Ki-67、AE1_AE3...癌组织中的表达及其临床意义_陈允.pdf

浙江创伤外科2023年4月第28卷第4期Zhejiang J Trauma Surg,April 2023,Vol.28,No.4作者单位：312500新昌，浙江省新昌县人民医院结直肠癌（Colorectal cancer，CRC）是一种发生于大肠的常见恶性上皮肿瘤，其高发病率及致死率有逐年上升的趋势1。CRC的发生、发展与多种基因及蛋白表达变化均有联系，是多阶段且复杂的生物学过程，其中Ki-67、上皮细胞标志物广谱细胞角蛋白CK（AE1/AE3）及抑癌基因p53可能均参与了肿瘤细胞的增殖、分化及转移过程。为此，本研究应用免疫组化法检测CRC患者癌组织中Ki-67、AE1/AE3、p53表达，并分析其与临床病理学参数之间的关系，为临床CRC诊断及预后提供理论依据。1资料与方法1.1一般资料收集2021年1月至2022年6月于本院手术治疗的76例CRC患者癌组织标本，选取同病例癌旁组织标本（距肿瘤组织边缘5 cm及常规染色未转移的淋巴结）作为对照。符合以下纳入标准：入院时符合CRC诊断标准2且术后病理确诊为CRC；均于本院行CRC手术治疗；首发、原发且不伴随其他恶性肿瘤；术前未进行放、化疗等干预；自愿参加且无精神类疾病。排除标准：临床资料不完整；伴随其他系统严重疾病等。76例患者中直肠癌（34例）、结肠癌（42例），性别（男/女：48/28），年Ki-67、AE1/AE3、p53 在结直肠癌组织中的表达及其临床意义陈允陈文山【摘要】目的探讨Ki-67、AE1/AE3、p53在结直肠癌（CRC）患者癌组织中的表达、临床意义及相关性研究。方法收集2021年1月至2022年6月于本院手术治疗的76例CRC患者癌组织标本，选取同病例癌旁组织标本作为对照。免疫组化法检测组织标本中Ki-67、AE1/AE3、p53表达水平，分析三种蛋白表达水平与CRC临床病理学参数之间的关系及CRC患者癌组织中三种蛋白表达之间的相关性。结果CRC患者癌组织中Ki-67、AE1/AE3、p53表达阳性率显著高于癌旁组织，存在统计学差异（P0.05）。CRC患者癌组织中Ki-67、AE1/AE3、p53阳性表达与淋巴结是否存在转移、病理分化程度、TNM分期及浸润深度之间存在相关性（P0.05），同时Ki-67和AE1/AE3阳性表达还与肿瘤直径之间存在相关性（P0.05）。CRC患者癌组织中Ki-67表达与AE1/AE3和p53表达呈正相关（rs=0.591、0.334，P0.05）；AE1/AE3表达和p53表达也呈正相关（rs=0.441，P0.05）。结论CRC患者Ki-67、AE1/AE3、p53阳性表达水平与淋巴结是否转移、病理分化程度、TNM分期及浸润深度之间有关，且三者之间具有相关性。随CRC患者病情发展，这些指标出现异常表达，为结直肠癌的临床诊断和治疗提供一定的理论参考。【关键词】结直肠癌；Ki-67蛋白；AE1/AE3蛋白；p53基因；相关性【中图分类号】R735.3【文献标识码】Adoi：10.3969/j.issn.1009-7147.2023.04.001Expression and clinical significance of Ki-67,AE1/AE3 and p53 in colorectal cancer tissuesCHEN Yun,CHEN Wenshan.Peoples Hospital of Xinchang County,Zhejiang 312500,China.【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression,clinical significance and correlation of Ki-67,AE1/AE3 and p53 in cancer tissues ofpatients with colorectal cancer(CRC).Methods76 cancer tissue specimens from CRC patients surgically treated in our anorectal surgery from Jan-uary 2021 to June 2022 were collected,and paracancerous tissue specimens from the same cases were selected as controls.The expression levels ofKi-67,AE1/AE3 and p53 in the tissue specimens were measured by immunohistochemistry,and the relationship between the expression levels of thethree proteins and the clinicopathological parameters of CRC and the correlation between the expression of the three proteins in the cancer tissues ofCRC patients were analyzed.ResultsThe positive expression of Ki-67,AE1/AE3 and p53 in cancer tissues of CRC patients was statistically sig-nificantly higher than that in paraneoplastic tissues(P0.05).Ki-67 expression was positively correlated with AE1/AE3 and p53 expression in cancertissues from CRC patients(rs=0.591,0.334,P0.05).AE1/AE3 expression was also positively correlated with p53 expression(rs=0.441,P0.05),andAE1/AE3 expression was positively correlated with p53 expression(rs=0.441,P0.05).ConclusionThere is a correlation between the positive ex-pression levels of Ki-67,AE1/AE3 and p53 in CRC patients and whether the lymph nodes are metastatic,the degree of pathological differentiation,TNM stage and depth of infiltration,and there is a correlation between the three.The abnormal expressions appeared with the development of CRCpatients,providing some theoretical reference for the clinical diagnosis and treatment of colorectal cancer.【Key words】Colorectal cancer;Ki-67;AE1/AE3;p53;Correlation 基础研究 608浙江创伤外科2023年4月第28卷第4期Zhejiang J Trauma Surg,April 2023,Vol.28,No.4龄3179岁，（54.2612.18）岁，淋巴结转移（有/无：34/42），肿瘤大小（5 cm/5 cm：52/24），病理分化程度（低中/高：64/12），TNM分期3（/：52/24），浸润深度（T12/T34：13/63例）。本研究遵循医院医学伦理学的相关要求，纳入的患者对手术方案均知情同意。1.2试剂与方法所有纳入标本均由4%多聚甲醛（PFA）固定、石蜡包埋、连续切片（3 m左右）、免疫组化（IHC）法染色。免疫组织化学SP法检测所纳入标本中Ki-67、AE1/AE3、p53表达情况，严格参照试剂盒说明书检测步骤进行，阳性对照（已知CRC标本）、阴性对照（PBS代替一抗）。本研究中主要仪器为罗氏全自动免疫组化仪（BENCHMARK XT），主要试剂Ki-67单克隆抗体、DAB显色试剂盒及免疫组化试剂盒均购于罗氏（Roche）公司，AE1/AE3、p53单克隆抗体购于福州迈新生物科技有限公司。1.3结果判断Ki-67、AE1/AE3、p53表达以染色呈棕色为阳性，半定量积分方法进行结果判定：每例标本分别计算每个高倍（400）视野中染色细胞数占总数的比例计分：阳性细胞数依次为0（计0分）、10（计1分）、1050（计2分）、50%（计3分）；根据染色强度计分：依次为无色（计0分）、浅黄色（计1分）、棕黄色（计2分）、深褐色（计3分）。根据细胞比例和染色强度两项积分相乘：02分设为阴性，39分为阳性。1.4观察指标Ki-67、AE1/AE3、p53在CRC患者癌组织和癌旁组织中的表达情况；分析Ki-67、AE1/AE3、p53表达水平与CRC临床病理学参数之间的关系；分析CRC患者癌组织中Ki-67、AE1/AE3和p53表达之间的相关性。1.5统计学方法采用SPSS 22.0进行统计分析，计数资料以n（%）表示，组间比较采用2检验，相关性分析应用Spearman秩相关，检验水准=0.05，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1CRC患者癌组织及癌旁组织中Ki-67、AE1/AE3、p53表达水平76例CRC患者癌组织及癌旁组织中Ki-67阳性 表 达 率 分 别 为80.26%（61/76例）、2.63%（2/76例），差异存在统计学意义（2=33.219，P0.001）；p53阳性表达率分别为57.89%（42/76）、3.95%（3/76），差异存在统计学意义（2=21.836，P0.001）；AE1/AE3阳 性 表 达 率 分 别 为92.11%（70/76）、55.26%（42/76），差异存在统计学意义（2=29.693，P0.001），其中发现8例孤立性肿瘤细胞簇。Ki-67、AE1/AE3、p53在CRC患者癌组织中同时阳性表达的表达率为36.84%（28/76例）。见图1。2.2Ki-67、AE1/AE3、p53阳性表达与临床病理学参数之间相关性分析CRC患者癌组织中Ki-67、AE1/AE3、p53阳性表达与淋巴结是否存在转移、病理分化程度、TNM分期及浸润深度之间存在相关性（P0.05），同时Ki-67和AE1/AE3阳性表达还与肿瘤直径之间存在相关性（P0.05）；而与性别、年龄、肿瘤部位之间无相关性（P0.05）。见表1。2.3Ki-67、AE1/AE3和p53表达相关性分析CRC患者癌组织中Ki-67表达与AE1/AE3和p53表达呈正相关（rs=0.591、0.334，P0.05）；AE1/AE3表 达 和p53表 达 也 呈 正 相 关（rs=0.441，P0.05）。见表2。3讨论CRC作为一种常见的恶性肿瘤，具有高发病率及病死率的特点。有研究表明，CRC患者的5年生存率仅为50%70%，对患者的生活、健康及家庭均造成了严重影响4。因此早期有效的预防、合理的干预措施、积极的预后检测在死亡率的降低、生存率的提高和生活质量的改善中具有重大意义。本研究选用Ki-67、AE1/AE3及p53作为研究指标，采用免疫组化法分析在CRC患者癌组织中的表达情况，探究CRC患者Ki-67、AE1/AE3、p53表达水平及其临床意义。Ki-67作为一种由MKI-67基因编码的核蛋白，参与了细胞增殖及细胞周期各期过程吗，有研究表明Ki-67的表达与肿瘤的增殖及转移密切相关5。本研究结果显示，随着CRC患者伴有淋巴结转移、肿瘤直径的增加、病理分化程度的加重、浸润深度的加深及TNM分期的增高，其Ki-67蛋白阳性表达越强。表明了Ki-67与CRC患者的发生、发展、侵袭及转移均密切相关。AE1/AE3被证实是一种针对上皮细胞标志物广谱细胞角蛋白（cytokeratin，609浙江创伤外科2023年4月第28卷第4期Zhejiang J Trauma Surg,April 2023,Vol.28,No.4ACK）多种亚型的单克隆抗体，主要应用于上皮及上皮源性肿瘤的标记，尤其是在转移性肿瘤的鉴别与判断中具有重要意义6。本研究结果表明AE1/AE3蛋白阳性表达与淋巴结是否存在转移、肿瘤直径、病理分化程度、TNM分期及浸润深度之间存在相关性（P0.05），且在无淋巴结转移的CRC患者中，AE1/AE3较Ki-67检测诊断更为精准。提示AE1/AE3蛋白在CRC患者有无淋巴结转移中更为精准。注：图A、B、C为Ki-67、AE1/AE3、p53在癌组织中高表达；图D、F为Ki-67、p53在癌旁正常组织中低表达，而图E为AE1/AE3在未转移淋巴结中孤立肿瘤细胞（+）图1CRC患者癌组织及癌旁组织免疫组化法染色图（400）BCDEF注：P0.05有统计学意义表1Ki-67、A E 1/A E 3、p53阳性表达与临床病理学参数相关性分析n（%）临床病理学参数（n）p53阳性（阳性率）2值P值（阳性率）2值P值（阳性率）2值P值性别男（n=48）45（93.75）46（95.83）32（66.67）0.0740.1720.0730.7120.7290.822女（n=28）25（89.28）27（96.43）16（57.14）年龄（岁）60（n=19）17（89.47）18（94.74）10（52.63）0.2620.6130.1120.7360.1660.68160（n=57）54（94.74）55（96.49）34（59.65）肿瘤部位直肠（n=34）32（94.12）0.3180.40733（97.06）1.2590.08222（64.71）0.2540.429结肠（n=42）39（92.86）41（95.24）28（66.67）肿瘤直径（cm）5（n=52）46（88.46）47（90.38）32（61.54）3.8180.0174.2510.0130.1810.6625（n=24）23（95.83）23（95.83）15（62.50）淋巴结转移有（n=34）34（100.00）5.8520.00134（100.00）4.9240.00728（82.35）4.7120.006无（n=42）38（90.48）41（97.62）29（69.05）病理分化程度低中（n=64）60（93.75）62（96.88）51（79.69）5.2570.0064.3750.0103.0560.021高（n=12）12（100.00）12（100.00）7（58.33）TNM分期（n=52）49（94.23）4.3280.01150（96.15）4.1870.01337（71.15）2.9870.029（n=24）22（91.67）24（100.00）13（54.17）浸润深度（n=13）11（84.62）4.9350.00812（92.31）2.9310.0457（53.85）5.1210.008（n=63）60（95.24）60（95.24）47（74.60）Ki-67阳性AE1/AE3阳性610浙江创伤外科2023年4月第28卷第4期Zhejiang J Trauma Surg,April 2023,Vol.28,No.4表2AFP、PTEN、EGFR表达相关性分析n（%）p53作为一种抑癌基因，参与调控了机体的细胞增殖及凋亡过程，可分为野生型及突变型7。野生型（p53）存在机体正常细胞，通过复合体的形式抑制细胞周期依赖性蛋白激酶（CDK）的活性，从而达到抑癌的作用8。然而，当野生型（p53）基因结构转变为突变型（p53），不仅失去了抑制CDK的功能，而且促进细胞恶性转化，加重CRC发展9。由于野生型（p53）的特性，导致免疫组化法无法检测，所以检测到的均为突变型（p53），因此，突变型（p53）可作为CRC浸润、转移能力的判断指标之一。本研究结果同样证实了p53蛋白阳性表达与淋巴结是否存在转移、病理分化程度、TNM分期及浸润深度之间存在相关性（P0.05）。而目前临床上，关于Ki-67、AE1/AE3、p53蛋白三者之间同时表达的研究尚缺乏，而本研究结果表明三种蛋白在CRC患者癌组织中同时阳性表达的表达率为36.84%（28/76例），且三者之间存在正相关（P0.05）。综上所述，CRC患者Ki-67、AE1/AE3、p53蛋白阳性表达水平与淋巴结是否转移、病理分化程度、TNM分期及浸润深度之间有关，且三者之间具有相关性。随CRC患者病情发展，这些指标出现异常表达，为结直肠癌的临床诊断和治疗提供一定的理论参考。参考文献1周家铭，邬小凤，吴远辉，等.结直肠癌死亡患者的肿瘤转移部位、发生率及预后J.中山大学学报（医学科学版），2022，43（2）：289-296.2中华人民共和国国家卫生健康委员会.中国结直肠癌诊疗规范（2020年版）J.中华外科杂志，2020，58（8）：561-585.3Weiser MR.AJCC 8th Edition：Colorectal Cancer J.Ann Surg On-col，2018，25（6）：1454-1455.4Li N，Lu B，Luo C，et al.Incidence，mortality，survival，risk factorand screening of colorectal cancer：A comparison among China，Eu-rope，and northern AmericaJ.Cancer Lett，2021（522）：255-268.5陈玺，曾晓颖，陈佳艳，等.错配修复蛋白联合血清肿瘤标志物与Ki-67增殖指数对结直肠癌预后的临床价值J.中国癌症杂志，2022，32（3）：243-250.6Miyashita Y，Ikeda T，Shinto E，et al.Three-dimensional imaging ofintramural perineural invasion in colorectal cancer：Three-dimen-sional reconstruction approach with multiple immunohistochemicallystained sectionsJ.Pathol Int，2022，72（5）：293-299.7Hasbullah HH，Musa M.Gene Therapy Targeting p53 and KRAS forColorectal Cancer Treatment：A Myth or the Way Forward?J.Int JMol Sci，2021，22（21）：11941.8吴雪芳，李霜，胡建军，等.结直肠癌中K-RAS基因突变与p53蛋白表达的临床意义及相关性J.临床与实验病理学杂志，2020，36（10）：1215-1218.9Hu S，Ouyang J，Zheng G，et al.Identification of mutant p53-spe-cific proteins interaction network using TurboID-based proximitylabelingJ.BiochemBiophys Res Commun，2022（615）：163-171.收稿日期：2022-11-18（本文编辑：李谷）注：P0.05有统计学意义Ki-67p53AE1/AE3p53阳性阳性阴性阳性阴性阳性56（73.68）39（51.31）22（28.95）阳性41（53.95）19（25.00）阴性4（5.26）6（7.90）9（11.84）阴性4（5.26）12（15.79）rs值0.334rs值0.441P0.012P0.004AE1/AE3阴性5（6.58）11（14.47）0.5910.001611