2018—2020年黔东南少数民族自治州肠道病毒A71型基因特征分析.pdf

目的对2 0 18 一2 0 2 0 年黔东南州手足口病（hand，f o o t a n d m o u t h d i s e a s e，H FM D）进行鉴定分析，并对肠道病毒A组7 1型（enterovirusA71，EV-A 7 1）VP1编码区进行基因特征分析。方法2 0 18 2 0 2 0 年黔东南州共采集HFMD病例标本2789份，首先，采用荧光定量RT-PCR初筛肠道病毒核酸，阳性病例标本采用人类横纹肌肉瘤（human rhabdomyosarcoma，RD）细胞进行病毒分离，对分离到的病毒株提取病毒核酸，经RT-PCR方法扩增VP1编码区核苷酸序列并进行序列测定。使用MEGA11.0软件构建遗传进化树进行基因特征分析。结果2 7 8 9份HFMD标本中检出EV-A71核酸阳性标本为32 8 份，阳性率为11.8%。从部分EV-71阳性患者的咽拭子及肛拭子中，分离培养获得7 株病毒株，其中6 株来自于轻症病例，另1株为重症病例，均属于EV-A71基因型C4a基因亚型，分成2 个不同的簇。7 株EV-A71VP1序列之间核苷酸和氨基酸同源性分别为8 9.8%99.9%和98.0%99.7%；与BrCr原型参考株间的核苷酸和氨基酸同源性分别为7 7.1%7 8.8%和94.8%96.6%；并在VP1有18 处氨基酸位点发生变异。结论2 0 18 一2 0 2 0 年黔东南州EV-A71分离株属于C4a基因亚型，多处氨基酸位点存在变异，可导致多条传播链循环。关键词：肠道病毒；肠道病毒A组7 1型（EV-A71；基因型；手足口病（HFMD）中图分类号：R373.2*5文献标识码：A文章编号：16 7 3-7 58 X（2 0 2 3)0 4-0 2 2 2-0 6Genetic characteristics of enterovirus A71 in Qiandongnan Miao and DongAutonomous Prefecture from 2018 to 2020XIAO Jun*,SHAN Zhuzhou,JIANG Zhongjing,PEI Fengfeng,WANG Yu,TANG Xiaomin*Qiandongnan Center for Disease Control and Prevention,Qiandongnan,Guizhou 556000,ChinaCorresponding author:TANG Xiaomin,E-mail:WANG Yu,E-mail:Abstract:Objective To identify and analyze the hand,foot,and mouth disease(HFMD)in QiandongnanPrefecture from 2018 to 2020,and analyze the genetic characteristics of VP1 coding region of enterovirusA71(EV-A71).Methods A total of 2 789 HFMD case specimens were collected in Qiandongnan Prefecturefrom 2018 to 2020.First,fluorescent quantitative RT-PCR was used to screen the enterovirus nucleic acid.The positive case samples were isolated from human rhabdomyosarcoma(RD)cells,and the virus nucleicacid was extracted from the isolated virus strain.The nucleotide sequence of VP1 coding region was基金项目：国家自然科学基金项目（8 18 6 0 594)；贵州省科技计划项目（黔科合基础2 0 18 10 94)；筑科合同2 0 2 1 43-25号作者简介：肖俊（198 5一），男，湖南长沙人，副主任技师，研究方向为实验室监测。通信作者：唐小敏，E-mail：57 0 8 1910 7 q q.c o m；王宇，E-mail:amplified by RT-PCRRand sequenced.Geneticphylogenetic trees were constructed by MEGA 11.0software for gene feature analysis.Results Amongthe 2 789 HFMD samples,328 were positive for EV-A71 nucleic acid,with a 11.8%positivity rate.Fromthroat swabs and anal swabs of some EV-71positive patients,7 virus strains were isolated and223Applied Prev Med,Aug.2023,Vol.29 No.42023年8 月第2 9 卷第4期应用预防医学cultured,and 6 of them were mild cases and one was severe case,all of which belonged to the EV-A71genotype C4a gene subtype,divided into 2 distinct clusters.The nucleotide and amino acid homology amongthe 7 strains of EV-A71 VP1 sequences were 89.8%-99.9%and 98.0%-99.7%,respectively.The nucleotideand amino acid homology with the BrCr prototype reference strain were 77.1%-78.8%and 94.8%-96.6%,respectively.In addition,there were 18 amino acid positions in VP1 that mutated.Conclusions From 2018 to2020,the EV-A71 isolates in Qiandongnan Prefecture belonged to the C4a gene subtype,and there weremutations in multiple amino acid positions,which could lead to the circulation of multiple transmission chain.Keywords:enteroviruses;enterovirus A71(EV-A71);genotype;hand,food,and mouth disease(HFMD)手足口病(hand,foot andmouthdisease,HFMD)作为儿童易感的常见急性传染病，主要由多种人类肠道病毒（human enteroviruses，H EVs）病原体感染引起。HFMD典型临床症状以发热伴手、足、臀等部位出现皮疹或疱疹为主，部分病例可发展成病毒性脑膜脑炎、心肌炎、神经性肺水肿等重症并导致死亡2 。肠道病毒（enteroviruses，EV）属于小核糖核酸病毒科（picornaviridae）肠道病毒属（enterovirus），是一种无包膜（+）ssRNA病毒。基因组全长约7.4kb，由4种结构蛋白（VP1V P4）编码，其中VP1编码蛋白位于病毒衣壳表面，含有重要中和表位，其常作为肠道病毒基因分型的重要靶基因3。肠道病毒A组7 1型（enterovirusA71，EV-A 7 1）是目前较为常见的病原体与重要血清型，常引起HFMD的暴发与流行。EV-A71基因组由两端非编码区（un-translated region，U T R）与一个开放阅读框（open reading fram，O RF）组成，ORF编码的多聚蛋白经水解、加工成为结构蛋白及酶等活性分子。依据VP1基因序列差异，EV-A71可划分为AG 7 个基因型，其中B基因型与C基因型是引起EV-A71流行的常见基因型别，B基因型包括8个基因亚型，即B0B7；同样，C基因型也包括6个基因亚型，即C1C 6 4。为了降低EV-A71引起的HFMD发病率，2 0 16 年以来我国陆续推广使用3种非活性单价EV-A71疫苗5；上述疫苗的推广使用改变了HFMD主要优势病原的构成与流行趋势。黔东南州自开展HFMD实验室监测以来，持续关注不同肠道病原体引起的HFMD感染性疾病，但针对一段时间内该区域主要病原EV-A71型别演替与分子进化尚无相关研究，且疫苗接种引起群体免疫状态改变是否会引起EV-A71的变化，尚需相关实验数据进行评估。本研究以肠道病毒VP1编码区为切入点，对2 0 18 一2 0 2 0 年黔东南地区HFMD病原监测中分离到的EV-A71进行型别鉴定与分子进化分析，旨在丰富和构建该地区肠道病毒基因数据库，同时为制定防控策略、开展免疫规划提供有效的实验室参考数据。1材料与方法1.1标本来源与采集黔东南地区各市（县）疑似病例按照手足口病诊断（WS5882018)6)标准来判定，HFMD病例标本为咽子和（或）肛拭子。标本采集后立即冷藏送至黔东南州疾病预防控制中心手足口病实验室进行检测；标本保存于-7 0 以下。2 0 18 一2 0 2 0 年实验室共收到2789份HFMD样本。1.2肠道病毒核酸检测HFMD临床标本经预处理，采用磁珠法核酸提取试剂（西安天隆科技有限公司生产），使用全自动核酸提取仪（西安天隆NP968）进行RNA提取，操作按照说明书进行。提取RNA保存于-7 0 以下。使用达安基因股份有限公司生产的肠道病毒核酸检测试剂，采用实时荧光定量RT-PCR法检测肠道病毒：包括通用肠道病毒以及其他肠道病毒分型(EV-A71、C V-A 16、CV-A6、C V-A 10)。1.3病毒分离培养选取CT值低的EV-A71阳性病原标本送省级实验室进行病毒分离培养，所有重症和死亡病例标本需及时上送。上送标本采用人类横纹肌肉瘤(human rhabdomyosarcoma，RD)细胞进行病毒分离培养。将上送的阳性标本取0.1mL接种到生长良好、长成单层的RD细胞斜面培养管中，每个标本至少接种2 管，置于37、5%CO,中静置培养。使用倒置显微镜观察细胞病变（cytopathiceffecte，C PE），若出现特征性CPE且病变达到7 5%时，收获并冻存；若无特征性224Applied Prev Med,Aug.2023,Vol.29 No.4应用预防医学2023年8 月第2 9 卷第4期CPE，再连续盲传2 代。病毒分离培养设1管加有细胞维持液的培养管作为阴性对照。阳性培养物保存于-7 0 以下备用。1.4VP1区RT-PCR扩增及鉴定使用德国QIAGEN公司QIAamp?ViralRNAMiniKit提取试剂从阳性分离物中提取病毒RNA，详见试剂说明书，并在RNA中加入1LRNA酶抑制剂，-7 0 以下保存备用。采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）扩增病毒VP1区，所用引物参照文献7 ,引物序列为：EV71-VP1-S:5-GCAGCCCAAAAGAACTTCAC-3，EV 7 1-V P1-A:5-A A G T C G C G A GAGCTGTCTTC-3。使用 SuperScript?II One-StepRT-PCR Platinum?Taq HiFi 试剂（Invitrogen byLife Technologies）进行RT-PCR扩增，扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定，阳性产物送擎科生物基因测序服务公司进行测序。1.5序列分析使用DNAstar7.1软件对VP1序列进行编辑和拼接，通过Enterovirus GenotypingToolVersion 0.1(https:/www.rivm.nl/mpf/typingtool/enterovirus/)进行分子分型鉴定。从GenBank数据库中下载肠道病毒参考株基因序列，使用BioEdit7.0软件进行多序列比对，采用MEGA11.0软件通过Neighbor-joining 法（1 0 0 0 bootstraps），选择MaximumCompositeLikelihood核苷酸替代模型分析与构建基因亲缘关系进化树。2结果2.1HFMD病原学检测2018一2 0 2 0 年黔东南州共采集HFMD样本2 7 8 9份，肠道病毒核酸阳性标本18 36 份，阳性率为6 5.8%。男、女性检测份数分别为17 52、10 37 份，性别比为1.6 9：1。7 岁以下儿童检测份数为2 7 15份，占检测总数的97.3%，检测出的核酸阳性数为17 8 9份，占阳性标本数的97.4%。EV-A 7 1核酸阳性数为32 8 份（32 8/2 7 8 9，11.8%），感染EV-A71聚集性病例的阳性数为139份（139/2 7 8 9，5.0%），EV-A71导致的重症病例为15例。见表1。表12018一2 0 2 0 年黔东南地区HFMD病原学检测情况EVEV-A71EV-A71聚集性病例年份检测份数EV-A71重症病例阳性例数阳性率(%)阳性例数阳性率(%)阳性例数阳性率（%）2018118168558.0716.0312.64201991664770.6616.7272.98202069250472.819628.38111.73合计2.789183665.832811.81395.0152.2病毒分离与鉴定2018一2 0 2 0 年从上送的109份EV-A71阳性病例中，选取核酸检测CT值25的病原标本进行病毒分离培养，得到7 株阳性培养物，分别为2 0 18 年2 株、2 0 19年2 株、2 0 2 0 年3株，其中1株为重症患者中分离。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定，约在10 0 0 bp处检测到目的条带，对目的片段进行测序，经DNAstar7.1软件拼接出7 条VP1基因全序列。通过EnterovirusGenotypingToolVersion0.1初筛比对，7 株病毒分离物均为EV-A71基因型C4a基因亚型。2.31EV-A71VP1基因亲缘性关系基于肠道病毒VP1基因全序列，黔东南地区7 条病毒株序列与EV-A71A、B、C 亚型参考株构建基因亲缘性关系树。见图1A。结果表明，7 株EV-A71分离株均与C4a基因亚型同聚一簇，与EnterovirusGenotypingToolVersion0.1初筛比对结果一致，并且分成2 个不同的簇：2 0 19年分离株独立聚于成簇；2 0 2 0 年从重症患者中分离的SZK2020QDN-1-002毒株与2018和2 0 2 0 年的轻症病例分离株同聚一簇。EV-A71黔东南分离株与周边黔南州、遵义市、铜仁市、黔西南州及其各基因亚型代表株构建基因亲缘性关系树。见图1B。结果表明，重症病例SZK2020QDN-1-002分离株与2 0 19年黔西南重症病例分离株（SZK2019QXN323、S Z K 2 0 19Q X N47 3)同聚一簇；而2 0 19 年黔南重症病例分离株（S Z K 2 0 19Q N36 2）与本研究2 0 19年2 株轻症病例分离株同聚一簇。2.4EV-A71VP1基因同源性与氨基酸位点变异分析2 0 18 2 0 2 0 年该地区7 株EV-A71VP1基因间核苷酸与氨基酸同源性分别为8 9.8%99.9%和98.0%99.7%；与BrCr原型参考株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为7 7.1%7 8.8%和94.8%225Applied Prev Med,Aug.2023,Vol.29 No.42023年8 月第2 9 卷第4期应用预防医学A99SZK2020QDN-1-002-EV-A71(C4a)BSZK2020QN-08-030-EV-A71-C4a97SZK2020QN-08-042-EV-A71-C4a98SZK2020QDN-8-086-EV-A71-C4aSZK2020TR-09-0112-EV-A71-C4a10097SZK2020QDN-8-085-EV-A71-C4aSZK2020QDN-8-085-EV-A71-C4aSZK2018QDN678-EV-A71(C4a)65SZK2020QDN-1-002-EV-A71(C4a)SZK2018QDN679-EV-A71(C4a)99SZK2020QDN-8-086-EV-A71-C4aSZK2019QXN473-EV-A71(C4a)94518-03F/SD/CHN/2007-C4aSZK2019ZY618-EV-A71(C4a)0708T/NM/CHN/07-EU910861-C4a1001opSZK2019ZY832-EV-A71(C4a)99FY23/AH/CHN/2008-C4aSZK2018QN62-EV-A71(C4a)CY11/BJ/CHN/2008-FJ469153-C4aSZK2019QXN323-EV-A71(C4a)SZK2018QDN678-EV-A71(C4a)92SZK2019QDN085-EV-A71(C4a)98SZK2018QDN679-EV-A71(C4a)SZK2019QDN083-EV-A71(C4a)SZK2019QDN085-EV-A71(C4a)F1/SH/CHN/2000-AB115490-C4bSZK2019QDN083-EV-A71(C4a)SZK2019QN362-EV-A71(C4a)3254/TA/98-AF286531-C4bSZK2018QN82-EV-A71(C4a)H25/SH/CHN/2000-AB115492-C4b7692518-03F/SD/CHN/2007-C4a郎ShZh98/GD/CHN/1998-AF302996-C4b0708T/NM/CHN/07-EU910861-C4aSB9508-SAR/MAS/2003-AY258301-C1FY23/AH/CHN/2008-C4aCY11/BJ/CHN/2008-FJ469153-C4a0915/USA/1987-AF009549-C1F1/SH/CHN/2000-AB115490-C4b962T/VNM/2005-AM490162-C53254/TAI/98-AF286531-C4b82100933VVNM/2005-AM490161-C5H25/SH/CHN/2000-AB115492-C4b2641/AUS/1995-AF135947-C2ShZh98/GD/CHN/1998-AF302996-C4b8M-6/AUS/1999-AF376109-C2SB9508-SAR/MAS/2003-AY258301-C10915/USA1987-AF009549-C103/KOR/2000-AY125968-C3962TNNM/2005-AM490162-C57397-56/HLJ/CHN/1997-AB115494-C3933VNNM/2005-AM490161-C5BrCr/USA/1970-A2641/AUS/1995-AF135947-C28M-6/AUS/1999-AF376109-C26910/USA/1987-AF135901-B103/KOR/2000-AY125968-C397Nagoya/JPN/1973-AB059813-B197-56/HLJ/CHN/1997-AB115494-C332952/USA/1981-AF135888-B2BrCr/USA1970-A7423/USA/1987-U22522-B2546910/USA/1987-AF135901-B1Nagoya/JPN/1973-AB059813-B19806SB12007-SAR/MAS/2003-AY905548-B52952/USA1981-AF135888-B2SB12282-SAR/MAS/2003-AY905546-B57423/USA1987-U22522-B21004F-4/AUS/1999-AF376105-B3SB12007-SAR/MAS/2003-AY905548-B59896SK-EV006-SAR/MAS/97-AB059819-B3SB12282-SAR/MAS/2003-AY905546-B5100C7-Osaka/JPN/1997-AB059818-B44F-4/AUS/1999-AF376105-B35796SK-EV006-SAR/MAS/97-AB059819-B381L2027/SIN/2001-AF376111-B453C7-Osaka/JPN/1997-AB059818-B4CVA16/G-10792027/SIN/2001-AF376111-B4CVA16/G-10HH0.0500.050注：为本研究分离株；为其他地区分离株。A为EV-A71黔东南分离株与其各亚型代表株之间VP1区进化发育树；B为EV-A71黔东南、贵州其他地区分离株及其代表株间VP1区进化发育树。图120182020年黔东南州EV-A71VP1区进化发育树96.6%；与C4a基因亚型代表株518-0 3F之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为9 3.5%9 5.0%和98.0%98.6%。不同年份、不同地区轻症与重症病例分离株平均核苷酸差异为4.6%。7 株EV-A71基因序列基于VP1编码区8 91nt，推导出2 97 个氨基酸序列，与BrCr原型株比较，7 株EV-A71分离株有18 处氨基酸位点发生变异，其中有9处氨基酸位点发生共同变异，包括Q22H、T 2 8 9A；另有9处部分位点发生变异，包括E145Q、S 2 8 3T 和A293S。本研究中重症病例SZK2020QDN-1-002分离株与BrCr原型株相比较，有12 处氨基酸位点发生变异，第2 2 aa、第2 8 3aa和第2 8 9aa位点与轻症病例分离株发生同样的变异，其余氨基酸位点与该地区轻症病例及其他地区重症病例分离株间无太大差异，较为稳定。3讨论由肠道病毒引起的HFMD对儿童造成的危害与社会负担，已成为重要的公共卫生问题。研究发现，引起HFMD的肠道病毒谱呈多样性，但肠道病毒A组（EV-A）导致的HFMD较为常见。EV-A中的EV-A71在全球范围内呈现广泛流行8-9，中国自1998 年首次分离到EV-A71病毒株以来4，除持续传播流行外，还曾在山东省和安徽省引发重大疫情10 ；EV-A71原型株BrCr自196 9年在美国被发现以来11，其一直存在变异和重组，常可发生人群的聚集性感染与暴发，以及导致重症病例的发生。因此，持续、动态监测该型病毒的分子流行病学数据，有助于HFMD的防控。2018一2 0 2 0 年黔东南州共采集HFMD病例标下转第2 31页）226Applied Prev Med,Aug.2023,Vol.29 No.4应用预防医学2023年8 月第2 9 卷第4期本2 7 8 9份，检出肠道病毒核酸阳性率为6 5.8%；男性患者比例高于女性，并以7 岁以下儿童为主。EV-A71引起的聚集性疫情阳性检出比例为5.0%，相对较低，可能得益于疫苗的使用；虽然疫苗接种对控制EV-A71病毒感染有效，但仍存在免疫空白的可能12 ，有潜在暴发流行的风险。2 0 2 0 年由于新型冠状病毒肺炎大流行13，黔东南州HFMD检测份数虽有所减少，但EV-A71核酸阳性数比2018年、2 0 19年相比有所增加，该变化值得关注。据文献报道，2 0 17 一2 0 2 0 年黔东南州HFMD病原构成以其他未分型EV为主要优势病原，重症HFMD病例还是以EV-A71为主14，其他EV病原的分子进化数据值得后续开展相应研究。本研究基于肠道病毒VP1区全核苷酸全序列构建基因亲缘关系，2 0 18 一2 0 2 0 年黔东南少数民族自治州分离得到的7 株EV-A71病毒株均为C4a基因亚型；7 株病毒株与周边黔南州、遵义市、铜仁市、黔西南州不同年份EV-A71分离株以及EV-A71基因型C4a基因亚型参考株之间同聚一簇，进一步表明C4a基因亚型在全省分布广泛；相关数据显示，以往贵州省流行的肠道病毒EV-A71型也属于C4a基因亚型15，提示该型病毒在贵州省流行的时间较长，并与中国本土优势EV-A71基因亚型流行趋势相一致16 。本研究中，在基因亲缘性关系树上不同年份病毒株有2 个不同的簇，提示C4a基因亚型在该地区不同年份和不同县（区）流行，存在多个传播链。7 株EV-A71病毒株与不同地区分离株和亚型代表株间核苷酸和氨基酸高度同源；同时重症病例与轻症病例分离株及其他地区轻、重症病例分离株同聚一簇，VP1序列同源性高，无明显特征性差异。2018一2 0 2 0 年黔东南地区分离的肠道病毒EV-A71与BrCr原型株相比较，7 株EV-A71分离株有18 处氨基酸位点发生变异，其中有9处氨基酸位点发生共同变异，涉及Q22H、T 2 8 9A；另有9处部分位点发生变异，涉及E145Q、S 2 8 3T 和A293S，这些变异位点多数文献曾报道过。Q22H、S283T、T 2 8 9A 在VP1蛋白上有较高的突变率17 ，上述位点的改变可能会造成氨基酸性状发生变化，也会改变蛋白结构，从而影响病毒毒力18 。重症病例SZK2020QDN-1-002分离株与BrCr原型株相比较，有12 处氨基酸位点发生变异，与不同年份、不同地区轻症和重症病例分离株相比较，氨基酸位点无特殊变异，较为稳定。EV-A71神经毒性引起的重症，涉及到病毒免疫逃逸、受体、宿主等方面的研究19-2 0 ，仅通过VP1区不能区别轻症与重症病例，但上述变异位点有助于分析变异株的流行趋势与相关重要位点变化规律，以便从更多的角度来分析HFMD的流行特点。综上，黔东南地区病原标本分离率偏低，除了可能存在样本采集、保存运输与病毒滴度等因素影响外，病毒分离能力稍弱也是原因之一；今后应同时开展EV-A71全基因组检测，以便更好阐述其遗传变异特征。黔东南州是少数民族占主体的地区，不一样的人口学特征也许有更多的数据值得进一步挖掘。在现行免疫压力下，肠道病毒的变异概率增大，而持续对肠道病毒基因进行监测，能为HFMD防控以及疫苗接种提供更多的实验室数据。参考文献1Li Y,Chang ZR,Wu P,et al.Emerging enteroviruses causinghand,foot and mouth disease,China,2010-2016JJ.EmergInfect Dis,2018,24(10):1902-1906.2Tang JW,Holmes CW.Acute and chronic disease caused byenterovirusesJ.Virulence,2017,8(7):1062-1065.3Gulholm T,Yeang M,Nguyen I,et al.Molecular typing ofenteroviruses:comparing 5UTR,VP1 and whole genomesequencing methodsJ.Pathology,2022,54(6):779-783.4张勇，杨帆，胡永峰，等.我国手足口病病原学研究和关键防控技术的建立及推广应用.中国病毒病杂志，2 0 17，7(2)：8 7-95.5Wang J,Jiang L,Zhang C,et al.The changes in theepidemiology of hand,foot,and mouth disease after theintroduction of the EV-A71 vaccineJJ.Vaccine,2021,39(25):3319-3323.6中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.手足口病诊断：WS5882018S.北京：中国标准出版社，2 0 18.7Zhang Y,Tan XJ,Wang HY,et al.An outbreak of hand,foot,and mouth disease associated with subgenotype C4of human enterovirus 71 in Shandong,China JJ.J ClinVirol,2009,44(4):262-267.8Mirand A,Molet L,Hassel C,et al.Enterovirus A71subgenotype B5,France,2013J.Emerg Infect Dis,2015,21(4):707-709.9Puenpa J,Auphimai C,Korkong S,et al.Enterovirus A71上接第2 2 6 页231Applied Prev Med,Aug.2023,Vol.29 No.42023年8 月第2 9 卷第4期应用预防医学水源受到粪便污染的可能性较大。究其原因，主要是配备的消毒设备大部分未按要求使用，加上工程供水规模偏低、卫生许可证持证率偏低等，导致供水水质微生物指标超标。本次调查分析显示，有卫生许可证的的供水工程水质达标率高于无卫生许可证的供水工程，说明在获取卫生许可证的过程中对供（管）水人员开展的消毒技术培训，有助于提升其管理水平；消毒设备按要求使用的供水工程水样达标率同样高于偶尔使用、不使用和无消毒设备的供水工程水样，说明消毒设备的规范使用对水质达标率影响较大18-9 。综上所述，建议有关部门进一步落实饮用水水源保护，配套完善水质净化消毒设施设备，健全从“水源水”到“水龙头”全过程的水质保障体系，同时进一步规范农村集中式供水工程净化消毒设施设备的日常运行，加强工程净化消毒设施设备的监督检查，强化工程运行管理人员的培训和业务指导，加大供水单位供水和用户水龙头出水等饮用水安全状况信息的公开力度，才能使广西农村集中式供水工程水质状况得到有效而持续的改善。参考文献1韦日荣，黄江平，黎勇，等.2 0 19 年广西壮族自治区城乡饮用水水质监测结果分析刀.中国卫生工程学，Infection,Thailand,2017 JJ.Emerg Infect Dis,2018,24(7):1386-1387.10 韦欢欢，朱俊萍，何秋水.手足口病主要病原变迁及分子进化研究J.病毒学报，2 0 2 0，3 6(5)：9 3 6-9 45.11 Glaser C,Wilson MR.Enteroviruses:the elephants in theroomJJ.Lancet Infect Dis,2020,20(2):153-155.12 Wang JX,Zhu SL,Wang J,et al.Seroprevalence of enterovirusA71 and coxsackievirus A16 in healthy people in Shandongprovince,ChinaJJ.PLoS One,2016,11(9):e0162373.13 Wu YC,Chen CS,Chan YJ.The outbreak of COVID-19:An overviewJJ.J Chin Med Assoc,2020,83(3):217-220.14单竹周，裴峰锋，胡维，等.2 0 17 一2 0 2 0 年黔东南地区手足口病病原构成及监测分析J.中国病原生物学杂志，2 0 2 2，17(9)：10 57-10 6 0.15阎岩，郭军，周敬祝，等.2 0 0 8 一2 0 11年贵州省肠道病毒7 1型分子流行特征分析J.病毒学报，2 0 13，2 9(2):176-179.2020,19(2)：16 1-16 6.2中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会.生活饮用水卫生标准：GB57492006S.北京：中国标准出版社，2 0 0 7.3中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会.生活饮用水标准检验方法：GB/T57502006S.北京：中国标准出版社，2 0 0 6.4广西壮族自治区第十二届人民代表大会.广西壮族自治区饮用水水源保护条例EB/OL.（2 0 17-0 1-2 6)2022-12-01.http:/ 0 2 0 年吉林省农村生活饮用水卫生监测结果分析.中国卫生工程学，2 0 2 2，2 1（1)：16 6，17 0.6李张，秦岭，王粲，等.2 0 18 年四川省农村饮用水水质卫生监测结果分析J.预防医学情报杂志，2 0 2 0，36(12):1572-1576.7高异，崔春霞，秦钰涵，等.2 0 18 年内蒙古自治区农村生活饮用水卫生状况分析J.环境卫生学杂志，2021,11(5):438-441.8李张，金立坚，秦岭，等.四川省农村生活饮用水水质影响因素分析J.现代预防医学，2 0 16，43（16)：2913-2916.9雷佩玉，孟昭伟，郑晶利，等.2 0 14一2 0 18 年陕西省农村生活饮用水微生物污染调查J.现代预防医学，2019,46(24):4506-4509.收稿日期：2 0 2 3-0 5-11编辑：韩彦彬，周圆16 Zhang Y,Tan XJ,Cui AL,et al.Complete genome analysis ofthe C4 subgenotype strains of enterovirus 71:predominantrecombination C4 viruses persistently circulating in Chinafor 14 yearsJ.PLoS One,2013,8(2):e56341.17 He YQ,Zou LJ,Chong MKC,et al.Genetic evolution of humanenterovirus A71 subgenotype C4 in Shenzhen,China,1998-2013J.J Infect,2016,72(6):731-737.18李洁，杜轶威，霍达，等.基于肠道病毒A71型基因组研究其毒力相关位点J.中华实验和临床病毒学杂志，2 0 18，3 2(3)：3 18-3 2 2.19 Ong KC,Wong KT.Understanding enterovirus 71neuropathogenesis and its impact on other neurotropicenterovirusesJ.Brain pathol,2015,25(5):614-624.20 Heckenberg E,Steppe JT,Coyne CB.Enteroviruses:The roleof receptors in viral pathogenesisJ.Adv Virus Res,2022(113):89-110.收稿日期：2 0 2 3-0 1-0 6编辑：韩彦彬，周圆