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中中华华人人民民共共和和?家家标标准准GB 5413.362010 食品安全?家标准 婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定 National food safety standard Determination of trans fatty acids in foods for infants and young children,milk and milk products 中中 华华 人人 民民 共共 和和?卫卫 生生 部部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施GB 5413.362010 I 前 言 本标准附录 A 为资料性附录?本标准系首次发布?GB 5413.362010 1 食品安全?家标准 婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定 1 范围 本标准规定了婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定方法?本标准适用于婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定?2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的?用是必?可少的?凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准?凡是?注日期的引用文件，?最新版本?包括所有的修改单?适用于本标准?3 原理 试样中的脂肪用溶剂提取?提取物在碱性条件?甲醇反?生成脂肪酸甲酯，用配有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪分离顺式脂肪酸甲酯和反式脂肪酸甲酯，外标法定量?4 试剂和材料 除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一?水?4.1 石?醚?程 30 60?4.2 乙醚?C4H10O?4.3 乙醇?C2H6O?体?分数为 95%?4.4?己烷?C6H14?色谱纯?4.5?水?NH3H2O?25%28%?4.6 氢?化钾?KOH?4.7 甲醇?CH4O?4.8 淀粉酶?活力单?1.5 U/mg，根据活力单?大小调整用量?4.9 无水硫酸?Na2SO4)?4.10 氢?化钾-甲醇溶液?4 mol/L?取 26.4 g 氢?化钾，溶于?80 mL 甲醇中?冷?至室温，用甲醇定容至 100 mL，加入?5g 无水硫酸?4.9?，充分搅拌后过滤，保留滤液?4.11 脂肪酸甲酯标准品?十八酸甲酯?C18:0?反-9-十八碳一烯酸甲酯?C18:1-9t?顺-9-十八碳一烯酸甲酯?C18:1-9c?反-9，12-十八碳二烯酸甲酯?C18:2-9t，12t?顺-9，12-十八碳二烯酸甲酯?C18:2-9c，12c?，放入冰箱在-15 以?保?GB 5413.362010 2 4.12 反式脂肪酸甲酯标准贮备液?浓度分别为 10.0 mg/mL?取 500 mg?精确到 0.1 mg?反-9-十八碳一烯酸甲酯标准品和反-9，12-十八碳二烯酸甲酯标准品，分别用?己烷溶解并定容至 50.0 mL?放入冰箱在-15 以?保?4.13 反式脂肪酸甲酯标准中间液?浓度分别为 1.0 mg/mL?分别吸取两种反式脂肪酸甲酯标准储备液?4.12?10.0 mL 入同一 100 mL 容量瓶中并用?己烷?4.4?定容?临用前配制?亦作为标准曲线最高浓度?4.14 反式脂肪酸甲酯标准工作液?临用前配制?分别吸取反式脂肪酸甲酯标准中间液?4.13?，0?2.0?4.0?6.0?8.0?10.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，用?己烷定容，?浓度?为 0?0.2?0.4?0.6?0.8?1.0 mg/mL 的标准工作液?4.15 脂肪酸甲酯标准混合液?将脂肪酸甲酯标准品?4.11?，用?己烷配制成脂肪酸甲酯标准混合溶液，?中每种成分的浓度?为 0.05 mg/mL 至 0.5 mg/mL?用于进行顺反脂肪酸甲酯分离程度及定性的鉴定?4.16?果红溶液?取 1 g?果红溶解稀释至 100 mL?5 仪器和设备 5.1 气相色谱仪，带氢火焰离子化检测器?5.2 旋转蒸发器?5.3 恒温水浴?40 80?5.4 涡旋振荡器?5.5 离心机?转速4000 转/分?5.6 毛氏抽脂瓶?5.7 毛氏抽脂瓶摇混器?5.8 脂肪收集瓶?圆?烧瓶，?旋转蒸发仪配套?5.9 天平?感量为 0.1 mg?6 分析步骤 6.1 试样处理 6.1.1 含淀粉的试样?取混合均匀的固体试样?1.5 g，液体试样?5 g?精确到 0.1 mg?于毛氏抽脂瓶中，加入?0.1 g 淀粉酶?酶活力 1.5 U/mg?，混合均匀后，加入 8 mL10 mL 45 2 的水，摇匀?盖?瓶塞置于 55 2 水浴?5.3?中 2 h，每隔 10min 摇混一次?加入两滴?0.1 mol/L 的碘溶液，检验淀粉是否水解完全?若无蓝色出现，?水解完全，否?将毛氏抽脂瓶重新置于水浴中，直至蓝色消失，取出冷?至室温?6.1.2?含淀粉的试样?取混合均匀的固体试样?1.5 g，液体试样?10g?精确到 0.1 mg?于毛氏抽脂瓶?5.6?中，加入 10 mL 45 2 的水，将试样洗入毛氏抽脂瓶?5.6?的小球中，充分混合，直到试样完全散开，冷?至室温?GB 5413.362010 3 6.1.3 脂肪的提取?向毛氏抽脂瓶?5.6?中加入 3.0 mL?水?4.5?，混匀?置于 60 2 水浴?5.3?中 15 min20 min，冷?至室温?加入 10 mL 乙醇?4.3?和 1 滴?果红溶液?4.16?，混匀?再加入25mL 乙醚?4.2?，塞?软木塞，放到毛氏抽脂瓶?5.6?摇混器?震荡 1 min，也可采用手动振摇方式，再加入 25mL 石?醚?4.1?，震荡 1 min，?于 4000 转/分?离心分层?倾出?清液于脂肪收集瓶?5.8?中，为第一次提取?在剩余试样液中再加入 5 mL 乙醇，25 mL 乙醚，25 mL 石?醚按?述操作?骤进行第二次提取?用离心机?5.5?离心分层后倾出?清液?第一次的?清液合并?将脂肪收集瓶?5.8?置于旋转蒸发器?5.2?，在 60 2 通入氮气条件?旋转蒸发除去溶剂，保留残渣，?为脂肪?6.1.4 脂肪酸甲酯的制备?将?述脂肪用?己烷?4.4?溶解并定容至 10.0 mL，取出 3.0 mL 于 10 mL?塞试管中，加入 0.3 mL 氢?化钾-甲醇溶液?4.10?盖紧瓶盖，涡旋振荡器?5.4?剧烈振摇 2 min，4000 转/分?离心 5 min 后将?清液转入气相色谱试样瓶中，?为试样测定液?6.2 测定 6.2.1 参考色谱条件 色谱柱?填料为氰丙基芳基聚硅?烷的毛细管柱，柱长100 m，内径0.25 mm，膜厚0.2 m?或同等性能的色谱柱?进样口温度?250?载气?2?检测器温度?300?分流比?10?1?进样量?1.0 L?程序升温?如表 1 所示?表 1 程序升温条件 升温速率?/min?温度?保持时间?min?120 0 10 175 10 5 210 5 5 230 5 6.2.2 标准曲线的制备 在仪器最佳工作条件?，对系列标准工作液?4.14?分别进样，以峰面?为纵坐标，标准工作液浓度为横坐标绘制标准工作曲线?6.2.3 反式脂肪酸甲酯色谱峰的鉴别 对脂肪酸甲酯标准混合溶液?4.15?进样，进行顺反脂肪酸甲酯分离程度及定性的鉴定?反十八碳一烯酸甲酯和反十八碳二烯酸甲酯色谱峰的?置参见附录A中的?A.1?6.2.4 试样液的测定 将试样测定液注入气相色谱仪，试样测定液中反式脂肪酸甲酯峰?置参见附录A?A.1?分别测定区域C18?1t和区域C18?2t的峰面?，查标准曲线得到试样测定液中反十八碳一烯酸甲酯和反十八碳二烯酸甲酯的质量浓度?7 分析结果的表述 试样中反十八碳一烯酸和反十八碳二烯酸含量分别计为 X1和 X2，按式?1?分别计算?100)21(=biaiiMmMVcX或?1?GB 5413.362010 4 式中?X?1或2?试样中反十八碳一烯酸或反十八碳二烯酸含量，单?为毫克每百克?mg/100g?V 试样的定容体?，单?毫升?mL?m 试样质量，单?为克?g?ci试样测定液中反十八碳一烯酸甲酯或反十八碳二烯酸甲酯的质量浓度，单?为毫克每毫升(mg/mL)?Mai 反十八碳一烯酸或反十八碳二烯酸的分子量?Mbi 反十八碳一烯酸甲酯或反十八碳二烯酸甲酯的分子量?试样中反式脂肪酸的总含量 X，按式?2?计算?21XXX+=?2?式中?X 反式脂肪酸的总含量，单?为毫克每百克?mg/100g?X1 试样中反十八碳一烯酸的含量，单?为毫克每百克?mg/100g?X2 试样中反十八碳二烯酸的含量，单?为毫克每百克?mg/100g?以重复性条件?获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留?有效数?8 精密度 在重复性条件?获得两次独立测定结果的绝对差值?得超过算术平均值的 10%?9 其他 本标准检出限为?反式脂肪酸总含量 30 mg/kg?GB 5413.362010 5 附录 A?资料性附录?反式脂肪酸混合标准溶液气相色谱?A.1 反式脂肪酸混合标准溶液气相色谱?反式脂肪酸混合标准溶液气相色谱?见?A.1?C18:0C18:1 9tC18:1 9cC18:2 9t,12tC18:2 9c,12cC18:1 tC18:2 t?A.1 反式脂肪酸混合标准溶液气相色谱?