1、DOI:103969/j issn1672-7770 2023 02006胶质瘤基础长链非编码 RNA Linc00645 在脑胶质瘤中的表达及其功能研究王宇杰,李晨龙,郑宏山,刘清,艾思奇,王英杰,肖旭,苏天崎,付天娇,梁鹏【摘要】目的研究长链非编码 RNA Linc00645 在脑胶质瘤组织中的表达水平及其对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探究其可能的作用机制。方法分析癌症基因组图谱(TCGA-GBM)数据库和中国脑胶质瘤基因组计划(CGGA)数据库中,Linc00645 在正常脑组织和胶质瘤组织中的表达情况,并采用实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)在人正常星形胶质细胞株和 5
2、 种胶质瘤细胞株中检测 Linc00645 的表达水平。敲低 Linc00645 表达后,应用细胞增殖实验(MTT)检测胶质瘤细胞的增殖能力,应用划痕实验和 Transwell 侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。应用 Western Blot 实验在蛋白水平上验证敲低 Linc00645 的表达对胶质瘤细胞侵袭和迁移相关蛋白的影响。结果Linc00645 在脑胶质瘤中的表达水平明显高于正常脑(P 0 05),并且 Linc00645 的表达水平随着胶质瘤病理等级的升高而升高(P 0 05)。Linc00645 高表达组的患者,总体生存期明显缩短,预后较差(P 0 05)。抑制 Linc0064
3、5 的表达后胶质瘤细胞的增殖、侵袭以及迁移能力均明显下降。基因表达相关性(Pearson)分析显示上皮-间质样转化(EMT-like)相关标志物 N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)和锌指 E-盒结合同源异形盒因子(ZEB1)与 Linc00645 表达呈正相关性,而E-钙黏蛋白(E-cadherin)与 Linc00645 表达呈负相关性(P 0 05)。敲低 Linc00645 的表达后细胞中的 E-cadherin 表达水平升高,而 N-cadherin、Vimentin 和 ZEB1 表达水平明显降低。结论长链非编码 RNALinc00645 在胶质瘤组织
4、中高表达,并且其表达水平与肿瘤的恶性程度密切相关。Linc00645 可能通过升高N-cadherin、Vimentin 和 ZEB1 的表达水平从而提高胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力。Linc00645 可能作为胶质瘤早期诊断和治疗的新靶点。【关键词】神经胶质瘤;长链非编码 RNA;侵袭;上皮-间质样转化【中图分类号】R739 41【文献标志码】A【文章编号】1672-7770(2023)02-0146-07Expression and function of long non-coding RNA Linc00645 in glioma WANG Yu-jie,LI Chen-long,ZHE
5、NG Hong-shan,et al Department of Neurosurgery,Harbin Medical University CancerHospital,Harbin 150001,ChinaCorresponding author:LIANG PengAbstract:ObjectiveTo investigate the expression of long non-coding RNA Linc00645 inglioma tissues and its effect on the proliferation,invasion and migration of gli
6、oma cells,and toexplore its possible mechanisms MethodsThe expression of Linc00645 in normal brain tissuesand glioma tissues in The Cancer Genome Atlas(TCGA-GBM)database and the Chinese GliomaGenome Atlas(CGGA)database were analyzed,and quantitative Real-Time Polymerase ChainReaction(qRT-PCR)was use
7、d to verify the expression in Normal Human Astrocyte and 5 glioma celllines After knocking down the expression of Linc00645,MTT assay was used to detect theproliferation capacity of the glioma cells,and the wound healing assay and the Transwell assay wereconducted to evaluate the migration and invas
8、ion ability of the cells Western Blot was performed toverify the effect of Linc00645 knockdown on the invasion and migration-related proteins of gliomacells at the protein level ResultsThe expression of Linc00645 in glioma tissues was significantlyhigher than that in normal brain tissues(P 0 05),and
9、 the expression of Linc00645 increasedalong with the advance of the pathological grade of glioma(P 0 05)In the Linc00645 high基金项目:黑龙江省自然科学基金资助项目(LH2021H080)作者单位:150001 哈尔滨,哈尔滨医科大学附属肿瘤医院神经外科通信作者:梁鹏641J Clin Neurosurg,April 2023,Vol 20,No 2expression group,the overall survival period was significantly
10、 shorter and the prognosis was worse(P 0 05)After inhibiting the expression of Linc00645,the proliferation,invasion and migrationability of glioma cells were significantly reduced The Pearson correlation analysis showed that EMT-like related markers N-cadherin,Vimentin and zinc finger E-box binding
11、homeobox 1(ZEB1)werepositively correlated with Linc00645,while E-cadherin was negatively correlated with Linc00645(P 0 05)The expression of E-cadherin increased,while the expression of N-cadherin,VimentinandZEB1significantlydecreasedafterknockingdowntheexpressionLinc00645ConclusionsLong non-coding R
12、NA Linc00645 is highly expressed in glioma tissues,and itsexpression is closely related to the malignancy of the tumor Linc00645 could increase the expressionof N-cadherin,Vimentin and ZEB1 to enhance the invasion and migration ability of glioma cellsTherefore,Linc00645 may serve as a new target for
13、 early diagnosis and treatment of gliomaKey words:glioma;long non-coding RNA;invasion;epithelial-mesenchymal transition-like在过去的几十年中,神经胶质瘤已成为中国乃至全球中枢神经系统恶性肿瘤相关死亡的主要原因1。尽管在诊断和治疗方面取得了很多进展,但神经胶质瘤患者的预后仍然很差,中位总生存期为12 14 个月。胶质瘤的发病率不断上升且病死率很高,因此迫切需要阐明其发展的病理机制。众所周知,胶质瘤发生的过程很复杂,涉及很多基因突变和 生 物 过 程 的 多 个 步 骤2 4
14、。上 皮 间 质 转 化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是促进肿瘤侵袭和迁移过程的重要机制5。长链非编码 RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是一类 RNA 转录物,长度大于 200 个核苷酸,没有编码蛋白质的功能 6。LncRNAs 以前被认为是转录噪声,然而现已发现它们在一系列生物学过程中起着关键作用,如表观遗传调控,组蛋白修饰,转录控制和 RNA 代谢等过程 7。长链非编码 RNA 00645(Linc00645)位于人类14 号染色体上,已在子宫内膜癌中被证实有表达异常并发挥重要作用 8,然而 Linc00645
15、在胶质瘤中的作用尚不清楚。本研究检测了Linc00645 在脑胶质瘤组织中的表达水平,随后检测敲低 Linc00645 的表达对胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力及相关标志物的影响,明确 Linc00645 在胶质瘤发生发展中的作用,为神经胶质瘤的治疗提供一种新的策略。1资料与方法1 1数据库样本数据收集自癌症基因组图谱数据库(The Cancer Genome Atlas,TCGA)(http:/cancergenome nih gov)下载 164 例样本数据,其中包含 159 例级胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)组织样本和 5 例正常脑组织样本。自中国脑胶质瘤基因图谱数据库
16、(Chinese Glioma Genome Atlas,CGGA)(www cgga org)下载 262 例胶质瘤患者样本,其中包含世界卫生组织(WHO)级 96 例,级 52 例,级 114 例。样本数据用于正常脑组织和胶质瘤组织中 Linc00645 表达情况的分析。1 2生存分析方法从 TCGA 和 CGGA 数据库中下载 GBM 患者的生存期数据,对 Linc00645 和 GBM患者生存期进行相关性分析,通过 Graphpad 软件采用 Kaplan-Meier 法绘制患者生存期曲线,并进行 Log-rank 检验,以 P 005 认为差异具有统计学意义。1 3与 Linc006
17、45 相关的功能分析使用基因本体论(gene ontology,GO)分析对 Linc00645 的生物学功能 进 行 预 测。通 过 Starbase V2 0 数 据 库 对Linc00645 进行靶基因预测并根据相关性选取前 50个基因作为靶基因,后通过功能注释生物信息数据库(The Database for Annotation,Visualization andIntegrated Discovery,DAVID)(https:/david ncifcrfgov/)对 Linc00645 进行基因功能注释,探索与Linc00645 相关性最高的生物学功能注释,收集差异倍数为 Fold
18、 change 2 且错误发现率 False discoveryrate 0 01 为有意义注释。1 4主要材料和试剂所有细胞株均采用含 10%胎牛血清、0 2%双抗(50 U/mL 青霉素和链霉素)的 DMEM 高糖培养基培养,细胞均培养在 37、CO2浓度为 5%的培养箱中。胎牛血清和 DMEM高糖培养基均购自美国 Hyclone 公司,青霉素-链霉素溶液(100 )购自上海碧云天生物技术有限公司。RNA 提取试剂盒,逆转录试剂盒和实时定量 PCR 试剂盒均购自瑞士 Roche 公司。Transwell小室(预铺基质胶)购自美国 Corning 公司。苏木素-伊红试剂盒和 MTT 细胞增殖
19、检测试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司。载 Linc00645的 siRNA 所用商品化质粒购自上海吉凯基因化学技术有限公司。741临床神经外科杂志 2023 年第 20 卷第 2 期1 5实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)方法按照Trizol 说明书提取胶质瘤细胞系中的总 RNA,应用NanoDrop 检测 RNA 浓度。Linc00645 的正向引物序列为5-CAGAGGTGGTGCCTTGACA-3,反向引物序列为 5-ATATCCTCTGTGGCCCATGC-3,GAPDH作 为 内 参 基 因,其 正 向 引 物 序 列 为 5-CACCCACTCCTCCACCTTTG-3,
20、反向引物序列为5-CCACCACCCTGTTGCTGTAG-3。以总 RNA 为模板,逆转录得到 cDNA,然后加入引物使用 SYBRGreen qPCR 分析法进行 qRT-PCR 实验,反应结束后使用 ABI Prism7900HT PCR 仪自带分析软件,导入原始数据,获得相应的 CT 值、Ct 值,并以 2 Ct值(Ct:循环阈值)算法分析 qRT-PCR 结果,得到目的基因的相对表达量。1 6细胞培养方法所有细胞株均采用含 10%胎牛血清、0 2%双抗(50 U/mL 青霉素和链霉素)的DMEM 高糖培养基培养。细胞均培养在 37、CO2浓度为 5%的培养箱中。在光学显微镜下观察并记
21、录细胞贴壁情况,2 3 d 更换完全培养基一次,换液时弃掉培养皿中培养基,加入预染的 PBS 液(pH=7 4)3 mL 漂洗 1 次,随后加入 5 mL 预热完全培养基,于培养箱中继续培养。1 7实验分组结果 1 分组:(1)正常组和 GBM组(图 1A);(2)级组,级组和级组(图1B);(3)人正常星形胶质细胞株(NHA)组和胶质瘤细胞株(U251、LN229、T98G、A172、SHG44)组(图1C)。结果 2 分组:(1)TCGA 中 Linc00645 低表达组(n=78)和高表达组(n=81)(图 2A);(2)CGGA中 Linc00645 低表达组(n=121)和高表达组(
22、n=141)(图 2B)。结果 3 分组:(1)U251 细胞株和T98G 细胞株中 si-NC 组和 si-Linc 1#组、si-Linc 2#组、si-Linc 3#组(图 3A);(2)U251 细胞株中 si-NC组和 si-Linc00645 组(图3B);(3)T98G 细胞株中 si-NC 组和 si-Linc00645 组(图 3C)。结果 4 分组:(1)U251细胞株中 si-NC 组和 si-Linc00645 组(图4A,4C-4E);(2)T98G 细胞株中 si-NC 组和 si-Linc00645组(图4B-4E)。结果 5 分组:(1)U251 细胞株中 si
23、-NC 组和 si-Linc00645 组(图 5E,5F);(2)T98G 细胞株中 si-NC 组和 si-Linc00645 组(图5E,5G)。1 8细胞转染转染前一天,将 5 105贴壁细胞铺到 6 孔板中。当细胞融合度达到 60%70%时用于进行后续实验。准备无 RNase EP 管,将 EP 管A:Opti-MEM 培养基 250 L+目的基因质粒 4 L(100 pmol)和 B:Opti-MEM 培 养 基 250 L+Lipofectamine 2000 5 L 混合后静置 20 min,加入 6孔板中培养 4 h。更换新鲜培养基继续培养 24 48 h后收集细胞。1 9细
24、胞增殖实验利用北京碧云天公司生产的MTT 细胞增殖检测试剂盒进行细胞增殖实验。根据说明书,在 15 mL 离心管中使用 5 mL 的 MTT 溶剂混匀溶解 25 mg MTT 粉,分装后置于 20 避光保存。将2 103/孔贴壁细胞铺到加入了100 L 培养基的 96 孔板中培养过夜。每孔加入 10 L MTT溶液后继续孵育4 h。每孔加入100 L Formazan 溶解液,轻轻混匀后继续孵育10 min,在光学显微镜下观察结晶紫的溶解程度。取出培养板后,使用酶标仪检测 570 nm 处的吸光度,导出数据,根据存活率计算公式得到相应数值,绘制增殖曲线。1 10细胞划痕实验细胞划痕实验是用来检
25、测细胞迁移运动和修复能力的方法。实验前所有工具进行高压灭菌,直尺和信号笔置于超净台中紫外照射 30 min。使用信号笔在无菌 6 孔板背后每隔0 5 cm 画一条横穿过孔直线。实验前一天加入5 105细胞铺板,培养过夜。实验时用枪头沿着直尺划过细胞方向与孔板背面画线相垂直,枪头垂直划过贴壁细胞。使用 PBS 液洗掉脱落的细胞,加入无血清培养基继续培养,在 0 h、24 h 取样拍照。使用 Image J 软件分析细胞修复面积,进行统计学分析。1 11Transwell 侵袭实验利用美国 Corning 公司生产的商品化的预包被基质胶 Transwell 小室进行Transwell 侵袭实验。使
26、用时提前取出小室,在上室加入 300 L 无血清培养基,在室温下静置 30 min水化基质胶,将 Transwell 小室放入 24 孔培养板中,小室内部为上室,培养板底部为下室。使用无血清培养基制备细胞悬液。上层小室加入 300 L 细胞悬液,下层小室加入 500 L 含 20%的 FBS 培养基。继续培养 24 h 后取出小室,对小室内侧使用蒸馏水轻轻冲洗,使用棉签擦去内层基质胶和上室内细胞。将小室置入含有 4%多聚甲醛的孔板内,固定细胞10 min。使用 HE 染色液染色标记细胞,晾干后翻转小室在显微镜下计数并拍照。1 12Western Blot 方法收集细胞,使用 RIPA 裂解液方
27、法提取总蛋白。使用 NanoDrop 分光光度计法测定提取蛋白浓度,通过检测纯净的蛋白在280 nm处的吸光值,直接定量蛋白浓度和纯度,上样量为 200 g/孔。使用 Bio-Rad 垂直电泳系统进行蛋白电泳,然后将蛋白转至聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride,PVDF),使用 5%的脱脂牛奶在室温下封闭 1 h,再使用 TBST 稀释目的一抗,841J Clin Neurosurg,April 2023,Vol 20,No 2将 PVDF 膜浸于一抗中,4 孵育过夜。随后用TBST 漂洗移除一抗,再将 PVDF 膜浸于相应二抗中,室温下在摇床上孵育 1 h,TBST
28、 漂洗。采用 ECL化学发光显色法,显影前以配置 11 比例配置发光液A 液和 B 液,充分混匀,将 PVDF 浸润于显色液中,将PVDF 膜放置于 Bio-Rad 凝胶成像系统平台中,使用Biorad Image Lab 软件分析目的蛋白的相对灰度值。1 13统计学分析所有数据均采用 SPSS v 19 0或者 GraphPad Prism v 5 0 进行统计学分析。组间比较采用 c2检验及 Fisher 确切概率法,生存期采用Kaplan-Meier 法绘制生存曲线并进行 Log-rank 检验,基因表达的相关性分析采用 Pearson 法,以 P 0 05 认为有显著的统计学意义。2结
29、果2 1Linc00645 在脑胶质瘤中的表达与生物学功能分析结果对癌症基因组图谱(TCGA-GBM)数据库中所采集样本的表达数据分析显示,Linc00645 在胶质瘤中的表达水平明显高于正常脑组织(P 0 05)(图 1A)。对 CGGA 数据库中所采集样本的mRNA 表达数据分析显示,Linc00645 的表达水平随着胶质瘤病理等级的升高而升高(P 0 05)(图1B)。提示 Linc00645 在正常脑组织和胶质瘤组织中存在差异表达性,且表达量与胶质瘤的恶性程度呈正相关(P 0 05),差异具有统计学意义。对人正常星形胶质细胞株 NHA 和胶质瘤细胞株 U251、LN229、T98G、A
30、172、SHG44 采 用 qRT-PCR 检 测Linc00645 的相对表达水平,结果显示 Linc00645 在胶质瘤细胞株中的表达水平显著高于正常星形胶质细胞株 NHA(P 0 05),差异具有统计学意义(图1C)。以上结果提示,Linc00645 在胶质瘤中的表达明显上调。对 Linc00645 进行 GO 富集分析,首先利用 Starbase V2 0 数据库对 Linc00645 进行靶基因预测,根据相关性选取前 50 个基因作为靶基因,使用DAVID 数据库进行了 GO 功能注释,结果显示Linc00645 主要功能汇聚在金属钛酶活性,间质化迁移,金属离子结合位点,细胞基质黏附
31、等相关分子功能(图 1D)。A:癌症基因组图谱(TCGA-GBM)数据库中 Linc00645 的表达数据;B:CGGA mRNA 芯片数据库中 Linc00645 的表达数据(级);C:Linc00645 在人正常星形胶质细胞株 NHA 和胶质瘤细胞株 U251、LN229、T98G、A172、SHG44 中的表达情况;D:Linc00645 相关基因的 GO 分析数据图 1Linc00645 在胶质瘤组织中的表达情况22Linc00645 表达量与脑胶质瘤患者生存期的关系在 TCGA 和 CGGA 数据库中下载 GBM 患者的临床数据,以 Linc00645 表达中位数将患者分为高表达组(
32、High expression)和低表达组(Low expression)并对 其 进 行 Kaplan-Meier 生 存 分 析,结 果 显 示Linc00645 高表达组的患者,总体生存期明显缩短,预后较差(P 0 05),差异具有统计学意义,提示胶质瘤中 Linc00645 高表达与患者预后呈负相关(图2)。2 3敲低 Linc00645 的表达对胶质瘤细胞增殖活性的影响3 组 siRNA 序列中,si-Linc00645 1#组(si-Linc 1#)敲减效率最明显,故选择用来进行后续实验(图 3A)。细胞增殖实验结果显示,U251 和T98G 细 胞 株 在 培 养 24 h、48
33、 h 和 72 h 后 si-Linc00645 组的增殖能力低于 si-NC 组(图 3B,图3C),这表明 Linc00645 的表达下调可抑制胶质瘤细胞的增殖能力。2 4敲低 Linc00645 的表达对胶质瘤细胞侵袭和迁移能力的影响划痕实验和 Transwell 侵袭实验结果显示,U251 和 T98G 细胞株在培养 24 h 后 si-Linc00645 组胶质瘤细胞的愈合能力和穿过小室的细胞数量均显著低于 si-NC 组(图 4),这表明Linc00645 在体外对胶质瘤细胞的发生和发展具有促进作用,Linc00645 的表达下调可抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力。2 5敲低 Lin
34、c00645 的表达对胶质瘤细胞 EMT 过程的影响共表达基因相关性分析显示 EMT 相关标志 物 N-钙 黏 蛋 白(N-cadherin),波 形 蛋 白(Vimentin)和 锌 指 E-盒 结 合 同 源 异 形 盒 因 子(zincfinger E-box binding homeobox 1,ZEB1)与Linc00645 表 达 呈 正 相 关 性,E-钙 黏 蛋 白(E-cadherin)与 Linc00645 表达呈负相关性(P 0 05)(图 5A-D),差异具有统计学意义。Western Blot 实941临床神经外科杂志 2023 年第 20 卷第 2 期A:TCGA
35、数据库;B:CGGA 数据库图 2Linc00645 低表达和高表达组胶质瘤患者的 Kaplan-Meier 生存曲线验结果表明,U251 和 T98G 细胞株在培养 48 h 后,si-Linc00645 组中 E-cadherin 表达水平高于 si-NC组,而 si-Linc00645 组 中 N-cadherin、Vimentin 和ZEB1 表达水平低于 si-NC 组,抑制了胶质瘤细胞的EMT 过程(图 5E-G)。以上结果提示,Linc00645 的表达与胶质瘤中 EMT 过程存在密切相关性。3讨论LncRNA 的功能主要根据其在细胞内特定的分布区域,在细胞质或细胞核中通过各自的
36、序列特殊性结合 mRNA、miRNA 及相关功能蛋白发挥功能,包括 DNA 甲基化,对 mRNA 稳定性的维持,通过“分子海绵”吸附 miRNA,以及通过结合转录蛋白发挥转录调控的功能。越来越多的研究显示,LncRNA在肿瘤的恶性生物学行为,神经系统发育和放化疗抵抗过程中发挥着重要作用。多种 LncRNA 被认为是肿瘤进展的关键调节因子9 12。EMT 指的是上皮细胞在一些因素的作用下,失去极性及细胞间紧密连接和黏附连接,获得了浸润性和游走迁移的能力,变成具备间质细胞形态和特性的细胞的改变。由于胶质瘤细胞来源于胶质细胞,从神经上皮细胞发育而来,因此很多特征不同于经典上皮细胞,但是胶质瘤同样具有
37、高度可塑性,称为 EMT 样(EMT-like)过程13 14,调节 GBM 的侵袭迁移过程。近年来,许多研究报道了 EMT 或 EMT-like 机制参与其他非上皮性肿瘤的恶性进程15 16。最近定义的 GBM 的间充质亚型提示在恶性脑肿瘤中,类 EMT 过程也具有临床重要性。既 往 研 究 显 示,LncRNAH19,CCAT2 和HOTTIP 与 胶 质 瘤 的 EMT 和 患 者 预 后 不 良 有关17 19。研究者最先发现 Linc00645 在子宫内膜癌中存在差异表达,可以作为肿瘤的生物学标志物。据研究报道在对 TCGA 数据进行 WGCNA 分析时发现 Linc00645 在胶
38、质瘤中可能呈高表达状态,并与恶性生存期存在相关性20。鉴于 Linc00645 对胶质瘤细胞的生物学功能可能存在调控作用,本研究进一步探讨潜在的调控机制。首先通过生物信息学的方法,在 CGGA 胶质瘤样本数据中发现,这些 EMT相关标志物的表达水平均与 Linc00645 呈密切相关。随后通过 Western Blot 实验,发现 Linc00645 的表达被抑制后,胶质瘤细胞内 N-cadherin,Vimentin和 ZEB1 蛋白的表达水平也显著下降。综上所述,本研究发现,Linc00645 的表达水平在胶质瘤组织中上调,并与肿瘤的恶性程度密切相关,上调的 Linc00645 预示胶质瘤
39、患者的总体生存期较差。Linc00645 可能通过调控 EMT-like 相关标志物 N-cadherin,Vimentin 和 ZEB1 蛋白的表达促进胶质瘤细胞的 EMT 进程,从而促进胶质瘤的增殖、侵袭和迁移能力。至于 Linc00645 的表达为何在胶质瘤中上调,仍需对其上游调控因子进行进一步的A:siRNA 组和 si-NC 组胶质瘤细胞中 Linc00645 的表达水平;B:MTT 实验检测 U251 细胞敲低 Linc00645 后的细胞增殖能力;C:MTT 实验检测 T98G 细胞敲低 Linc00645 后的细胞增殖能力图 3MTT 实验检测 Linc00645 的敲减对胶质
40、瘤细胞增殖活性的影响051J Clin Neurosurg,April 2023,Vol 20,No 2AC:划痕实验检测 U251 和 T98G 胶质瘤细胞敲低 Linc00645 后的细胞迁移能力;DE:Transwell 侵袭实验检测U251 和 T98G 胶质瘤细胞敲低 Linc00645 后的细胞侵袭能力图 4侵袭迁移实验检测 Linc00645 的敲减对胶质瘤细胞侵袭和迁移能力的影响AD:胶质瘤患者 Linc00645 表达与 EMT 相关标志物表达的相关性分析(P 0 05);EG:敲低 Linc00645 的表达后,Western Blot 实验检测 U251 和 T98G 胶
41、质瘤细胞中 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 和 ZEB1 蛋白的表达图 5Western Blot 实验检测 Linc00645 的敲减对胶质瘤细胞 EMT 过程的影响研究来探索。而 Linc00645 通过何种机制影响这些蛋白的表达,本研究猜测 Linc00645 可能作为竞争性内源 RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)靶向结合 miRNA,进而调控下游靶基因,从而调控胶质瘤细胞 EMT 样转化过程。这些结果将增进我们对癌症发展潜在机制的理解,并可能为人类胶质瘤的治疗提供潜在的新策略。利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突。参考
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