牵张离子通道通过miRNA-146a_NF-κB通路介导呼吸机相关性肺损伤的实验研究.pdf

基础研究牵张离子通道通过m i R N A a/N F B通路介导呼吸机相关性肺损伤的实验研究福建医科大学附属协和医院心血管外科(福州 )陈梅芳林勇张家欣吕晓钗王阶波基金项目:福建省自然科学基金资助项目(J )福建省心脏医学中心;通信作者;麻醉科【摘要】目的探析呼吸机相关性肺损伤(V I L I)的发生机制,为防治V I L I提供新的理论依据.方法以自主呼吸大鼠为对照组(S组),大潮气量机械通气大鼠为实验组(V组),以牵张离子通道(S A C)阻滞剂大鼠作为干预措施组(VB组),每组各 只;机械通气后比较大鼠肺组织结构和功能、m i R NA a、N F BP 、炎症因子(T N F 、I L )表达有无不同.结果机械通气后大鼠肺组织结构破坏明显,氧合功能明显减低,肺组织m i R NA a表达明显下调,N F BP 表达上调,肺部和全身炎症因子浓度增加.相比V组大鼠,VB组大鼠上述病变程度明显减轻,肺组织m i R NA a表达下调减缓,N F BP 表达上调程度减轻,肺部和全身炎症因子浓度增加幅度减少.结论S A C可能通过m i R NA a/N F B途径介导V I L I发生,有望成为防治V I L I的新靶点.【关键词】牵张离子通道;呼吸机诱导肺损伤;炎症【中图分类号】R ;R 【文献标识码】A【文章编号】()E x p e r i m e n t a l s t u d yo f s t r e t c h a c t i v a t e dc h a n n e l c o n t r i b u t i n g t o v e n t i l a t o r i n d u c e d l u n g i n j u r y v i am i R N A a/N F Bp a s s w a y CHEN M e i f a n g,L I NY o n g,ZHANGJ i a x i n,L VX i a o c h a i,WANGJ i e b oD e p a r t m e n t o fC a r d i o v a s c u l a rS u r g e r y,F u j i a nM e d i c a lU n i v e r s i t yU n i o nH o s p i t a l,F u z h o u,F u j i a n ,C h i n a【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T oe x p l o r e t h em e c h a n i s mo f v e n t i l a t o r i n d u c e d l u n g i n j u r y(V I L I)a n d t op r o v i d e s o m ee v i d e n c e sf o r t h ep r o p h y l a x i sa n dt h et r e a t m e n to fV I L I M e t h o d sT h em i c ew e r ed i v i d e di n t ot h r e eg r o u p s:s p o n t a n e o u si n s p i r a t i o n(g r o u pS),h i g ht i d a l v o l u m ev e n t i l a t i o n(g r o u pV),a n dh i g ht i d a lv o l u m ev e n t i l a t i o nw i t hs t r e t c h a c t i v a t e dc h a n n e l s(S A C)b l o c k e r(g r o u pVB)w i t he a c hg r o u p m i c e L u n gm o r p h o l o g ya n df u n c t i o n,m i R NA ae x p r e s s i o n,N F BP e x p r e s s i o na n d i n f l a mm a t o r yf a c t o r s(TN F ,I L )c o n c e n t r a t i o ni nt h es e r u ma n dl u n gw e r ee v a l u a t e di nt h es e t t i n go fm e c h a n i c a lv e n t i l a t i o n R e s u l t s S e r i o u s l e s i o n i nt h e l u n gw i t ha no b v i o u s l yi m p a i r e do x y g e n a t i o nw e r eo b s e r v e di nt h em i c et h a tr e c e i v e dh i g ht i d a l v o l u m ev e n t i l a t i o n T h ee x p r e s s i o no fm i R NA as i g n i f i c a n t l yr e d u c e d,a n dt h eN F BP i n c r e a s e do nt h ec o n t r a r y S e r u ma n dp u l m o n a r y i n f l a mm a t o r y l e v e l e l e v a t e da f t e r v e n t i l a t i o n C o m p a r e dw i t hg r o u pV,m o r p h o l o g ya b n o r m i t ya n do x y g e n a t i o nd y s f u n c t i o nr e l i e v e d i n t h em i c e i n t h eg r o u pVB H i g h e rm i R NA a l e v e l,l o w e rN F BP e x p r e s s i o na n d l o w e rl o c a l a n ds y s t e m i c i n f l a mm a t o r y l e v e l sw e r eo b s e r v e d i nt h em i c eo fg r o u pVB C o n c l u s i o n S A Cc o n t r i b u t e s t oV I L I t h r o u g ht h em i R NA a/N F Bp a s s w a ya n d i se x p e c t e dt ob ean o v e l t a r g e t f o r t h ep r o p h y l a x i sa n dt h e t r e a t m e n to fV I L I【K e yw o r d s】s t r e t c h a c t i v a t e dc h a n n e l s;v e n t i l a t o r i n d u c e d l u n g i n j u r y;i n f l a mm a t i o n机械通气导致的肺泡组织的周期性非生理性牵张是造成呼吸机相关性肺损伤(v e n t i l a t o r i n d u c e dl u n gi n j u r y,V I L I)发生的重要机制.近年研究发现,肺组织炎症因子的大量合成、释放和炎性细胞的广泛激活是机械通气后肺泡气血屏障破坏和通透性增加的重要原因.本研究旨在通过大鼠机械通气模型基础上的在体实验,寻找介导V I L I的分子机制,为防治V I L I提供新的靶点.材料与方法 材料:)实验动物:健康成年雄性S p r a g u e D a w l e y(S D)大鼠 只由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供 许可 证 号:S C X K(沪),体 质 量()g.大鼠饲养在恒定温度()控制的环境下,每 h明、暗交替循环,自由饮水和饮食.所有的动物实验均遵照国家实验动物饲养和使用指南.将大鼠随机分为组,以自主呼吸大鼠为对照组(S组),大潮气量机械通气大鼠为实验组(V组),以牵张离子通道(s t r e t c h a c t i v a t e dc h a n n e l s,S A C)阻滞剂大鼠作为干预措施组(VB组),每组各 只,再根据通气时间,各分出h和 h的个亚组.)主 要 材 料 和 仪 器:高 速 离 心 机(H i m a c C R G ,H i t a c h i公司);E L X 酶标仪(B i o t e k牌,Am e r s h a mB i o s c i e n c e公 司);K c j u n i o r(G e n e公 司);超 低 温 冰 箱(T h e r m o 系 列,E l e c t r o n公 司);小 动 物 呼 吸 机(V ,上海玉研科学仪器有限公司);荧光定量扩增仪/P C R仪 S L AN P,企 晟(上 海)医 疗 器 械 有 限 公 司;鼠T N F E L I S A试剂盒(武汉博士德生物技术有限公司);鼠I L E L I S A试剂盒(上海拜力生物科技有限公司);三氯化钆(S i g m a A l d r i c h公司);抗鼠N F BP 抗体(上海邦景实业有限公司).福建医药杂志 年月第 卷第期F u j i a nM e dJ,J u n e ,V o l ,N o 方法:大潮气量机械通气模型建立:所有实验大鼠均于术前 m i n肌注阿托品(m g/g),均采用 水合氯醛(m L/g)腹腔内注射麻醉,术中根据麻醉深度追加水合氯醛.尾静脉置管以备术中给药用.静脉套管针穿刺法行气管插管,连接小动物呼吸机(容量控制模式,呼吸频率为 次/m i n,吸呼比,吸入氧浓度 ,潮气量 m L/g).颈总动脉置管,以备抽取动脉血气及留取血清标本.机械通气后若见大鼠胸廓明显起伏,气管穿刺处喷洒生理盐水未见明显气泡溢出,则代表建模成功.干预方法:)S组:气管插管后保留自主呼吸,未给予任何药物,分别于h和 h后各有只大鼠通过放血法处死,并留取肺组织、肺泡灌洗液和血标本.)V组:气管插管后机械通气,未给予任何药物,分别于h和 h后各有只大鼠通过放血法处死,并留取肺组织、肺泡灌洗液和血标本.)VB组:实验前h,经尾静脉注射牵张离子通道(S A C)阻滞剂 M/k g的三氯化钆,即血药浓度为 M,大 鼠 血 容 量 毫 升 数 按 体 质 量(k g)计算,分别于h和 h后各有只大鼠通过放血法处死,并留取肺组织、肺泡灌洗液和血标本.肺损伤情况检测:通过肉眼观察、苏木精伊红染色(HE染色)切片观察肺组织病理改变;通过测定氧合指数(o x y g e n a t i o n i n d e x,O I)、动 脉血 二 氧化 碳分 压(P a C O)评估肺氧合和肺泡通气功能;通过测定肺组织湿/干重值(w e t/d r yr a t i o,W/Dr a t i o)评估肺水肿情况.分子生物学检测:按说明书步骤行E L I S A法检测血清 和 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液(b r o n c h o a l v e o l a rl a v a g ef l u i d,B A L F)中肿瘤坏死因子(T N F )、白介素(I L )浓度;实时定量聚合酶链反应法(q u a n t i t a t i v er e a l t i m ep o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n,R T q P C R)检测m i R NA a在肺组织的表 达 水 平(m i R NA上 游 引 物 G G G T G A GAA C T G MT T C C A ,下 游 引 物 C A G T G C G T G T C G T G GA G T ;GA P DH mR NA上 游 引 物 T G GA G T C T A C T G G C G T C T T C ,下 游 引 物 T T C A C A C C C A T C A C AAA C A T G ),检测结果以 C T表示;免疫组织化学法检测肺组织核因子 BP (N F BP )表达水平.统计学分析:采用S P S S 统计软件进行分析.计量资料采用描述性分析法、单因素方差分析(ANOVA)和T u k e y多重比较法;计数资料采用卡方检验法或F i s h e r精确概率法.P 为差异有统计学意义.结果 形态学检测:)肉眼:S组大鼠肺叶大致正常.V组h后大鼠可见肺叶稍肿胀、弹性尚可,肺叶表面偶见出血点,支气管口无液体溢出;h后大鼠病变与h后类似,但程度更重,肺叶弹性较差,支气管口少量淡红色液体渗出.VB组h、h后大鼠上述病理改变有所减轻,损伤程度介于V组和S组之间.)光镜:S组肺泡壁和肺间质毛细血管结构均完整,肺泡腔内均未见明显的细胞和液体渗出,肺间质内仅见少数炎症细胞浸润.V组h后切片可见部分肺泡结构破坏、相互融合,残存的肺泡腔内可见中等量炎性细胞及液体渗出,肺间质稍有肿胀,伴炎症细胞浸润;上述病理改变在 h后可见明显加重.VB组切片中的肺组织病理改变相比V组明显减轻,部分肺泡结构仍完整,仅可见轻中度的肺间质水肿及中等量炎症细胞浸润;VB组大鼠肺组织病变类型类似于V组,但病变程度介于S组和V组之间.见图.图机械通气大鼠肺组织H E染色表现()肺氧合指数与动脉血二氧化碳分压比较:组大鼠机械通气前的O I值、P a C O比较,差异无统计学意义(P ).ANOVA分析显示,机械通气h、h后,组间的O I值 差 异 有 统 计 学 意 义(F ,P );T u k e y多重比较结果显示,机械通气h后,VB组O I值明显高于V组(q ,P ),上述两组O I值在机械通气 h后比较,差异仍有统计学意义(q ,P ).无论是否机械通气,组间的P a C O值比较,差异均无统计学意义(F ,P ).见图、.图机械通气前后O I值改变图机械通气前后P a C O值改变 肺水肿评估:机械通气后,组W/D值比较,差异有统计学意义(F ,P );T u k e y多重比较显示,机械通气h后,VB组和V组W/D值比较,差异无统计学意义(q ,P ),机械通气 h后,福建医药杂志 年月第 卷第期F u j i a nM e dJ,J u n ,V o l ,N o VB组 大 鼠W/D值 明 显 低 于V组(q ,P ).见图.图机械通气后W/D改变 肺部和全身炎症反应E L I S A检测:)T N F 水平:血清中,组T N F 浓度比较,差异有统计学意义(F ,P );T u k e y多重比较,机械通气后h和 h,VB组T N F 浓度均明显低于V组()p g/m Lv s()p g/m L,q ,P ;()p g/m Lv s()p g/m L,q ,P ),图 a.B A L F中,组T N F 浓度比较,差异有统计学意义(F ,P );T u k e y多重比较,机械通气后h和 h,VB组大鼠T N F 浓度均明显低于V组()p g/m Lv s()p g/m L,q ,P ;()p g/m Lv s()p g/m L,q ,P ),图 b.)I L 水平:血清中,组I L 浓度比较,差异有统计学意义(F ,P );T u k e y多重比较,机械通气后h和 h,VB组I L 浓度均明显低于V组()p g/m Lv s()p g/m L,q ,P ;()p g/m Lv s()p g/m L,q ,P ),图 c.B A L F中,组I L 浓度比较,差异有统计学意义(F ,P );T u k e y多重比较,机械通气后h和 h,VB组I L 浓度均明显低于V组()p g/m Lv s()p g/m L,q ,P ;()p g/m Lv s()p g/m L,q ,P ),图 d.图机械通气后血清及B A L F中炎症因子浓度改变 肺 组 织R T q P C R检 测:组 机 械 通 气 后 肺 组 织m i R NA a表 达 水 平 比 较,差 异 无 统 计 学 意 义(F ,P ).T u k e y多重比较,机械通气后h,V组和VB组肺组织m i R NA a表达水平比较,差异无统计 学 意 义(v s ,q ,P );机械通气后 h,V组m i R NA a表达水平明显低于VB组(v s ,q ,P ).见图.免疫组织化学染色:N F BP 定位于细胞核,主要表达于肺间质炎症细胞和肺泡内渗出物中.染色强度方面,S组最低,机械通气 h后无明显增强;V组大鼠染色强度最高,且V组与VB组通气h后比较,差异有统计学意福建医药杂志 年月第 卷第期F u j i a nM e dJ,J u n e ,V o l ,N o 图机械通气后肺组织m i R N A a表达变化义(v s ,q ,P ),V组与VB组通气 h后比较,差异有统计学意义(v s ,q ,P );VB组染色强度介于S组和V组之间.见图.图机械通气后肺组织N F BP 表达改变()讨论V I L I的发生机制主要为气压伤、容积伤、萎陷伤和生物伤,共同造成肺组织弥漫性气血屏障的破坏和通透性增高.围术 期 保 护 性 肺 通 气 策 略 以 低 潮 气 量、个 性 化P E E P、手法肺复张和容许性高碳酸血症为基本特征.在患者围术期治疗全过程中应用该通气策略,有助于预防V I L I.此外,对于目标导向液体输注、心功能维护、践行E R A S理念以及控制感染也至关重要,有助于改善术后短期的肺功能,有利于缩短机械通气时长和I C U住院时间,降低住院费用,但对于远期预后的益处目前尚缺乏循证学证据.因此,从分子水平阐述V I L I的发生机制,对于防止V I L I具有重要意义.本研究中机械通气h的大鼠肺组织在微观下即可见上述改变,且随着机械通气时间的延长,病变呈逐渐加重的趋势.机械通气导致的肺泡组织的周期性非生理性牵张是其重要机制.S A C是对机械刺激敏感的一类离子通道家族的总称,广泛存在于心肌、神经组织、肾脏、卵巢、子宫、胃肠道、白细胞、大血管以及肺组织等各类型组织细胞膜表面,参与细胞膜电位和细胞体积的维持,基因表达调控,细胞分化和收缩,在介导机械刺激与生物信号的转化过程中发挥重要作用.三氯化钆是S A C的非特异性阻断剂.研究发现,使用S A C阻断剂可明显减轻大鼠机械通气后的肺部和全身炎症 反应,肺泡 损 伤程 度也 明显 减 轻.这 表明,S A C可能参 与 了机 械牵 张诱 发 的肺 部炎 症 过 程,并 造 成V I L I发生.S A C的非特异性阻断剂主要有三氯化钆、链霉素以及蜘蛛毒液毒素G s MT x .三氯化钆阻断S A C的效果呈剂量依赖性,一般有效剂量浓度为 M.课题组成员既往研究发现机械牵张可诱导大鼠腹主动脉中层血管平滑肌细胞通过开 放S A C并 激 活 细 胞 内N F B,进 而 上 调 细 胞 内MMP 表达,而上述有效剂量内的三氯化钆即可取得良好的阻断效果.对实验剂量的把握已逐渐成熟,大鼠的意外死亡率可控制在以下,完全可以满足目前的实验设计.机械牵张可在无炎症反应的基础上,通过S A C/N F B通路直接促进C 反应蛋白的生成.S A C在接受机械刺激后还可通过增加细胞内钙离子浓度,诱导活性氧的生成,并激活N F B,最终上调成纤维细胞C OX 的表达水平.本研究发现,大鼠在机械通气后肺部N F BP 表达明显增加,T N F 和I L 等炎症因子水平也明显上调,且这种现象又随着S A C被阻断而呈现消退的迹象.考虑机械牵张可能通过激活S A C,上调N F B促进肺部发生炎症反应.然而,S A C通过什么途径激活N F B通路继而诱发炎症反应,目前尚未有定论.m i R NA s是一种由 个核苷酸组成的内源性非编码R NA分子,在细胞分化、生物发育及疾病发生发展过程中发挥着重要作用.人体内大约含有 种m i R NA s,约有/的基因表达受其调控.m i R NA a可通过N F B依赖的I R AK 和T R A F 途径,抑制肺组织在机械压力刺激下I L 、I L 、T N F 等炎症因子释放.m i R NA a还可在转录后水平抑制I R AK 和T R A F 的表达,从而限制了N F B的 致 炎 症 能 力(负 调 控).此 外,m i R NA a还可直接抑制I L 、I L 和T N F 等炎症因子的表达(均为N F B的目的基因),从而进一步发挥抑制炎症反应的作用.基于上述理论依据,在对比了机械牵张大鼠肺组织中m i R NA a的 表 达情 况后 发 现,发 生V I L I的 肺 组 织m i R NA a表达明显下调,且同样可被S A C阻断剂所抑制,并伴随着肺损伤的减轻.这说明,m i R NA a有可能是介导S A C和炎症反应的桥梁,发挥机械通气背景下的肺部炎症调控作用.综上所述,S A C可能参与机械牵张诱发的肺部和全身炎症,造成V I L I的发生,这一过程通过上调N F B来实现,S A C可能 通 过m i R NA a/N F B途径 介 导V I L I发生,有望成为防治V I L I的新靶点.参考文献H i g u i t a C a s t r o N,S h u k l aV C,M i h a iC,e ta l S i m v a s t a t i nt r e a t m e n tm o d u l a t e sm e c h a n i c a l l y i n d u c e d i n j u r ya n d i n f l a mm a t i o n i nr e s p i r a t o r ye p i t h e l i a l c e l l sJ A n n a l so fb i o m e d i c a l e n g i n e e r i n g,():S u t h e r a s a nY,D A n t i n iD,P e l o s iP A d v a n c e s i nv e n t i l a t o r a s s o c i a t e dl u n gi n j u r y:p r e v e n t i o ni st h et a r g e tJE x p e r t福建医药杂志 年月第 卷第期F u j i a nM e dJ,J u n ,V o l ,N o r e v i e wo f r e s p i r a t o r ym e d i c i n e,():G r y g o r c z y kR,F u r u y aK,S o k a b eM I m a g i n ga n dc h a r a c t e r i z a t i o no fs t r e t c h i n d u c e d AT Pr e l e a s ef r o m a l v e o l a rA c e l l sJ T h eJ o u r n a l o fp h y s i o l o g y,():S c h w i n g s h a c k lA T h e r o l e o f s t r e t c h a c t i v a t e d i o nc h a n n e l s i na c u t er e s p i r a t o r yd i s t r e s ss y n d r o m e:f i n a l l yan e wt a r g e t?JAm e r i c a nj o u r n a lo fp h y s i o l o g y L u n gc e l l u l a ra n d m o l e c u l a rp h y s i o l o g y,():A d d i n gLC,B a n n e n b e r gG L,G u s t a f s s o nLE B a s i ce x p e r i m e n t a l s t u d i e sa n dc l i n i c a la s p e c t so fg a d o l i n i u ms a l t sa n dc h e l a t e sJ C a r d i o v a s c u l a rd r u gr e v i e w s,():Z h o uH,L iY,H u a n gG,e t a l I n t e r l e u k i na u g m e n t sm e c h a n i c a l s t r a i n i n d u c e dC r e a c t i v ep r o t e i ns y n t h e s i sv i at h es t r e t c h a c t i v a t e dc h a n n e l n u c l e a rf a c t o r Bs i g n a lp a t h w a yJ H e a r t(B r i t i s hC a r d i a cS o c i e t y),():Amm aH,N a r u s eK,I s h i g u r oN,e t a l I n v o l v e m e n t o f r e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s i nc y c l i c s t r e t c h i n d u c e dN F k a p p a Ba c t i v a t i o n i nh u m a nf i b r o b l a s tc e l l sJ B r i t i s hj o u r n a lo fp h a r m a c o l o g y,():L e w i sBP,B u r g eCB,B a r t e lDP C o n s e r v e ds e e dp a i r i n g,o f t e nf l a n k e db ya d e n o s i n e s,i n d i c a t e s t h a t t h o u s a n d so fh u m a ng e n e sa r em i c r o R NAt a r g e t sJ C e l l,():H u a n gY,C r a w f o r dM,H i g u i t a C a s t r oN,e t a l M i R a r e g u l a t e sm e c h a n o t r a n s d u c t i o na n dp r e s s u r e i n d u c e di n f l a mm a t i o ni ns m a l la i r w a ye p i t h e l i u mJ F A S E Bj o u r n a l:o f f i c i a lp u b l i c a t i o no f t h eF e d e r a t i o no fAm e r i c a nS o c i e t i e s f o rE x p e r i m e n t a lB i o l o g y,():L iL,C h e nXP,L iYJ M i c r o R NA aa n dh u m a nd i s e a s eJ S c a n d i n a v i a nj o u r n a lo fi mm u n o l o g y,():基础研究罗格列酮对舒尼替尼耐药肾癌细胞血管生成的影响福建医科大学省立临床医学院 福建省立医院泌尿外科(福州 )杨风光许清江魏永宝彭俊铭张弛陈平舟阮君山基金项目:福建省自然科学基金面上项目(J )福建省立医院中医药分子生物学实验室,通信作者,E m a i l:y a n g f e n g g u a n g f j m u e d u c n【摘要】目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(P P A R)配体罗格列酮(R G)对舒尼替尼(S U)耐药的肾癌细胞血管生成的影响及其作用机制.方法通过浓度梯度培养建立S U耐药的肾癌细胞株(O/S R和A /S R),构建并转染短发夹P P A R(s h P P A R)慢病毒载体静默P P A R 的表达.细胞生长曲线观察R G对耐药肾癌细胞生长的影响.人脐静脉血管内皮细胞(HUV E C)小管形成实验观察R G对血管生成的作用,以及与P P A R 表达的关系.W e s t e r nb l o t检测血管内皮生长因子(V E G F)和蛋白激酶B/信号传导转录激活因子(AK T/S T A T)通路蛋白表达的变化.结果R G抑制S U耐药肾癌细胞的生长.m o l/LR G抑制 O/S R和A /S R细胞生成HUV E C小管的能力,W e s t e r nb l o t结果显示V E G F、p AK T、AK T、p S T A T、S TA T 的表达降低,静 默P P A R 可以 逆转R G的抑 制作 用.结论R G通 过激 活P P A R 抑制S U耐药肾癌细胞的生长和血管生成,P P A R 配体有可能成为耐药肾癌细胞的治疗药物.【关键词】肾细胞癌;过氧化物酶体增殖物激活受体;血管生成;舒尼替尼耐药【中图分类号】R 【文献标识码】A【文章编号】()E f f e c t o fp e r o x i s o m eo na n g i o g e n e s i si ns u n i t i n i b r e s i s t a n tr e n a lc a r c i n o m ac e l l s Y ANG F e n g g u a n g,XUQ i n g j i a n g,WE IY o n g b a o,P ENGJ u n m i n g,ZHANGC h i,CHEN P i n g z h o u,R U AN J u n s h a nD e p a r t m e n to fU r o l o g yS u r g e r y,F u j i a n P r o v i n c i a l H o s p i t a l,P r o v i n c i a l C l i n i c a l M e d i c a l C o l l e g eo f F u j i a n M e d i c a l U n i v e r s i t y,F u z h o u,F u j i a n ,C h i n a【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t o fP P A R l i g a n dr o s i g l i t a z o n e(R G)o na n g i o g e n e s i so f s u n i t i n i b r e s i s t a n tr e n a l c a r c i n o m a c e l l s a n de x p l o r e i t sm e c h a n i s m M e t h o d s R e n a l c a n c e r c e l l l i n e s Oa n dA w e r e c u l t u r e d i nc o n c e n t r a t i o ng r a d i e n t s u n i t i n i bt oc o n s t r u c td r u gr e s i s t a n tc e l l s S u n i t i n i br e s i s t a n tc e l l s O/S Ra n d A /S R w e r et r a n s f e c t e d w i t hs h P P A R l e n t i v i r u sv e c t o r t os i l e n c eP P A R e x p r e s s i o n T h e e f f e c t o f r o s i g l i t a z o n eo n t h eg r o w t ho f d r u g r e s i s t a n t c e l l sw a sd e t e c t e db yc e l l g r o w t hc u r v e T h ea b i l i t yo f a n g i o g e n e s i s i n d u c e db yd r u g r e s i s t a n t r e n a l c a r c i n o m ac e l l s t r e a t e dw i t hr o s i g l i t a z o n ew e r eo b s e r v e db yHUV E Ct u b u l e f o r m a t i o na s s a y T h e e x p r e s s i o n l e v e l so f p a t h w a yp r o t e i n sw e r ed e t e c t e db yW e s t e r nb l o t R e s u l t s R o s i g l i t a z o n e i n h i b i t e d t h eg r o w t ho f s u n i t i n i br e s i s t a n t r e n a l c a r c i n o m a c e l l s m o l/Lr o s i g l i t a z o n e i n h i b i t e dt h e a b i l i t yo f O/S Ra n dA /S Rc e l l st og e n e r a t eHUV E Ct u b u l e s W e s t e r nb l o tr e s u l t ss h o w e dt h a t t h ee x p r e s s i o n so fV E G F,p AK T,AK T,p S T A T a n dS TA T w e r ed e c r e a s e d S i l e n tP P A R r e v e r s e dt h e i n h i b i t o r ye f f e c to fr o s i g l i t a z o n e C o n c l u s i o nR o s i g l i t a z o n e i n h i b i t sc e l lg r o w t ha n da n g i o g e n e s i si ns u n i t i n i b r e s i s t a n tr e n a lc a r c i n o m ac e l l st h r o u g ha c t i v a t i n gP P A R,a n d福建医药杂志 年月第 卷