（H）检验(x2=5.146，P=0.7 42)，拟合度良好。模型系数检验Omnibus检验，决定系数(R)=0.713,P0.05,回归模型效能良好。年龄、海马体缩小、MoCA评分、GAD-7评分及外周血BDNF、m iR-132 和NfL水平是:1010因素性别例(%)男女年龄(岁)受教育程度初中下例(%)高中/中专大专以上痴呆家族史例(%)BMI(kg/m)高血压例(%)糖尿病例(%)高血脂例(%)海马体积缩小例(%)BDNF(g/L)miR-132相对水平NfL(ng/L)MoCA(分)PHQ-9(分)GAD-7(分)Barthel指数(分)注：*为正态方差不齐计量资料，采用t检验评估指标BDNFmiR-132相对水平NfLaMCI向AD转化的影响因素(均P0.05),见表3。3讨论MCI是一种介于正常衰老与轻度痴呆的中间过度状态，由于MCI与AD患者脑灰质与皮质的进行性萎首先累及脑内测叶的海马区叫,这部分脑区与记忆功能相关；因此，以记忆功能损伤为主要表现的aMCI患者在MCI中占较大比重。本研究即针对aMCI向AD转化的风险评估因子进行分析。以往的检测手段如计算机断层扫描（PET)、脑脊液(CSF)检测等，因检测成本高且具有侵入性，阻碍了Modern Practical Medicine,August 2023,Vol.35,No.8表1两组评估指标比较AD组(n=90)aMCI 组(n=83)38(42.22)42(50.60)52(57.78)41(49.40)67.00(62.50,70.50)64.00(58.00,68.00)69(76.67)49(59.04)13(14.44)23(27.71)8(8.89)11(13.25)14(15.56)10(12.05)24.862.3624.482.0956(62.22)39(46.99)35(38.89)20(24.10)47(52.22)35(42.17)27(30.00)13(15.66)8.932.8111.893.902.490.142.560.1376.845.8869.915.4523.502.4726.132.039.50(5.00,16.00)8.00(5.00,13.00)6.00(4.00,7.00)4.00(3.00,6.00)63.6610.2967.2010.18表2 BDNF、m i R-132 和NfL对aMCI向AD转化的风险预测ROC曲线分析AUC标准误0.7290.0390.6520.0420.8040.033x（tU 值1.2205.5786.3680.445(1.115)4.0484.3571.7504.993(5.756)*(3.399)(8.023)(7.617)1.343 3.554(2.279)P值95%CI0.050.6510.8060.050.571 0.7340.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.05约登指数临界值灵敏度(%）特异度(%)0.38412ug/L0.2732.530.4647.5 ng/L87.7862.2250.0050.6065.0696.39表 3 aMCI 向 AD转化风险的多因素Logistic 回归分析变量年龄海马体积缩小BDNFmiR-132相对水平NLMoCA评分GAD-7评分标准误0.1080.0522.1520.885一0.32 20.097-4.5741.9830.1850.051-0.4960.1270.3490.138waldx值4.3865.91710.9445.32313.01915.3276.408P值0.050.050.050.050.050.050.05OR值1.1148.6010.7240.0101.2030.6091.41795%CI1.007 1,2331.519 48.7030.5990.8770.0000.5021.088 1.3310.475 0.7811.0821.857现代实用医学2 0 2 3年8 月第35卷第8 期界值具有较高的敏感度（8 7.7 8%），但特异度相对偏低（50.6 0%）。多因素分析显示，BDNF对aMCI向AD转化风险的影响为负性（=一0.32 2)，OR值为0.724。当aMCI患者血清BDNF水平低于诊断临界值时，应重点关注。miR-132作为微小RVA家族成员之一，与炎性反应，血管生长以及中枢神经系统突触生长、分化、形态维持及凋亡等均具有密切关系4。本研究ROC曲线分析结果显示，miR-132预评估诊断价值偏低(AUC=0.652)；多因素分析显示，miR-132对aMCI向AD转化风险的值达到一4.57 4，OR值达到了0.010。因此，其对转化风险的评估需同时考虑其他因素的影响，并在多因素条件下进行分析。神经轴索损伤和丧失是诸多慢性神经系统疾病的主要病理特征,NfL作为神经丝的一个亚单位,对神经元细胞损伤和死亡具高度特异性，与神经细胞塑形以及髓鞘轴突再生密切相关5，是神经细胞骨架的重要成分。本研究结果显示，血清NfL水平对aMCI向AD转化风险具有较好的预评估价值(AUC=0.804)，诊断临界值为7 7.5ng/L，但其灵敏度仅为50%，但特异度达到9 6.39%，可针对其较高的特异度对预评估样本中的假阳性样本进行鉴别。多因素分析结果显示，其对转化风险的值为0.18 5,OR值为1.2 0 3。总之，外周血BDNF、m i R-132 和NfL作为良好的生物学指标，对提示疾病进展，阻止或延缓aMCI患者潜在的病理进程，改善症状，保护残存的脑功能提供早期风险评估依据。利益冲突所有作者声明无利益冲突作者贡献声明张金娜：设计实验、实施研究、采集数据、分析/解释数据、文章撰写；颜蓉：获取研究经费、行政、技术或材料支持、指导、对文章的知识性内容作批评性审阅。:1011:参考文献1】胡浩,谭兰,郁金泰.ATN研究框架下认知正常人群中阿尔茨海默病疾病谱的分布及风险因素分析.中华神经科杂志,2 0 2 3,56(1):29.2王梦洁,许莎莎,姜东朗,等.上海社区临床前期阿尔茨海默病人群-淀粉样蛋白沉积的影像学研究J.中华核医学与分子影像杂志，2023,43(1):20-24.3 高永祥,张晋昕.Logistic回归分析的样本量确定.循证医学，2018,18(2):122-124.4 李经纬，李群杨硕，等.阿尔茨海默病患者的酰胺质子转移加权磁共振成像研究.中国全科医学,2 0 2 2,2 5(2 4):30 0 5-30 12.53王丽娟,冯淑君,聂坤.中国帕金森病轻度认知障碍的诊断和治疗指南(2 0 2 0 版)J.中国神经精神疾病杂志,2 0 2 1,47(1):1-12.6钱玥,王梦洁,李骏鹏,等.-淀粉样蛋白鉴别轻度认知障碍患者和正常人认知的改变.中华核医学与分子影像杂志,2 0 2 3,43(2)：65-69.7陈凌,申铁梅,赖敏华，等.住院冠心病患者心理护理专家共识.护理学报,2 0 2 1,2 8(2 2):45-51.8 TIIRIKAINEN K,HARAVUORI H,RANTA K,et al.Psychome-tric properties of the 7-item Generalized Anxiety Disorder Scale(GAD-7)in a large representative sample of Finnish adolescents.Psychiatry Res,2019,272:30-35.9冯钰,任慧莲,龚烨,等.GAD-7 和PHQ-9 量表在血液透析患者抑郁焦虑评估中的应用J.西南军医,2 0 2 1,2 3(Z1):343-346.10 刘晓峰,魏维,龙怀聪.2 49 例老年重症肺炎临床特征及Barthel指数对预后的价值分析.国际呼吸杂志,2 0 2 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