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ICS65.020.01CCS B 38DB61陕西省地方标准DB 61/T 15172021灵芝固体菌种生产技术规范Technical specification for production of Ganoderma lucidum solid spawn2021-12-17 发布2022-01-17 实施陕西省市场监督管理局发 布DB61/T 1517-2021I目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14生产条件.25生产工艺.26菌种生产档案.4附录 A（规范性）常用培养基及其配方.5附录 B（规范性）常用原种和栽培种培养基及其配方.6参考文献.7DB61/T 1517-2021II前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由陕西省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：陕西省微生物研究所、柞水县科技开发中心、宁强县真菌研究所、陕西中科菌业科技有限公司。本文件主要起草人：李峻志、戴璐、霍文严、乔婷、祁鹏、张黎光、刘愚、路鹏鹏、贺雪莲、张怀荣、陆博、李安利、李坤先、李小虎、赵亚琳。本文件由陕西省微生物研究所负责解释。本文件首次发布。联系信息如下：单位：陕西省微生物研究所电话：[phone]地址：陕西省西安市西影路76号邮编：710043DB61/T 1517-20211灵芝固体菌种生产技术规范1范围本文件规定了灵芝固体菌种生产的术语和定义、生产条件、生产工艺、菌种生产档案的要求。本文件适用于灵芝（Ganoderma lucidum）固体菌种的生产。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 12728食用菌术语NY/T 528食用菌菌种生产技术规程NY/T 1742食用菌菌种通用技术要求3术语和定义GB/T 12728 界定的术语和定义适用于本文件。3.1母种stock culture经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，也称一级种、试管种。来源：GB/T 127282006，2.5.73.2原种pre-culture spawn由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称二级种。来源：GB/T 127282006，2.5.83.3栽培种spawn由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。也称三级种。来源：GB/T 127282006，2.5.93.4固体菌种solid spawn生长在固体培养料上的菌种。DB61/T 1517-20212来源：GB/T 127282006，2.5.314生产条件4.1技术人员应按照食用菌菌种管理办法的规定配备生产技术人员和检验人员。4.2生产环境要求应符合NY/T 528中4.2的规定。4.3厂房设置和布局应符合NY/T 528中4.3的规定。4.4基本设备应配备称量用具、蒸煮设备、母种培养基分装设备、拌料机、装袋机、高压灭菌和常压灭菌设备、净化工作台或接种箱、接种工具、恒温培养箱或培养室、培养架、烘箱、除湿设备、备用电源（发电机）、冰箱或冷库、显微镜等。高压灭菌设备等压力容器应符合特种设备使用管理规则和固定式压力容器安全技术监察规程的规定。4.5种源应符合NY/T 528中4.5的规定。5生产工艺5.1菌种分类固体菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）。5.2母种生产5.2.1容器应符合NY/T 528中4.7.1.2的规定。5.2.2备料见附录A。5.2.3培养基配料、分装选无青皮、未发芽的新鲜马铃薯洗净、去皮，称取200 g切成薄片或小块。加水1200 mL煮沸20 min30 min，煮至熟而不烂，用先预湿的4层纱布过滤。滤液中加入20 g葡萄糖搅拌溶化，再加入20g琼脂，边煮边搅拌至琼脂全部溶化。加水定容至1000 mL。分装量为试管长度的1/51/4，管口保持干净，最后塞上试管塞。将分装好的试管直立放入内锅，用牛皮纸或报纸包住试管塞。5.2.4高压灭菌DB61/T 1517-20213121 灭菌30 min。5.2.5冷却灭菌结束，自然降压至零。5.2.6斜面培养基制备降温至50 60，将试管的一端斜放在1 cm高的木条上摆出斜面，斜面顶端距试管口不少于5cm。斜面摆放完毕应迅速覆盖棉布。5.2.7灭菌效果检查随机抽取母种培养基总数的3%5%，置于28 35 恒温条件培养48 h，无微生物长出，即为灭菌合格。5.2.8接种5.2.8.1接种场地和工具的消毒按照NY/T 528中4.7.7.2和4.7.7.3的规定对接种场地和工具严格消毒。5.2.8.2接种操作应符合NY/T 528中4.7.7的规定。5.2.9培养温度控制在23 26，通风避光培养。5.2.10检验应符合NY/T 1742 中5.2.1的规定。5.3原种、栽培种生产5.3.1容器应符合NY/T 528 中4.7.1.3和4.7.1.4的规定。5.3.2培养基的配制培养基配制见附录B。所用原材料应符合NY/T 528 中4.7.2的规定。5.3.3消毒应符合NY/T 528中4.7.7.2和4.7.7.3的规定。5.3.4接种应符合NY/T 528中4.7.7的规定。5.3.5培养培养温度22 25，空气相对湿度60%70%，通风避光培养。DB61/T 1517-202145.3.6检查第4 d5 d、第7 d9 d、第11 d12 d逐袋（瓶）检查，并及时剔除未萌发、已污染、生长不良等菌袋（瓶）。5.4留样应符合NY/T 528 中4.7.13的规定。6菌种生产档案应按照食用菌菌种管理办法的规定，建立和保存菌种生产档案。DB61/T 1517-20215AA附录A（规范性）常用培养基及其配方A.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）马铃薯200 g（用浸出汁），葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1000 mL。A.2CPDA培养基（综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基）马铃薯200 g（用浸出汁），葡萄糖20 g，琼脂20 g，磷酸二氢钾2 g，硫酸镁0.5 g，水1000 mL。A.3加富马铃薯葡萄糖琼脂培养基马铃薯200 g（用浸出汁），葡萄糖20 g，磷酸二氢钾1 g，硫酸镁0.5 g，蛋白胨5 g，琼脂20 g，VB110mg，水1000mL。A.4马铃薯麸皮葡萄糖琼脂培养基马铃薯200 g（用浸出汁），麸皮50 g（用浸出汁），葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1000 mL。DB61/T 1517-20216BB附录B（规范性）常用原种和栽培种培养基及其配方B.1杂木屑棉籽壳培养基杂木屑40，棉籽壳40，麸皮18，石膏1，蔗糖1，料水比1:1.21:1.4。B.2木屑培养基杂木屑78，麸皮20，蔗糖1，石膏1，料水比1:1.21:1.4。B.3木屑培养基杂木屑78，麸皮13，玉米粉7，蔗糖1，石膏1，料水比1:1.21:1.4。B.4棉籽壳培养基棉籽壳88，麸皮10，石膏1，蔗糖1，料水比1:1.21:1.4。B.5木屑米糠培养基杂木屑70，米糠10，麸皮15，蔗糖1，尿素0.2，过磷酸酸钙2，石膏2，料水比1:1.21:1.4。DB61/T 1517-20217参考文献1TSG 08特种设备使用管理规则2TSG 21固定式压力容器安全技术监察规程3食用菌菌种管理办法（中华人民共和国农业部第62号令）_