六味地黄丸治疗老年痴呆症的研究进展.pdf

102综述July,2023BasicTraMedicineVol.2,No.7六味地黄丸治疗老年痴呆症的研究进展郭敬，方萌，雷登良，曾鹏？摘要目的阐明补肾名方六味地黄丸多成分、多靶点、多途径治疗老年痴呆症的协同作用机制。方法全面检索中英文数据库获取六味地黄丸入血成分、治疗老年痴呆症的临床与临床前机制研究进展。基于阿尔兹海默病（AD）关键病理生理学过程的网络药理学方法筛选六味地黄丸抗AD靶点及其入血成分。结果六味地黄丸对老年痴呆症的治疗效果确切可靠，不良反应少，其机制包括调控胆碱能系统、自噬、脑微血管功能、自由基损伤、免疫功能、神经元凋亡、胰岛素信号转通路等。基于高效液相色谱指纹图谱，笔者收集了35个六味地黄丸入血成分，并对其成药性与安全性进行了评价。基于AD病理生理学过程的网络药理学分析表明，六味地黄丸治疗AD的关键成分是泽泻醇A单乙酸酯、亚油酸、泽泻醇F、土莫酸、丁香酚甲醚、十六烷酸与茯苓酸。结论本文汇总了35个六味地黄丸入血成分，综述了六味地黄丸治疗老年痴呆症的协同作用机制，利用网络药理学为老年痴呆症的药物研发提供了一系列有潜力的先导化合物，并为深入拓展六味地黄丸的临床应用提供了理论依据。关键词老年痴呆症；阿尔兹海默病；六味地黄丸；入血成分；病理生理学过程DOI10.20065/ki.btcm.20230157Liuwei Dihuang Pills in the Treatment of Senile Dementia:A ReviewGUO Jing,FANG Meng,LEIDengliang,ZENG Peng(1.School of Medicine,Jianghan University,Wuhan 430056,China;2.School of BasicMedicine,Hengyang Medical College,University of South China,Hengyang 421001,China)AbstractObjective To elucidate the synergistic mechanism of Liuwei Dihuang Pills,akidney-tonifying Chinese herbal formula,in the treatment of senile dementia through its multiplecomponents,targets,and pathways.Methods A comprehensive search of Chinese and Englishdatabases was conducted for the plasma components of Liuwei Dihuang Pills and research progresson the clinical and preclinical mechanisms of Liuwei Dihuang Pills in treating senile dementiawas obtained.Network pharmacology based on key pathological and physiological processes ofAlzheimers disease(AD)was used to identify the anti-AD targets and plasma components of LiuweiDihuang Pills.Results Liuwei Dihuang Pills have shown reliable and effective therapeutic effects forAD with minimal adverse reactions.The underlying mechanism included modulation of the cholinergicsystem,autophagy,cerebral microvascular function,free radical injury,immune function,neuronalapoptosis,and insulin signaling pathways.Based on high-performance liquid chromatography基金项目：南华大学校级科研课题（2 2 0 XQD090）；湖南省教育厅科学研究优秀青年项目（2 2 B0416）作者单位：1.江汉大学医学院（湖北武汉430 0 56）；2.南华大学衡阳医学院基础医学院（湖南衡阳42 10 0 1）通信作者：曾鹏，E-mail：z e n g p u s c.e d u.c n1032023年7 月第2 卷第7 期基层中医药fingerprint,35 plasma components of Liuwei Dihuang Pills were identified,and their pharmacologicalproperties and safety were evaluated.Network pharmacology analysis based on AD pathologicalprocesses revealed that key components of Liuwei Dihuang Pills in treating AD were alisol Amonoacetate,linoleic acid,alisol F,tumulosic acid,methyl eugenol,palmitic acid,and pachymic acid.Conclusion This study summarized 35 plasma components of Liuwei Dihuang Pills and provided anoverview of its synergistic mechanism in the treatment of senile dementia.The application of networkpharmacology has identified a series of potential lead compounds for drug development in seniledementia.These findings also provide a theoretical basis for further exploring the clinical applicationsof Liuwei DihuangPills.Keywords senile dementia;Alzheimers disease;Liuwei Dihuang Pills;plasma component;pathophysiological process老年痴呆症（Senile dementia）是一种严重的神经退行性疾病，以记忆力和心理能力进行性丧失，性格变化明显为主要临床表现。老年痴呆症包括阿尔兹海默病（Alzheimersdisease，A D）、血管性痴呆、路易体痴呆、额叶痴呆等，其中AD是老年痴呆症最常见的亚型（占6 0%7 0%），其次为血管性痴呆（占2 0%）。据世界卫生组织的最新数据，2 0 19年全球约有550 0 万人罹患痴呆症，预计到2 0 50 年将增至1.39亿1。目前，老年痴呆症缺乏有效的治疗手段，乙酰胆碱酯酶抑制剂、N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartic acid,NMDA）受体拮抗剂美金刚与靶向淀粉样蛋白（A my l o i d-，A）的阿杜那单抗（Aducanumab）具有一定的治疗作用2.3。但上述药物常伴随着副作用，乙酰胆碱酯酶抑制剂最常见的副作用有食欲减退、恶心、呕吐、腹泻，美金刚的副作用包括头晕、头痛、疲劳、血压升高与便秘。因此，基于中药有效成分单味中药及复方制剂开发疗效确切、安全无毒的防治老年痴呆症的药物或先导化合物至关重要。中医古籍并没有老年痴呆症的病名记载，其临床症状属中医“呆病”“痴呆”“善忘”“文痴”“郁证”等范畴。灵枢海论云“肾主骨，生髓，通于脑”，“脑为髓海”以及“肾精不足，则志气衰，不能上通于心，故迷惑善忘也”。强调肾气充足，则养脑髓，髓海不足，则脑元失养，神机失用，而致痴呆。因此“肾精亏虚、髓海失养”是老年痴呆症发生、发展的根本病机4。补肾益精是中医治疗老年痴呆症最基本的原则，应贯穿于整个病程中5。补肾名方六味地黄丸来源于宋代医学家钱乙的小儿药证直诀，由熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、牡丹皮、茯苓按8：4：4：3：3：3的比例混合组成。方中熟地黄为君，滋肾阴以填精；山茱萸、山药为臣，具有养肝补气、健脾益气的功效，三补以培其本；泽泻、丹皮、茯苓三泻以治其标共为佐（表1）。六味地黄丸组方独具特色，疗效肯定，其临床主治病证不断扩大，包括老年痴呆症、帕金森病、缺血性脑卒中、骨质疏松、女性更年期综合征等6 。虽然六味地黄丸临床主治病证很多，但也不能盲目地服用，肾阳虚、表1六味地黄丸的组成及其性能中文名英文名药用部位四气五味归经配比结构熟地黄RadixRehmanniaePreparata根微温甘肝、肾经8君山茱英FructusCorni果肉微温酸、涩肝、肾经4臣山药Rhizoma Dioscoreae根茎平甘脾、肺、肾经4臣牡丹皮Cortex Moutan根皮微寒苦、辛心、肝、肾经3佐茯苓Poria菌核平甘、淡心、肺、脾、肾经3佐泽泻RhizomaAlismatis块寒甘、淡肾、膀胱经3佐104July,2023BasicTradMedicineVol.2,No.7脾虚胃虚患者不宜服用六味地黄丸。在糖尿病（消渴病）的中医治疗中存在六味地黄丸的滥用【7.8 。O本文旨在综述六味地黄丸治疗老年痴呆症的研究进展及其物质基础，以期为六味地黄丸治疗老年痴呆症提供理论依据并确定一系列有潜力的先导化合物。1六味地黄丸治疗老年痴呆症的临床、机制研究进展1.1六味地黄丸治疗老年痴呆症的临床研究进展药物临床试验是确证其有效性和安全性的必要步骤。滋阴补肾代表方剂六味地黄丸的临床使用历史悠久，其治疗老年痴呆症的安全性与有效性已得到充分证明，这也是基于中医经方的药物研发的显著优势。最近十余年大量临床研究关注了六味地黄丸治疗老年痴呆症的临床疗效（表2），其治疗老年痴呆症的总有效率为（8 9.56 3.8 4）%9-17 。对于肾阴虚型老年痴呆症，六味地黄丸能明显提高患者认知能力，改善其临床症状（包括精神障碍与中医证候）及日常生活能力13 14.16 。老老年痴呆中晚期伴有精神症状，主要表现为易怒、易躁、性格古怪、妄想、幻觉等症状。六味地黄丸可改善老年痴呆症精神行为症状，其临床疗效优于奥氮平（疗效显著的抗精神分裂药物），不良反应亦低于奥氮平9.10.12.15.16 。上述临床研究证明六味地黄丸对老年痴呆症的治疗效果确切可靠，显著改善临床症状的同时不良反应比单用西药少。药物临床试验失败的常见原因是临床前研究（体外和体内）和人体试验之间存在差异，即动物试验中显示出疗效的药物无法在临床中得到确证1.2六味地黄丸治疗老年痴呆症的临床前研究进展临床前研究是科研人员探究疾病发生、发展内在机制的主要手段，也是阐明药物防治疾病的作用及其作用机制的重要方法。为探究六味地黄丸治疗老年痴呆症的潜在机制，研究者在老年痴呆症的细胞模型及动物模型中进行了大量研究（表2)。体外研究方面，以A25-35或A1-42处理大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）与人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y），细胞模型为AD细胞模型18-0 。体内研究方面，科研人员使用了多种疾病动物模型，包括氢化可的松复合侧脑室注射A25-35建立的肾虚型老年痴呆症动物模型21-23肾精不足证AD动物模型（快速老化SAMP8小鼠）【2 41，侧脑室或海马注射A25-35建立的AD动物模型2 5.2 6 】以及正常衰老的昆明小鼠【2 7 等。六味地黄丸治疗老年痴呆症的动物模型也存在一些问题,如未在经典的AD转基因小鼠APP/PS1小鼠、3Tg小鼠、5FAD小鼠上进行验证，未使用多物种、多模型互补研究。乙酰胆碱（Acetylcholine，A c h）是中枢胆碱能系统中重要的神经递质之一，乙酰胆碱酯酶抑制剂是目前临床上使用最为广泛的AD治疗药物。六味地黄丸可增加老年小鼠脑内Ach、多巴胺、去甲肾上腺素活性，降低胆碱酯酶活性，改善中枢神表2 六味地黄丸治疗老年痴呆症的研究进展作者，年研究对象主要结果口服六味地黄丸6 个月改善老年痴呆症患者简易智能状卿照前,2 0 0 7 32 采用六味地黄丸治疗老年痴呆症患者50 例态检查评分、日常生活能力量表评分与老年临床评定量表评分采用六味地黄丸治疗老年痴呆症患者（治疗组54张春梅,2 0 12 33六味地黄丸改善患者认知障碍与日常生活能力例，对照组50 例）110例老年痴呆症患者随机分为治疗组和对照组各55总有效率治疗组为8 3.6%，六味地黄丸改善老年痴呆症沈燕萍,2 0 139例，治疗组患者给予六味地黄丸进行治疗，对照组精神行为症状，不良反应发生率低于奥氮平患者给予奥氮平进行治疗采用六味地黄丸治疗老年痴呆症患者40 例，对照组六味地黄丸对改善老年痴呆症患者的智力、生活能力李君玲,2 0 143440例等方面有一定疗效治疗总有效率为8 3.3%，可明显改善患者精神行为症段芙蓉,2 0 14【10 六味地黄丸对12 0 例老年痴呆症患者进行治疗状，临床效果较显著1052023年7 月第2 卷第7 期基层中医药续表2六味地黄丸治疗老年痴呆症的研究进展续表2六味地黄丸治疗老年痴呆将10 5例老年痴呆症患者分为治疗组51例和对照组54杜国亮,2 0 15 11例，治疗组患者给予六味地黄丸联合盐酸美金刚进行治疗，对照组患者给予盐酸美金刚进行治疗老年痴呆症精神行为症状的患者6 0 例，治疗组采用付英杰,2 0 1512 六味地黄丸治疗（30 例），对照组采用奥氮平治疗（30 例）采用六味地黄丸联合盐酸多奈哌齐胶囊治疗肾阴虚陈静,2 0 17 13型老年痴呆症，联合组和对照组各35例采用六味地黄丸联合盐酸多奈哌齐片治疗髓海不张力,2 0 17 14足、肾阴亏虚型轻、中度AD患者7 6 例，对照组和联合组各38 例采用六味地黄丸治疗老年痴呆症患者，观察组（六孙巧茹,2 0 17 35味地黄丸）与对照组（脑蛋白水解物片）各42 例采用六味地黄丸治疗老年痴呆症伴精神行为异常患古剑珂,2 0 18 15者，治疗组（六味地黄丸）和对照组（奥氮平）各40例采用六味地黄丸联合盐酸多奈哌齐治疗肾阴虚型老靳红强,2 0 2 0 16 年痴呆症患者，观察组与对照组各40 例采用六味地黄丸联合盐酸美金刚治疗110 例老年痴呆孙帅帅,2 0 2 0 36 症患者，对照组与观察组各55例采用六味地黄丸联合美金刚治疗AD患者6 个月，研宋文涛,2 0 2 117 究组与对照组各53例以皮下注射5%D-半乳糖8 周的ICR小鼠为AD动物模刘国君,2 0 10 31型采用糖皮质激素复合侧脑室注射A25-35建立了肾虚王红梅,2 0 12 2 1 型老年痴呆症动物模型以双侧海马组织注射A25-3s的Wistar大鼠为AD动物张越颖,2 0 152 5模型对12 月龄老年昆明小鼠给予六味地黄浓缩丸6 g/kg灌周从辉,2 0 16 2 7 胃10 天采用A25-35损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12宋军营,2 0 17 18 细胞）建AD细胞模型以Wistar大鼠灌胃氢化可的松2 周后侧脑室注射熊义涛,2 0 18 2 2 A25-35为肾虚型老年痴呆症动物模型以皮下注射氢化可的松后侧脑室注射A25-35（6 g/朱仲康,2 0 19 2 3只）C57-B6小鼠为肾虚AD动物模型以皮下注射氢化可的松后侧脑室注射A25-35（6 g/李新云,2 0 2 1 2 6 只）C57-B6小鼠为AD动物模型贾亚泉,2 0 2 2 2 4以6 月龄SAMP8小鼠作为肾精不足证AD动物模型宋军营,2 0 2 2 2 8 以6 月龄SAMP8雄性小鼠为AD模型小鼠袁永,2 0 2 2 19以A25-35处理神经细胞株PC12细胞为AD细胞模型以A1-42寡聚体（2 0 molL-1）处理SH-SY5Y细朱仲康,2 0 2 2 2 0 胞48 小时为AD细胞模型定的研究进展总有效率治疗组为90.2%，对照组为8 5.2%，治疗组总有效率优于对照组，显著改善老年痴呆患者的智力和生活能力等，不良反应相比单用西药少治疗组的总有效率为90.0 0%，高于对照组的8 3.33%。改善老年痴呆症精神行为症状，有效地提升患者的记忆力，增强认知能力，不良反应率较低联合组总有效率为91.4%，明显提高肾阴虚型老年痴呆症患者认知能力，改善其临床症状及日常生活能力，无明显不良反应治疗总有效率为8 9.5%，改善患者的智力情况和生活能力，还可显著改善患者的中医证候有效提高患者的日常生活能力，改善其生活质量，效果确切治疗组的总有效率为92.5%，其治疗老年痴呆症伴精神行为异常患者的临床疗效优于奥氮平，不良反应亦低于奥氮平观察组治疗总有效率为9 5.0 0%，改善患者的精神障碍及认知障碍观察组改善氧化应激指标，提高日常生活能力、生存质量，其不良反应发生率低于对照组治疗总有效率为9 0.57%，缓解临床症状，提升日常生活能力，调节血清BDNF等水平，不良反应小六味地黄丸减轻自由基损伤同时抑制骨代谢，改善学习记忆能力与早衰症状六味地黄丸改善肾虚型老年痴呆症小鼠自主活动度的减少、免疫功能低下、学习记忆损伤、抗疲劳能力低下及脑部病理损伤等症状六味地黄丸降低海马Caspase-3水平，提示其可能影响AD海马细胞凋亡，改善学习记忆六味地黄丸通过增加老年小鼠脑内乙酰胆碱（Ach）、多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE）活性，降低胆碱酯酶（CHE）活性，改善中枢神经系统功能六味地黄丸含药血清增加VEGF-B蛋白水平，增加A25-35损伤的PC12细胞的活性六味地黄丸改善胸腺和脾指数、血清皮质酮值等，改善空间学习记忆六味地黄丸增加海马神经元中LC3表达，降低p62水平，提高海马神经元自噬水平，保护海马神经元六味地黄丸提高肾虚AD小鼠的认知能力，保护海马神经元细胞，提高脑脊液胰岛素水平，改善胰岛素信号转导通路六味地黄丸通过RAGE/LRP1受体系统调节A代谢，通过抑制vWF表达和增加VEGF-A和CD34促进脑微血管新生，改善SAMP8小鼠脑微血管损伤，改善空间学习记忆调控PI3K/Akt/FoxO3a信号通路，下调自噬相关因子ATG5、Be c lin 1和LC3B表达和减少凋亡，改善SAMP8AD模型小鼠的学习记忆能力六味地黄丸含药血清通过提高磷酸化FoxO3a蛋白水平提高AD细胞模型的细胞活性六味地黄丸含药血清增加A诱导的SH-SY5Y细胞自噬相关基因的表达，上调自噬水平，减轻细胞损伤106July，2023BasicTrMedicineVol.2,No.7经系统功能2 7 。自噬功能障碍与老年痴呆症密切相关，激活自噬是对抗神经退行性病变的策略之一。六味地黄丸能显著提高海马神经元自噬水平，减轻神经元损伤，改善老年痴呆症模型小鼠的学习记忆能力2 0.2 3.2 8 。慢性脑血流灌注不足和微血管改变为AD的早期临床标记【2 9.30 1。六味地黄丸通过RAGE/LRP1受体系统调节A代谢，通过抑制血管性血友病因子（vonWillebrandfactor，v W F）表达和增加VEGF-A和CD34促进脑微血管新生，改善SAMP8小鼠脑微血管损伤，改善空间学习记忆2 4。此外，六味地黄丸治疗老年痴呆症的机制还涉及自由基损伤【31、免疫功能【2 1.2 2 、神经元凋亡2 5.2 8 、胰岛素信号转通路2 6 等。上述六味地黄丸治疗老年痴呆症的机制涉及对症治疗与影响疾病进展的多个环节，提示六味地黄丸通过多种活性成分经多靶点、多途径发挥协同作用，治疗老年痴呆症。六味地黄丸机制研究也存在缺陷，如缺乏应用安全性评价，高质量的基础研究，“活性成分一靶点一疾病病理生理学过程”关系不清等。因此，研究六味地黄丸靶向老年痴呆症病理学过程的物质基础及其研究进展具有重要意义。2六味地黄丸的物质基础及其成药性评价2.1六味地黄丸的物质基础复方通过多种活性成分作用于不同器官的多个靶点，协同作用于疾病病理生理学过程发挥临床疗效。复方整体药物效应明显大于方中任何一药或一组药物，仅关注复方所含中药的成分或体外实验中具有药理活性的成分并不能阐明复方的药效物质基础。因此，基于中药数据库（如中药系统药理学数据库与分析平台TCMSP）的六味地黄丸的物质基础研究在方法学上存在严重缺陷，通常导致研究结果高度同质化37-39。中药血清药物化学是研究复方药理学作用与配伍规律的有效方法，SD大鼠灌胃3mL六味地黄丸溶液（6.7 5g/kg）后检测血清与脑脊液中六味地黄丸原型成分。王迪等【40 基于超高效液相色谱线性离子阱/静电场轨道组合式高分辨质谱联用（U PLC-LT Q-O r b i t r a p-M S）技术共鉴定到2 1个六味地黄丸人血成分，4个人脑成分（丹皮酚、丁香酸、花酸、异土木香内酯）。为全面收集六味地黄丸人血成分进一步检索文献40-50 1，共获得35个六味地黄丸主要入血成分（表3），这些入血成分是六味地黄丸的药效物质基础。在上述入血成分中提及丹皮酚、马钱苷、莫诺苷、芽菜苷（又名当药苷）的文献数量最多。对六味地黄丸人血、人脑成分的深刻认识，可为该方的质量评价和控制及药效物质基础研究奠定基础。诚然，服用复方后利用现代科技手段检测血液中的活性成分受到诸多限制，科学监测复方成分在体内的复杂变化尚需大量的研究去探索。以高效液相色谱法（High performance liquidchromatography，H PLC）测定丹皮酚含量、莫诺苷和马钱苷含量分别是牡丹皮与山茱萸的质量控制方法，而梓醇是熟地黄的主要有效成分。六味地黄丸存在不同剂型，最近的一项研究表明，六味地黄丸浓缩丸和水蜜丸之间存在一定的内在质量差异，5-羟甲基糠醛、地黄苷D、苯甲酰芍药苷可作为不同剂型间的潜在质量标志物，马钱苷、芽菜苷、2 3-乙酰泽泻醇B、丹皮酚、莫诺苷、没食子酸可作为不同剂型间的差异标志物51。使用HPLC法同时测定六味地黄丸中丹皮酚、马钱苷与芍药苷，结果显示丹皮酚的含量为40.152.54mg/g、马钱苷为6 6.443.10 mg/g、药苷为11.661.01mg/g52。在河南省宛西制药股份有限公司提供的六味地黄丸浓缩丸中莫诺苷含量约为 1.0 mg/g 3。2.2六味地黄丸的物质基础的成药性评价里宾斯基五规则（Lipinskisrule of five，RO 5）是化合物成药性的经验规则，也是经口药物的公认标准54。本文使用ADMETlab 2.0（h t p s:/ o l e c u l e w e i g h t，M W）50 0、氢键供体数（Numberof hydrogen bond donors，H d o n）5、氢键受体数（Number of hydrogen bond acceptors,Hacc）10、可旋转键数（Numberof rotatablebonds，Rb o n）10、脂质-水分配系数（Lipid-waterpartitioncoefficient，Lo g P）5。如果违反上述两个性质，该化合物可能存在口服生物利用度低的情况。35个六味地黄丸人血成分中16 个成分完全符合1072023年7 月第2 卷第7 期基层中医药表3六味地黄丸35个主要入血化学成分里宾斯基五规则（RO5）成分文献化学式分子量HdonHaccRbonLogP(g/mol)(-)-Hydroxycitric acid lactone40C.H.O7190.11372-1.34（藤黄内酯）5-(Methoxymethyl)-2-furoic46,47,50C.H:O4156.141430.69acid（5-羟甲基-2-糠酸）6-O-methylcatalpol45C16H24010376.365105-1.73（6-O-甲基梓醇）Alisol Amonoacetate45 Cs2H52 O532.75*3674.64（泽泻醇A单乙酸酯）AlisolF（泽泻醇F）45CoH4:Os488.713524.08Caffeic acid（咖啡酸）40C.H:O4180.163420.93Caftaricacid（单咖啡酰酒石酸）40C1sHi209312.23597-0.23Catalpol（梓醇）40,45Ci5H22010362.336*104-2.26Cornuside（山茱英新苷）40C24H30O14542.49*7*14*11*-0.34DehydropachyMic acid41 CaH5oOs526.75*2586.01*（去氢茯苓酸）Ellagicacid（花酸）#40C14H.O:302.194801Ferulicacid（阿魏酸）40C1oH1o04194.182431.36ForsythosideA（连翘酯苷A）40C29H36O15624.59*9*15*11*-0.55Gallicacid（没食子酸）40C,H.Os170.124510.21Geniposidicacid（京尼平苷酸）40 C16H22010374.346*105-1.63Isoalantolactone40C15H20O2232.320203.26（异土木香内酯）#Kaurane（贝壳杉烷）45C20H34274.480005.95*Linoleic acid（亚油酸）45C1sH3202280.451214*5.45*Loganic acid（马钱苷酸）40C16H24010376.366*104-1.4840-44,46-48,Loganin（马钱苷）C,7H26010390.385105-1.19501Manninotriose（甘露三糖）40C18H32O16504.44*11*16*11*-5.47Methyl eugenol（丁香酚甲醚）45C,H1402178.230242.58Morroniside（莫诺苷）41,43,45-50Ci7H26011406.38511*5-1.38Oxypaeoniflorin（羟基芍药苷）40C23H2:O12496.466*12*7-0.87Pachymicacid（茯苓酸）41CasH52O5528.76*2586.18*Paeoniflorin（芍药苷）40,44,48C23H2:O11480.46511*7-0.3740-42,44,46-Paeonol（丹皮酚）#C.H1oO3166.171321.6348,501Paeonolide（丹皮酚原苷）40,45C20H2:O 12460.436*12*7-1.66Palmiticacid（十六烷酸）45C16H3202256.421214*5.2*Sarracenin（脱水莫诺苷元）40,45C.,H,4O5226.230521.03Stigmasterol（豆笛醇）45C20H4g0412.691156.97*40,41,46,47,Sweroside（獐芽菜苷）Ci6H2O358.34494-0.56501Syringicacid（丁香酸）#40C.H1oO5198.172530.99Tumulosic acid（土莫酸）45CaiHsoO4486.733465.73*Verbascoside（毛蕊花苷）45C29H3O15624.59*9*15*11-0.43注：#代表六味地黄丸入脑原型成分，表中不满足RO5的内容用*标注108July,2023BasicTredicineVol.2,No.7R05，9个成分违反一个RO5规则，10 个成分（如山茱萸新苷、羟基芍药苷、丹皮酚原苷、连翘酯苷A、甘露三糖等）违反两个以上RO5规则（表3），这说明大部分六味地黄丸入血成分在体内具有良好的生物利用度。例如，大鼠体内的药代动力学研究表明入血、人脑成分丹皮酚的绝对口服生物利用度为2 8.92%56 、马钱苷的绝对口服生物利用度为13.2%57 。成药性差、口服生物利用度低的六味地黄丸人血成分抗老年痴呆症的疗效、机制需在今后的研究中探索，例如于蕾58】发现山茱英新苷通过抗氧化损伤、抗神经炎症和抗神经细胞调亡改善AD小鼠认知障碍。3六味地黄丸化学成分的安全性评价复方的毒效机制较单体更为复杂，了解复方毒效基础对提高复方临床应用的安全性至关重要。复方的一大优势是可通过药物的有机配伍减少方中药物的偏性和毒性。如四逆汤中附子和甘草的配伍，麻杏石甘汤中麻黄、石膏的配伍，皆可减少方中辛烈药物的偏性和毒性。临床上，六味地黄丸治疗老年痴呆常见的副作用有嗜睡、头痛、头晕、失眠、锥体外系不良反应等。虽然六味地黄丸治疗老年痴呆不良反应比单用西药少，但其安全性物质基础尚无明确报道。本文使用ProTox-I1（h t p s:/o x-n e w.c h a r i t e.d e/p r o t o x _/）59评价六味地黄丸35个入血成分的安全性，毒理学参数包括肝毒性、急性口服毒性（Medianlethaldose，LD50，m g/k g）和包括致癌性、免疫毒性、致突变性和细胞毒性在内的多个毒理学终点。ProTox-II将每种化合物的急性毒性分为1级至6 级，分别对应致命、致病、有毒、有害、可能有害和无毒。根据文献6 0，6 1，急性毒性等级低于3级且大于三个阳性毒性终点的化合物被认为是有毒的。因此，六味地黄丸35个入血成分均无毒，其中15个成分无阳性毒理学终点，6 个成分有2 个阳性毒理学终点，14个成分有1个阳性毒理学终点（图1）。贝壳杉烷急性口服毒性最低（LD50：15380mg/kg），其次为泽泻醇A单乙酸酯（LD50：15070mg/kg）、亚油酸（LD50：10 0 0 0 mg/k g）、藤黄内酯（LD50：7 0 0 0 mg/k g）。三类化合物泽泻醇F是泽泻药材的主要成分之一，2 4批样品中其含量为0.0 0 4 0.0 94mg/g62。泽泻醇F具有免疫621抑制和抗病毒功能，在体外对乙肝病毒表面抗原的分泌具有抑制活性，其IC50为0.6 M63。在35个六味地黄丸人血成分中泽泻醇F的急性口服毒性最高（LD50：34mg/k g），六味地黄丸日常口服剂量中泽泻醇F的含量是否与其治疗老年痴呆常见的副作用有关还需进一步研究。4六味地黄丸抗AD靶点的筛选及其人血成分AD是老年痴呆症最常见的亚型（占60%7 0%），其主要病理学特征是细胞外A肽聚集形成的老年斑（Senileplaques，SPs），细胞内过度磷酸化tau形成的神经原纤维缠结（Ne u r o f i b r i l l a r y t a n g l e s，NFT s），神经炎症和神经元及突触可塑性的丢失6 4.6 5。为阐明六味地黄丸多成分、多靶点的协同抗AD机制，笔者基于35个六味地黄丸人血成分（表3）进行了基于AD重要病理生理学过程的网络药理学分析6 。根据SwisTargetPredition(htp:/ww.swisstargetprediction.ch/）6 7】与六味地黄丸人血成分的化学结构，六味地黄丸35个人血成分共作用于58 0 个靶点，其中泽泻醇F具有最多的作用靶点（10 8 个），其次为亚油酸（10 2 个）、泽泻醇A单乙酸酯（10 2 个）、土莫酸（98 个）、十六烷酸（8 2 个）。本文使用以下三种策略来筛选六味地黄丸治疗AD的靶点。首先，笔者基于AlzData数据库（http:/www.alzdata.org/）【6 8）筛选与AD病理学相关的六味地黄丸靶点。58 0 个六味地黄丸靶点中有154个与AD主要病理学特征显著相关，其中52个六味地黄丸靶点与A病理学显著相关，33个靶点与tau病理学相关，6 9个靶点与A、t a u病理学均相关（图2 A）。其次，基于京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库中38 4个阿尔茨海默病通路（hsa05010）靶点得到了51个六味地黄丸抗AD靶点（图2 B），这些靶点作用于A的产生与清除、tau磷酸化、神经炎症和神经元死亡等。第三，笔者进行了疾病本体（Disease Ontology，DO）富集分析，以全面了解58 0 个六味地黄丸靶点涉及的人类疾病。在本研究中，DO富集分析由R中的DOSE Bioconductor包6 9 进行。Benjamini-1092023年7 月第2 卷第7 期基层中医药08&S10000T000L000t000t000000000000000000000Z100606DZOST000S忆0000000S000S000S008608621667000000000000000000LL018LD50(mg/kg)CytotoxicityMutagenicityImmunotoxicityCarcinogenicityHepatotoxicityToxicityclass6A44n.a.62ActiveInactiveFatalnon-toxic注：出现毒理学终点为Active，不出现为Inactive，#代表六味地黄丸入脑原型成分图1六味地黄丸入血、入脑成分及其毒理学参数Hochberg（BH）方法用于校正P值，并且仅考虑AdjustedPvalue0.05的富集DO条目。六味地黄丸作用靶点涉及的人类疾病主要是tau病变(DOID：680）、阿尔茨海默病（DOID：10 6 52）、营养过剩（D O ID：6 54）营养疾病（DOID：37 4）肥胖（DOID：9970）等。AD（D O ID：10 6 52）富集最显著（AdjustPvalue=7.05E-30），并有10 2 个六味地黄丸靶点参与其中（图2 C）。汇总上述三个筛选策略，最终获得了2 46 个用于AD治疗的六味地黄丸靶点（图2D）。42.4%的六味地黄丸靶点与AD重要病理生理学过程相关，结合DO富集分析中AD是六味地黄丸影响最显著的疾病并具有最多的靶点数量，这些结果与临床上六味地黄丸对老年痴呆症的治疗效果确切可靠一致，更提示AD是六味地黄丸特异性靶向的主要疾病。六味地黄丸抗AD的2 46 个靶点对应32 个人血成分，这些入血成分具有的抗AD靶点数量的频数分布图如图2 E所示。具有10 个以上的抗AD靶点的六味地黄丸人血成分共有2 1个（图2 E），其中泽泻醇A单乙酸酯具有最多数量的抗AD靶点（51个），其次为亚油酸（45个靶点）、泽泻醇F（43个靶点）、土莫酸（38 个靶点）、丁香酚甲醚（34个靶点）十六烷酸（32 个靶点）、茯苓酸（30 个靶点）。六味地黄丸抗AD的2 46 个靶点生成的PPI网络包含2 44个节点和2 8 41条边，其中 AKT1、T NF、G A PD H、I L6、M A PK 3、I L1B、VEGFA、H SP9 O A A 1、H RA S、M T O R、ST A T 3、ESR1、M A PK 1、PPA RG、CCND 1、A PP、T LR4、PTGS2、BCL2 L1、M A PK 14度值位于前2 0（图2G）。网络药理学分析证明了六味地黄丸物质基础、作用靶点与AD病理生理学过程的密切联系，其中泽泻醇A单乙酸酯（又称泽泻醇A-24-醋酸酯）亚油酸、泽泻醇F、土莫酸、丁香酚甲醚、十六烷酸、茯苓酸是其发挥抗AD效应的关键成分（图2 F、G）。六味地黄丸抗AD关键成分泽泻醇A单乙酸酯是泽泻的主要成分之一7 0 ，Maoliang Liao等人提出泽泻醇A单乙酸酯可作为泽泻代表性Q-marker71。现代药理学研究表明泽泻醇A单乙酸酯可调节炎症、氧化应激、自噬和凋亡等多个过程。在全脑缺血/再灌注损伤模型中，泽泻醇A单乙酸酯