分子肿瘤概论(研究生课件).ppt

同学们好！同学们好！分子肿瘤概论分子肿瘤概论n n 重庆医科大学病理教研室重庆医科大学病理教研室重庆医科大学病理教研室重庆医科大学病理教研室 n n 王娅兰王娅兰王娅兰王娅兰 教授教授教授教授(博士生导师博士生导师博士生导师博士生导师)n n 分子肿瘤概论分子肿瘤概论分子肿瘤概论分子肿瘤概论n n一、有关肿瘤的基本概念（复习）一、有关肿瘤的基本概念（复习）一、有关肿瘤的基本概念（复习）一、有关肿瘤的基本概念（复习）n n肿瘤（肿瘤（肿瘤（肿瘤（tumor,neoplasm)tumor,neoplasm)n n 基因水平基因水平基因水平基因水平 n n 调控失常调控失常调控失常调控失常 n n 异常增生异常增生异常增生异常增生 n n 新生物新生物新生物新生物n n肿瘤生物学行为肿瘤生物学行为肿瘤生物学行为肿瘤生物学行为-浸润、转移能力浸润、转移能力浸润、转移能力浸润、转移能力n n 浸润浸润浸润浸润 (invasion)(invasion)：起源处迁移起源处迁移起源处迁移起源处迁移n n 侵入周围邻近组织侵入周围邻近组织侵入周围邻近组织侵入周围邻近组织n n转移转移转移转移(metastasis)(metastasis)：n n从原发部位从原发部位从原发部位从原发部位n n血管、淋巴管、体腔血管、淋巴管、体腔血管、淋巴管、体腔血管、淋巴管、体腔n n它处继续生长它处继续生长它处继续生长它处继续生长n n与原发瘤同样类型肿瘤与原发瘤同样类型肿瘤与原发瘤同样类型肿瘤与原发瘤同样类型肿瘤 （转移瘤或继发瘤）（转移瘤或继发瘤）（转移瘤或继发瘤）（转移瘤或继发瘤）转移的途径转移的途径（2 2）Hematogenenous metastasisHematogenenous metastasis 全身脏器全身脏器全身脏器全身脏器（3 3）Transcoelomic metastasisTranscoelomic metastasis 体腔内脏器体腔内脏器体腔内脏器体腔内脏器-脱落种植脱落种植脱落种植脱落种植 （医源性种植）（医源性种植）（医源性种植）（医源性种植）n n浸润生长浸润生长-恶性肿瘤生长的特点恶性肿瘤生长的特点 n n 肿瘤转移过程必经的第一步肿瘤转移过程必经的第一步n n肿瘤的组织结构肿瘤的组织结构肿瘤的组织结构肿瘤的组织结构 n n实质实质实质实质 （parenchyma)parenchyma)n n间质间质间质间质 （mesenchyma,stroma)mesenchyma,stroma)n n肿瘤间质的主要成分肿瘤间质的主要成分肿瘤间质的主要成分肿瘤间质的主要成分n n1.1.血管血管血管血管n n 小血管小血管小血管小血管 毛细血管毛细血管毛细血管毛细血管 血窦样血窦样血窦样血窦样 血管球样血管球样血管球样血管球样 n n n n新的肿瘤血供模式新的肿瘤血供模式新的肿瘤血供模式新的肿瘤血供模式n n-血管生成拟态血管生成拟态血管生成拟态血管生成拟态(vasculogenic mimicry(vasculogenic mimicry，VM)VM)n n19991999年，美国学者年，美国学者年，美国学者年，美国学者ManiotisManiotis等等等等n n一种完全不同于经典血管生成的微循环模式一种完全不同于经典血管生成的微循环模式一种完全不同于经典血管生成的微循环模式一种完全不同于经典血管生成的微循环模式n n-小管状（似血管）小管状（似血管）小管状（似血管）小管状（似血管）n n-管壁主要由基底膜管壁主要由基底膜管壁主要由基底膜管壁主要由基底膜(PAS(PAS阳性阳性阳性阳性)围成，外衬以肿瘤细围成，外衬以肿瘤细围成，外衬以肿瘤细围成，外衬以肿瘤细胞胞胞胞n n-腔内有血浆和红细胞流动腔内有血浆和红细胞流动腔内有血浆和红细胞流动腔内有血浆和红细胞流动n n-管道与内皮性血管相通管道与内皮性血管相通管道与内皮性血管相通管道与内皮性血管相通n n多存在于高度恶性肿瘤多存在于高度恶性肿瘤多存在于高度恶性肿瘤多存在于高度恶性肿瘤n n血管生成拟态（血管生成拟态（血管生成拟态（血管生成拟态（vasculogenic mimicryvasculogenic mimicry）n n 肿瘤细胞构成肿瘤细胞构成肿瘤细胞构成肿瘤细胞构成n n 有基底膜有基底膜有基底膜有基底膜n n 小管状（似血管）小管状（似血管）小管状（似血管）小管状（似血管）n n 与血管交通与血管交通与血管交通与血管交通n n2.2.结缔组织间质结缔组织间质结缔组织间质结缔组织间质n n （1 1）纤维和基质）纤维和基质）纤维和基质）纤维和基质n n 胶原纤维胶原纤维胶原纤维胶原纤维 n n 常规常规常规常规 HE HE-红红红红n n 特殊化学染色特殊化学染色特殊化学染色特殊化学染色n n VGVG 改良法改良法改良法改良法-红红红红 n n Masson Masson-兰色兰色兰色兰色n n 构成成分构成成分构成成分构成成分 I II IIII II III型胶原原纤维型胶原原纤维型胶原原纤维型胶原原纤维n n 又由相应原纤维分子构成又由相应原纤维分子构成又由相应原纤维分子构成又由相应原纤维分子构成n n 免疫组化或分子生物学方法可区别免疫组化或分子生物学方法可区别免疫组化或分子生物学方法可区别免疫组化或分子生物学方法可区别n n弹力纤维弹力纤维弹力纤维弹力纤维n n 常规常规常规常规 HEHEHEHE-淡红色淡红色淡红色淡红色n n 特殊化学染色特殊化学染色特殊化学染色特殊化学染色n n WeigertWeigertWeigertWeigert或或或或Verhceff-Verhceff-Verhceff-Verhceff-暗兰或黑色，弹力暗兰或黑色，弹力暗兰或黑色，弹力暗兰或黑色，弹力n n 酶消化后阴性酶消化后阴性酶消化后阴性酶消化后阴性n n n n n n网状纤维网状纤维n n 银染银染-黑色，故也称嗜银纤维。黑色，故也称嗜银纤维。n n PAS-强阳性强阳性n n n n成分成分 胶原蛋白为主要成分胶原蛋白为主要成分 n n 细胞间质网状纤维细胞间质网状纤维-型胶原蛋白型胶原蛋白 n n 基底膜网状纤维基底膜网状纤维-型胶原蛋白和型胶原蛋白和n n 层黏连蛋白（层黏连蛋白（lamininlaminin）n n纤维黏连蛋白纤维黏连蛋白纤维黏连蛋白纤维黏连蛋白 FibronectinFibronectin（FNFN）n n 作用作用作用作用n n A.A.连接基质中各种成分连接基质中各种成分连接基质中各种成分连接基质中各种成分n n B.B.介导细胞外基质成分与细胞表面连接介导细胞外基质成分与细胞表面连接介导细胞外基质成分与细胞表面连接介导细胞外基质成分与细胞表面连接n n黏蛋白黏蛋白黏蛋白黏蛋白n n 又称蛋白多糖又称蛋白多糖又称蛋白多糖又称蛋白多糖（proteoglycanproteoglycan）n n 如透明质酸，硫酸肝素等如透明质酸，硫酸肝素等如透明质酸，硫酸肝素等如透明质酸，硫酸肝素等 n n骨黏素骨黏素骨黏素骨黏素（osteonectinosteonectin）n n（2 2）基底膜）基底膜）基底膜）基底膜(basement membrane,BM)(basement membrane,BM)n n 多种成分多种成分多种成分多种成分 n n 与疾病（肿瘤浸润）关系密切与疾病（肿瘤浸润）关系密切与疾病（肿瘤浸润）关系密切与疾病（肿瘤浸润）关系密切 n n 型胶原型胶原型胶原型胶原 n n -不形成纤维，与不形成纤维，与不形成纤维，与不形成纤维，与、型胶原不同型胶原不同型胶原不同型胶原不同n n 层黏连蛋白层黏连蛋白层黏连蛋白层黏连蛋白 （laminin,LMlaminin,LM）n n -有与细胞膜有与细胞膜有与细胞膜有与细胞膜LM LM LM LM 受体相结合的位点受体相结合的位点受体相结合的位点受体相结合的位点n n （3 3 3 3）细胞成分）细胞成分）细胞成分）细胞成分 固有的细胞成分固有的细胞成分固有的细胞成分固有的细胞成分 -纤维母细胞和纤维细胞纤维母细胞和纤维细胞纤维母细胞和纤维细胞纤维母细胞和纤维细胞n n-肌纤维母细胞肌纤维母细胞肌纤维母细胞肌纤维母细胞 n n-间充质细胞间充质细胞间充质细胞间充质细胞 n n-巨噬细胞巨噬细胞巨噬细胞巨噬细胞n n-树突状细胞树突状细胞树突状细胞树突状细胞 n n反应性细胞成分反应性细胞成分反应性细胞成分反应性细胞成分n n 各种细胞浸润各种细胞浸润各种细胞浸润各种细胞浸润 n n -淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞 最常见最常见最常见最常见 n n -浆细胞浆细胞浆细胞浆细胞n n -巨噬细胞巨噬细胞巨噬细胞巨噬细胞 n n 都属免疫活性细胞都属免疫活性细胞都属免疫活性细胞都属免疫活性细胞 n n二、肿瘤浸润、转移的分子机制二、肿瘤浸润、转移的分子机制二、肿瘤浸润、转移的分子机制二、肿瘤浸润、转移的分子机制n n（一）肿瘤细胞的浸润转移（一）肿瘤细胞的浸润转移（一）肿瘤细胞的浸润转移（一）肿瘤细胞的浸润转移 n n 1.1.肿瘤细胞增殖和扩展肿瘤细胞增殖和扩展肿瘤细胞增殖和扩展肿瘤细胞增殖和扩展n n 浸润转移的前提和基础浸润转移的前提和基础浸润转移的前提和基础浸润转移的前提和基础 n n2.2.肿瘤血管生成肿瘤血管生成肿瘤血管生成肿瘤血管生成(tumor angiogenesis)(tumor angiogenesis)n n 肿瘤浸润转移的必要条件肿瘤浸润转移的必要条件肿瘤浸润转移的必要条件肿瘤浸润转移的必要条件n n3.3.3.3.肿瘤细胞分离脱落，与细胞外基质黏附肿瘤细胞分离脱落，与细胞外基质黏附肿瘤细胞分离脱落，与细胞外基质黏附肿瘤细胞分离脱落，与细胞外基质黏附n n （1 1 1 1）瘤细胞表面负电荷增加）瘤细胞表面负电荷增加）瘤细胞表面负电荷增加）瘤细胞表面负电荷增加 n n （2 2 2 2）瘤细胞黏附力的改变）瘤细胞黏附力的改变）瘤细胞黏附力的改变）瘤细胞黏附力的改变n n 瘤细胞自身结构异常瘤细胞自身结构异常瘤细胞自身结构异常瘤细胞自身结构异常 n n 瘤细胞同质黏附力下降瘤细胞同质黏附力下降瘤细胞同质黏附力下降瘤细胞同质黏附力下降 n n 指同种瘤细胞之间的黏附力指同种瘤细胞之间的黏附力指同种瘤细胞之间的黏附力指同种瘤细胞之间的黏附力n n瘤细胞异质黏附力增加瘤细胞异质黏附力增加瘤细胞异质黏附力增加瘤细胞异质黏附力增加 n n指肿瘤细胞与其它不同细胞及间质的黏附力指肿瘤细胞与其它不同细胞及间质的黏附力指肿瘤细胞与其它不同细胞及间质的黏附力指肿瘤细胞与其它不同细胞及间质的黏附力n n同质黏附力降低，有利于肿瘤细胞分离；同质黏附力降低，有利于肿瘤细胞分离；同质黏附力降低，有利于肿瘤细胞分离；同质黏附力降低，有利于肿瘤细胞分离；n n异质黏附力的增加，有利于瘤细胞与基底膜、间质异质黏附力的增加，有利于瘤细胞与基底膜、间质异质黏附力的增加，有利于瘤细胞与基底膜、间质异质黏附力的增加，有利于瘤细胞与基底膜、间质成分粘附并穿过这些组织成分粘附并穿过这些组织成分粘附并穿过这些组织成分粘附并穿过这些组织n n均由黏附分子介导均由黏附分子介导均由黏附分子介导均由黏附分子介导n n通过配通过配通过配通过配-受体之间的识别和结合实现受体之间的识别和结合实现受体之间的识别和结合实现受体之间的识别和结合实现 n n（3 3 3 3）肿瘤黏附分子）肿瘤黏附分子）肿瘤黏附分子）肿瘤黏附分子(adhesion molecules)(adhesion molecules)细胞表面结构细胞表面结构细胞表面结构细胞表面结构n n 钙黏蛋白钙黏蛋白钙黏蛋白钙黏蛋白(cadherin)(cadherin)n n 又称为钙连接素，又称为钙连接素，又称为钙连接素，又称为钙连接素，钙黏素。钙黏素。钙黏素。钙黏素。n n 依赖细胞外钙依赖细胞外钙依赖细胞外钙依赖细胞外钙 n n 介介介介导导导导钙钙钙钙离离离离子子子子依依依依赖赖赖赖性性性性细细细细胞胞胞胞与与与与细细细细胞胞胞胞（同同同同源源源源细细细细胞胞胞胞）的黏附的黏附的黏附的黏附 n n据分布不同据分布不同据分布不同据分布不同 E-E-E-E-钙黏蛋白钙黏蛋白钙黏蛋白钙黏蛋白n n P-P-钙黏蛋白钙黏蛋白钙黏蛋白钙黏蛋白n n N-N-钙黏蛋白钙黏蛋白钙黏蛋白钙黏蛋白 H-cad H-cad n n 整合素整合素整合素整合素(integrin)(integrin)n n-细胞表面糖蛋白细胞表面糖蛋白细胞表面糖蛋白细胞表面糖蛋白 ，约有，约有，约有，约有20 20 20 20 多个亚型多个亚型多个亚型多个亚型 n n-各种肿瘤细胞表面整合素种类不同各种肿瘤细胞表面整合素种类不同各种肿瘤细胞表面整合素种类不同各种肿瘤细胞表面整合素种类不同n n-肿瘤生长各个阶段表达水平也不同肿瘤生长各个阶段表达水平也不同肿瘤生长各个阶段表达水平也不同肿瘤生长各个阶段表达水平也不同 n n作用作用作用作用 n n a.a.a.a.介导细胞与细胞外基质的黏附介导细胞与细胞外基质的黏附介导细胞与细胞外基质的黏附介导细胞与细胞外基质的黏附 n n b.b.b.b.参与不同细胞之间的黏附连接参与不同细胞之间的黏附连接参与不同细胞之间的黏附连接参与不同细胞之间的黏附连接 n n C.C.C.C.扮演细胞信号传递的角色扮演细胞信号传递的角色扮演细胞信号传递的角色扮演细胞信号传递的角色n n配体配体配体配体-整合素整合素整合素整合素-细胞骨架蛋白跨膜信息传导系统细胞骨架蛋白跨膜信息传导系统细胞骨架蛋白跨膜信息传导系统细胞骨架蛋白跨膜信息传导系统n n 免免免免 疫疫疫疫 球球球球 蛋蛋蛋蛋 白白白白 超超超超 基基基基 因因因因 家家家家 族族族族(immunoglobulin(immunoglobulin superfamily)superfamily)n n 主要参与细胞与细胞间的连接主要参与细胞与细胞间的连接主要参与细胞与细胞间的连接主要参与细胞与细胞间的连接n n ICAM-1 ICAM-1 ICAM-1 ICAM-1（细胞间黏附分子（细胞间黏附分子（细胞间黏附分子（细胞间黏附分子-1-1-1-1）n n VCAM-1 VCAM-1 VCAM-1 VCAM-1（血管黏附因子）（血管黏附因子）（血管黏附因子）（血管黏附因子）n n NCAM NCAM NCAM NCAM（神经细胞黏附因子）（神经细胞黏附因子）（神经细胞黏附因子）（神经细胞黏附因子）n n 其它其它其它其它 包括包括包括包括CEA CEA CEA CEA、DCCDCCDCCDCCn n选择素选择素选择素选择素(selectin)(selectin)n n内源性植物凝血素（凝集素）内源性植物凝血素（凝集素）内源性植物凝血素（凝集素）内源性植物凝血素（凝集素）n n 作用作用作用作用 介导内皮细胞、血小板与瘤细胞黏附介导内皮细胞、血小板与瘤细胞黏附介导内皮细胞、血小板与瘤细胞黏附介导内皮细胞、血小板与瘤细胞黏附n n 选择素家族包括：选择素家族包括：选择素家族包括：选择素家族包括：n n P-selectin P-selectin P-selectin P-selectin n n E-selectin E-selectin E-selectin E-selectin n n L-selectin L-selectin L-selectin L-selectinn n CD44 CD44 CD44 CD44 及其它及其它及其它及其它 n n CD 44(CD 44(CD 44(CD 44(透明质酸受体透明质酸受体透明质酸受体透明质酸受体)n n -介导细胞与细胞外基质粘附介导细胞与细胞外基质粘附介导细胞与细胞外基质粘附介导细胞与细胞外基质粘附 n n 路易斯寡糖（路易斯寡糖（路易斯寡糖（路易斯寡糖（SLESLESLESLEX X X X，,s-Lewis,s-Lewis,s-Lewis,s-LewisX X X X ）n n -血管内皮细胞血管内皮细胞血管内皮细胞血管内皮细胞E-E-E-E-选择素的配体选择素的配体选择素的配体选择素的配体n n n n 4.4.4.4.瘤细胞的迁移瘤细胞的迁移瘤细胞的迁移瘤细胞的迁移(migration)(migration)及化学趋向性及化学趋向性及化学趋向性及化学趋向性n n (1)(1)(1)(1)瘤细胞的运动瘤细胞的运动瘤细胞的运动瘤细胞的运动n n 黏附；肌动蛋白、微管、中间丝黏附；肌动蛋白、微管、中间丝黏附；肌动蛋白、微管、中间丝黏附；肌动蛋白、微管、中间丝n n (2)(2)(2)(2)瘤细胞运动的调节瘤细胞运动的调节瘤细胞运动的调节瘤细胞运动的调节据其作用，大致可分为两大类：据其作用，大致可分为两大类：据其作用，大致可分为两大类：据其作用，大致可分为两大类：n n仅影响运动的因子仅影响运动的因子仅影响运动的因子仅影响运动的因子 迁移刺激因子（迁移刺激因子（迁移刺激因子（迁移刺激因子（MSFMSFMSFMSF）n n既影响运动又影响生长的因子既影响运动又影响生长的因子既影响运动又影响生长的因子既影响运动又影响生长的因子n n AMFAMFAMFAMF(自分泌运动因子自分泌运动因子自分泌运动因子自分泌运动因子)n n HGF/SF HGF/SF HGF/SF HGF/SF（肝细胞生长因子肝细胞生长因子肝细胞生长因子肝细胞生长因子/分散因子分散因子分散因子分散因子)n n(3)(3)(3)(3)瘤细胞的化学趋向性瘤细胞的化学趋向性瘤细胞的化学趋向性瘤细胞的化学趋向性n n 21KD 21KD 21KD 21KD 的蛋白质的蛋白质的蛋白质的蛋白质 n n 骨吸收因子骨吸收因子骨吸收因子骨吸收因子 n n5.5.细胞外基质的降解细胞外基质的降解细胞外基质的降解细胞外基质的降解n n(1)(1)肿瘤浸润细胞外基质的步骤肿瘤浸润细胞外基质的步骤肿瘤浸润细胞外基质的步骤肿瘤浸润细胞外基质的步骤n n Liotta 1986Liotta 1986年提出年提出年提出年提出 n n 第一步第一步第一步第一步 黏附于基底膜或其他间质成分黏附于基底膜或其他间质成分黏附于基底膜或其他间质成分黏附于基底膜或其他间质成分 n n 第二步第二步第二步第二步 分泌蛋白酶并激活分泌蛋白酶并激活分泌蛋白酶并激活分泌蛋白酶并激活,降解瘤细胞降解瘤细胞降解瘤细胞降解瘤细胞n n 邻近的细胞外基质邻近的细胞外基质邻近的细胞外基质邻近的细胞外基质n n 第三步第三步第三步第三步 进入受蛋白酶降解的基质区域内进入受蛋白酶降解的基质区域内进入受蛋白酶降解的基质区域内进入受蛋白酶降解的基质区域内 n n(2)(2)肿瘤细胞产生的蛋白水解酶肿瘤细胞产生的蛋白水解酶肿瘤细胞产生的蛋白水解酶肿瘤细胞产生的蛋白水解酶n n丝氨酸蛋白酶类及其抑制因子丝氨酸蛋白酶类及其抑制因子丝氨酸蛋白酶类及其抑制因子丝氨酸蛋白酶类及其抑制因子n n纤维蛋白溶解酶纤维蛋白溶解酶纤维蛋白溶解酶纤维蛋白溶解酶(纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶)n n 纤溶酶原纤溶酶原纤溶酶原纤溶酶原 n n a.a.降解基质降解基质降解基质降解基质 如纤维蛋白，如纤维蛋白，如纤维蛋白，如纤维蛋白，FN,LM,FN,LM,蛋白多糖蛋白多糖蛋白多糖蛋白多糖n n b.b.激活胶原酶激活胶原酶激活胶原酶激活胶原酶 胶原降解胶原降解胶原降解胶原降解n n尿激酶型纤溶酶原激活剂尿激酶型纤溶酶原激活剂尿激酶型纤溶酶原激活剂尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen(urokinase-type plasminogen activator,u-PAactivator,u-PA）系统系统系统系统 n nA Au-PAu-PA：n n 介导细胞周围基质蛋白的降解介导细胞周围基质蛋白的降解介导细胞周围基质蛋白的降解介导细胞周围基质蛋白的降解n nB Bu-PA u-PA 受体（受体（受体（受体（u-PARu-PAR）及纤溶酶原受体）及纤溶酶原受体）及纤溶酶原受体）及纤溶酶原受体n n n n 活化活化活化活化u-PA u-PA 原酶形式的原酶形式的原酶形式的原酶形式的u-PAu-PAn n纤溶酶原纤溶酶原纤溶酶原纤溶酶原+纤溶酶原受体纤溶酶原受体纤溶酶原受体纤溶酶原受体 纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶n nC CPAI PAI（PA PA 抑制剂）抑制剂）抑制剂）抑制剂）n n PAI1PAI1 是是是是u-PA u-PA 的主要抑制剂的主要抑制剂的主要抑制剂的主要抑制剂 n n PAI2PAI2 不同肿瘤表达意义不一不同肿瘤表达意义不一不同肿瘤表达意义不一不同肿瘤表达意义不一n n PAI3 PAI3 功能不清功能不清功能不清功能不清n n基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPmatrix metalloproteinases,MMP）及其抑制因子及其抑制因子及其抑制因子及其抑制因子n n 需钙、锌离子作辅助因子需钙、锌离子作辅助因子需钙、锌离子作辅助因子需钙、锌离子作辅助因子 n n MMP MMP 分类分类分类分类n n 胶原酶：如间质胶原酶胶原酶：如间质胶原酶胶原酶：如间质胶原酶胶原酶：如间质胶原酶 （CollagenaseCollagenase）n n 明胶酶：如明胶酶明胶酶：如明胶酶明胶酶：如明胶酶明胶酶：如明胶酶A A(gelatinase A)(gelatinase A)n n 间质溶素：如间质溶素间质溶素：如间质溶素间质溶素：如间质溶素间质溶素：如间质溶素1 1、2 2n n 膜型基质金属蛋白酶：膜型基质金属蛋白酶：膜型基质金属蛋白酶：膜型基质金属蛋白酶：、型型型型 n n可分别降解可分别降解可分别降解可分别降解ECMECM中各种不同成分中各种不同成分中各种不同成分中各种不同成分n n ECMECM降解的主要蛋白水解酶类降解的主要蛋白水解酶类降解的主要蛋白水解酶类降解的主要蛋白水解酶类n n金属蛋白酶抑制物金属蛋白酶抑制物金属蛋白酶抑制物金属蛋白酶抑制物 n n TIMP-1 TIMP-1，TIMP-2 TIMP-2 浸润与否取决于浸润与否取决于浸润与否取决于浸润与否取决于MMPMMP与与与与TIMPTIMP的对比的对比的对比的对比n n MMPTIMP ECMMMPTIMP ECM降解才能成为可能降解才能成为可能降解才能成为可能降解才能成为可能n n胱氨酸蛋白酶类胱氨酸蛋白酶类胱氨酸蛋白酶类胱氨酸蛋白酶类 n n Cathepsin B Cathepsin B n n作用作用作用作用n n 降解降解降解降解ECMECM中各种胶原、中各种胶原、中各种胶原、中各种胶原、LMLM、FNFN、黏蛋白、黏蛋白、黏蛋白、黏蛋白n n 激活间质胶原酶和激活间质胶原酶和激活间质胶原酶和激活间质胶原酶和IVIV型胶原酶型胶原酶型胶原酶型胶原酶n n天（门）冬氨酸蛋白酶天（门）冬氨酸蛋白酶天（门）冬氨酸蛋白酶天（门）冬氨酸蛋白酶 n ncathepsin D,Ecathepsin D,En n 在肿瘤浸润转移中的作用在肿瘤浸润转移中的作用在肿瘤浸润转移中的作用在肿瘤浸润转移中的作用 n n CD CD 表达的调节表达的调节表达的调节表达的调节n n6.6.瘤细胞以主动方式入循环管道并形成栓子瘤细胞以主动方式入循环管道并形成栓子瘤细胞以主动方式入循环管道并形成栓子瘤细胞以主动方式入循环管道并形成栓子n n 微小淋巴管、微小静脉壁微小淋巴管、微小静脉壁微小淋巴管、微小静脉壁微小淋巴管、微小静脉壁 缝隙缝隙缝隙缝隙n n 血管血管血管血管 基底膜缺损基底膜缺损基底膜缺损基底膜缺损 n n瘤细胞存在形式瘤细胞存在形式瘤细胞存在形式瘤细胞存在形式 n n 单个单个单个单个n n 成团成团成团成团 同类癌栓同类癌栓同类癌栓同类癌栓 n n 异类癌栓异类癌栓异类癌栓异类癌栓n n 黏附分子对其发挥调节作用黏附分子对其发挥调节作用黏附分子对其发挥调节作用黏附分子对其发挥调节作用n n n n7.7.在在在在特特特特定定定定器器器器官官官官的的的的毛毛毛毛细细细细血血血血管管管管滞滞滞滞留留留留并并并并黏黏黏黏着着着着，再再再再次次次次穿穿穿穿过过过过血血血血管壁并定居、增殖管壁并定居、增殖管壁并定居、增殖管壁并定居、增殖n n 器官特异性（选择性）机制器官特异性（选择性）机制器官特异性（选择性）机制器官特异性（选择性）机制n n (1)(1)黏附分子的作用黏附分子的作用黏附分子的作用黏附分子的作用n n (2)(2)化学趋化因子（归巢现象化学趋化因子（归巢现象化学趋化因子（归巢现象化学趋化因子（归巢现象)n n (3)(3)微环境不适合微环境不适合微环境不适合微环境不适合n n (4)(4)与免疫状态有关与免疫状态有关与免疫状态有关与免疫状态有关n n（二）（二）（二）（二）机体免疫状态与肿瘤浸润转移机体免疫状态与肿瘤浸润转移机体免疫状态与肿瘤浸润转移机体免疫状态与肿瘤浸润转移n n 参与控制转移的免疫细胞主要有参与控制转移的免疫细胞主要有参与控制转移的免疫细胞主要有参与控制转移的免疫细胞主要有 n n NK NK NK NK 细胞细胞细胞细胞n n 巨噬细胞巨噬细胞巨噬细胞巨噬细胞n n T T T T 淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞n n （三）肿瘤浸润转移相关基因（三）肿瘤浸润转移相关基因（三）肿瘤浸润转移相关基因（三）肿瘤浸润转移相关基因n n 转移相关基因转移相关基因转移相关基因转移相关基因n n指指指指基基基基因因因因的的的的表表表表达达达达和和和和改改改改变变变变能能能能够够够够促促促促进进进进或或或或导导导导致致致致肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤发发发发生生生生转移的基因转移的基因转移的基因转移的基因 n n n n（四）肿瘤表观遗传改变与肿瘤浸润转移（四）肿瘤表观遗传改变与肿瘤浸润转移（四）肿瘤表观遗传改变与肿瘤浸润转移（四）肿瘤表观遗传改变与肿瘤浸润转移n n表观遗传学表观遗传学表观遗传学表观遗传学(Epigenetics)(Epigenetics)n n-与遗传学与遗传学与遗传学与遗传学(genetic)(genetic)(genetic)(genetic)相对应的概念相对应的概念相对应的概念相对应的概念n n-表型状态改变，基因型不改变表型状态改变，基因型不改变表型状态改变，基因型不改变表型状态改变，基因型不改变 n n-没有没有没有没有DNADNADNADNA序列变化的情况下，序列变化的情况下，序列变化的情况下，序列变化的情况下，可遗传的基因可遗传的基因可遗传的基因可遗传的基因n n表达改变，导致的基因产物的变化。表达改变，导致的基因产物的变化。表达改变，导致的基因产物的变化。表达改变，导致的基因产物的变化。n n -1942-1942-1942-1942年提出，上世纪年提出，上世纪年提出，上世纪年提出，上世纪80808080年代后期逐渐兴起的一年代后期逐渐兴起的一年代后期逐渐兴起的一年代后期逐渐兴起的一门新学科门新学科门新学科门新学科 DNADNADNADNA的的的的“后天性后天性后天性后天性”修饰修饰修饰修饰 n n CpGCpGCpGCpG岛高甲基化岛高甲基化岛高甲基化岛高甲基化n n 癌细胞基因组低甲基化癌细胞基因组低甲基化癌细胞基因组低甲基化癌细胞基因组低甲基化组蛋白残基的各种修饰组蛋白残基的各种修饰组蛋白残基的各种修饰组蛋白残基的各种修饰n n 磷酸化磷酸化磷酸化磷酸化n n 乙酰化乙酰化乙酰化乙酰化n n 甲基化甲基化甲基化甲基化n n 泛素化等等泛素化等等泛素化等等泛素化等等 n n（五）肿瘤干细胞（五）肿瘤干细胞（五）肿瘤干细胞（五）肿瘤干细胞(tumor stem cell,TSC)(tumor stem cell,TSC)n n 20012001年由年由年由年由ReyaReya等提出等提出等提出等提出n n 20062006年美国癌症研究协会（年美国癌症研究协会（年美国癌症研究协会（年美国癌症研究协会（AACRAACR）定义）定义）定义）定义n n 存在于肿瘤组织中具有无限自我更新能力并能产存在于肿瘤组织中具有无限自我更新能力并能产存在于肿瘤组织中具有无限自我更新能力并能产存在于肿瘤组织中具有无限自我更新能力并能产生不同分化程度的肿瘤细胞的细胞生不同分化程度的肿瘤细胞的细胞生不同分化程度的肿瘤细胞的细胞生不同分化程度的肿瘤细胞的细胞 n n 特征特征特征特征 n n (1)(1)无限增殖和多向分化无限增殖和多向分化无限增殖和多向分化无限增殖和多向分化 n n (2)(2)存在自我更新的信号传导途径存在自我更新的信号传导途径存在自我更新的信号传导途径存在自我更新的信号传导途径n n (3)(3)具不同表型，异质性，对放化疗不敏感具不同表型，异质性，对放化疗不敏感具不同表型，异质性，对放化疗不敏感具不同表型，异质性，对放化疗不敏感n n (4)(4)具有端粒酶活性具有端粒酶活性具有端粒酶活性具有端粒酶活性 n n (5)(5)能转移到各种不同的组织能转移到各种不同的组织能转移到各种不同的组织能转移到各种不同的组织 n n（六）肿瘤微环境与肿瘤浸润转移（六）肿瘤微环境与肿瘤浸润转移（六）肿瘤微环境与肿瘤浸润转移（六）肿瘤微环境与肿瘤浸润转移 n n肿瘤细胞肿瘤细胞肿瘤细胞肿瘤细胞n n间质细胞间质细胞间质细胞间质细胞 n n细胞外基质细胞外基质细胞外基质细胞外基质n n间质细胞所分泌的活性介质（细胞因子）间质细胞所分泌的活性介质（细胞因子）间质细胞所分泌的活性介质（细胞因子）间质细胞所分泌的活性介质（细胞因子）n n 共同构成的局部内环境共同构成的局部内环境共同构成的局部内环境共同构成的局部内环境 n n微环境改变微环境改变微环境改变微环境改变n n肿瘤细胞肿瘤细胞肿瘤细胞肿瘤细胞n n-自分泌和旁分泌自分泌和旁分泌自分泌和旁分泌自分泌和旁分泌 n n全身和局部组织全身和局部组织全身和局部组织全身和局部组织n n-代谢、分泌、免疫代谢、分泌、免疫代谢、分泌、免疫代谢、分泌、免疫n n 结果：结果：结果：结果：限制或促进肿瘤的发生和发展限制或促进肿瘤的发生和发展限制或促进肿瘤的发生和发展限制或促进肿瘤的发生和发展 n n三三三三.肿瘤学研究中常用的分子生物学基本技术及其应肿瘤学研究中常用的分子生物学基本技术及其应肿瘤学研究中常用的分子生物学基本技术及其应肿瘤学研究中常用的分子生物学基本技术及其应用用用用n n(一一一一)蛋白表达异常的检测蛋白表达异常的检测蛋白表达异常的检测蛋白表达异常的检测-免疫组化（荧光）定位免疫组化（荧光）定位免疫组化（荧光）定位免疫组化（荧光）定位 -ELISA-ELISA和和和和Western blot Western blot、流式细胞术定量、流式细胞术定量、流式细胞术定量、流式细胞术定量 抗体抗体标标记记抗原抗原标标记记抗体抗体细细胞胞细细胞胞抗体抗体标标记记抗原抗原标标记记细细胞胞n n（二）蛋白质相互作用的检测方法（二）蛋白质相互作用的检测方法（二）蛋白质相互作用的检测方法（二）蛋白质相互作用的检测方法n n1.1.1.1.酵母双杂交法酵母双杂交法酵母双杂交法酵母双杂交法n n 验证两个已知蛋白的相互作用验证两个已知蛋白的相互作用验证两个已知蛋白的相互作用验证两个已知蛋白的相互作用n n 筛选与已知蛋白作用的未知蛋白筛选与已知蛋白作用的未知蛋白筛选与已知蛋白作用的未知蛋白筛选与已知蛋白作用的未知蛋白n n酵母双杂交系统是分析蛋白酵母双杂交系统是分析蛋白酵母双杂交系统是分析蛋白酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有蛋白间相互作用的有蛋白间相互作用的有蛋白间相互作用的有效和快速的方法，效和快速的方法，效和快速的方法，效和快速的方法，n n酵母双杂交的原理是将酵母双杂交的原理是将酵母双杂交的原理是将酵母双杂交的原理是将2 2个目的蛋白分别与转录激活区（个目的蛋白分别与转录激活区（个目的蛋白分别与转录激活区（个目的蛋白分别与转录激活区（transcription transcription activation domainactivation domain，ADAD）和）和）和）和DNA DNA 结合区（结合区（结合区（结合区（DNA-binding domainDNA-binding domain，DBDDBD）融合产生新的融合蛋白，如果这）融合产生新的融合蛋白，如果这）融合产生新的融合蛋白，如果这）融合产生新的融合蛋白，如果这2 2个目的蛋白能够互相作用，则个目的蛋白能够互相作用，则个目的蛋白能够互相作用，则个目的蛋白能够互相作用，则该相互作用会促使该相互作用会促使该相互作用会促使该相互作用会促使ADAD和和和和DBD DBD 互相靠近而产生有活性的转录因子，进而互相靠近而产生有活性的转录因子，进而互相靠近而产生有活性的转录因子，进而互相靠近而产生有活性的转录因子，进而激活事先构建到酵母基因组中的报告基因的转录。激活事先构建到酵母基因组中的报告基因的转录。激活事先构建到酵母基因组中的报告基因的转录。激活事先构建到酵母基因组中的报告基因的转录。n n（真核转录因子（真核转录因子（真核转录因子（真核转录因子DBDDBD能把蛋白定位到基因组特定能把蛋白定位到基因组特定能把蛋白定位到基因组特定能把蛋白定位到基因组特定DNADNA序列上，序列上，序列上，序列上，ADAD能够能够能够能够使转录装置激活基因转录。当这两个区域单独存在时均没有转录激活功使转录装置激活基因转录。当这两个区域单独存在时均没有转录激活功使转录装置激活基因转录。当这两个区域单独存在时均没有转录激活功使转录装置激活基因转录。当这两个区域单独存在时均没有转录激活功能，但当它们在空间上彼此联系时，则能够激活基因转录。）能，但当它们在空间上彼此联系时，则能够激活基因转录。）能，但当它们在空间上彼此联系时，则能够激活基因转录。）能，但当它们在空间上彼此联系时，则能够激活基因转录。）n n局限性局限性局限性局限性 n n双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内核内核内核内 n n酵母双杂交系统的一个重要的问题是酵母双杂交系统的一个重要的问题是酵母双杂交系统的一个重要的问题是酵母双杂交系统的一个重要的问题是“假阳性假阳性假阳性假阳性”n n2.2.免疫共沉淀（免疫共沉淀（免疫共沉淀（免疫共沉淀（Co-ImmunoprecipitationCo-Immunoprecipitation，CO-IPCO-IP）n n是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的常用、经典方法。究蛋白质相互作用的常用、经典方法。究蛋白质相互作用的常用、经典方法。究蛋白质相互作用的常用、经典方法。n n其基本原理是其基本原理是其基本原理是其基本原理是:n n细胞裂解液中加入抗体，与抗原形成特异免疫复合细胞裂解液中加入抗体，与抗原形成特异免疫复合细胞裂解液中加入抗体，与抗原形成特异免疫复合细胞裂解液中加入抗体，与抗原形成特异免疫复合物，经过洗脱，收集免疫复合物，然后进行物，经过洗脱，收集免疫复合物，然后进行物，经过洗脱，收集免疫复合物，然后进行物，经过洗脱，收集免疫复合物，然后进行SDS-SDS-PAGEPAGE及及及及Western blottingWestern blotting分析。分析。分析。分析。n n缺点缺点缺点缺点n n免疫沉淀蛋白有可能不是直接相互作用的蛋白，而免疫沉淀蛋白有可能不是直接相互作用的蛋白，而免疫沉淀蛋白有可能不是直接相互作用的蛋白，而免疫沉淀蛋白有可能不是直接相互作用的蛋白，而是通过第三者间接相互作用的蛋白是通过第三者间