DB11∕T 1186-2015 枣疯病综合防治技术规程.pdf

ICS 65.020.20 B 16 备案号：45803-2015 DB11 北京市地方标准 DB11/T 1186-2015 枣疯病综合防治技术规程 Technical code of practice for control of Jujube witches broom 2015-04-30 发布 2015-08-01 实施北京市质量技术监督局 发 布 DB11/T 1186-2015 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 病树的分级.1 5 防治措施.1 5.1 检疫措施.1 5.2 建园要求与品种选择.2 5.3 枣园环境治理.2 5.4 栽培管理措施.2 5.5 病树清理.2 5.6 防治媒介昆虫.2 5.7 疯枝清理.2 5.8 换头改造.2 5.9 输液治疗.2 附录 A（资料性附录）枣疯病识别特征.3 附录 B（资料性附录）枣疯病病树分级.4 附录 C（资料性附录）枣疯病植原体 PCR 检测和检验方法.5 附录 D（资料性附录）常见传病叶蝉的生物学特性.7 附录 E（资料性附录）输液治疗防治枣疯病方法.8 参考文献.10 DB11/T 1186-2015 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。本标准由北京市园林绿化局提出并归口。本标准由北京市园林绿化局组织实施。本标准起草单位：北京市林业保护站。本标准参与起草单位：中国林业科学研究院、北京流村王园果园。本标准主要起草人：王合、陶万强、刘曦、田国忠、袁菲、潘彦平、任争光、郝少东、冯术快、李志朋、王峰、李杰、赵连祥。DB11/T 1186-2015 1 枣疯病综合防治技术规程 1 范围 本标准规定了枣疯病的病情分级和综合防治技术。本标准适用于北京地区枣疯病的防治。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4285 农药安全使用标准 GB/T 8321.8-2007 农药合理使用准则（八）GB/T 8321.9-2009 农药合理使用准则（九）3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 植原体 phytoplasma 原称类菌原体(mycoplasma-like organism,MLO)，为单细胞原核生物，无细胞壁，寄生在植物韧皮部筛管中和介体昆虫体内。3.2 枣疯病 Jujube witches broom 是一种植原体引起的维管束系统病害，以枝叶丛生、花器返祖为主要症状，严重时可导致枣树死亡。注：识别特征参见附录 A。4 病树的分级 分级标准参见附录 B。5 防治措施 5.1 检疫措施 DB11/T 1186-2015 2 5.1.1 加强枣树苗木、接穗的调运检疫，接穗、砧木、苗木等繁殖材料携带植原体检测和检验方法参见附录 C。5.1.2 发现带病接穗、砧木、苗木等植物繁殖材料应及时销毁，不得引入新枣园或已建立的无病枣园，防止枣疯病扩散蔓延。5.2 建园要求与品种选择 5.2.1 宜在没有发生枣疯病的地区建园，在栽培枣和酸枣发病严重区建园时可选用抗病、耐病品种，如星光、黑腰子枣、唐星、阜星、嘎嘎枣、尜尜枣、葫芦枣、骏枣、壶瓶枣、洪赵小枣、月光等品种。慎用易感病品种，如梨枣、冬枣、泡泡红枣、金丝小枣、赞皇大枣等。5.2.2 宜在无病区用健康酸枣种子培育实生苗和建优良品种采穗圃；有条件的应推广应用脱毒苗；在病区建采穗圃，应在防虫网室内。5.3 枣园环境治理 5.3.1 枣园周边不宜栽植松、柏、桑等植物，不宜在枣园内间作芝麻、月季花等媒介昆虫的嗜食植物。5.3.2 枣树发芽前和生长期间应及时清除桑、榆等其他植物和杂草。5.3.3 彻底刨除枣园周围已经染病的酸枣。5.4 栽培管理措施 因地制宜，合理施用有机肥，增施磷钾肥；适度修剪，提高树体通透性和光照强度；控制结果数量，保持健康树势。5.5 病树清理 5.5.1 对于新建枣园或无病树枣园，发现病株，应及时清除。5.5.2 对于发病率较高，且品种抗病性较低的枣园，发现病株，应及时刨除并补栽抗病性强的品种，古树名木除外。5.5.3 刨除病树后的树坑应晾晒，待残根风干后再进行补植。5.6 防治媒介昆虫 主要媒介昆虫的形态特征和发生规律参见附录 D；可选用内吸性、触杀性的杀虫剂；使用方法按照 GB/T 8321.8、GB/T 8321.9 和 GB 4285 执行。5.7 疯枝清理 对于发病较轻（级以下，含级）枣树的疯枝、带病根蘖，应立即清除。疯枝清理的原则是“疯小枝去大枝”，即从疯枝的上一级次枝条基部去除，不留桩。5.8 换头改造 对于发病较重（级以上，含级）且有保存价值的病树，利用星光、黑腰子等抗病品种进行多头高接。高接时间一般在4月中下旬5月下旬。高接部位宜低不宜高，并及时清除砧木萌蘖。5.9 输液治疗 对于发病较轻（级以下，含级）枣树和古树名木等有保留价值的病树，可进行树干输液（滴注）治疗。治疗时间为枣树展叶后至开花前 1 周。输液治疗方法参见附录表 E.1，药剂使用量参见附录表 E.2。DB11/T 1186-2015 3 A A 附 录 A（资料性附录）枣疯病识别特征 A.1 地上部分 被害植株出现叶片变小，枝叶丛生、纤细、小叶黄化等。多出现在新生的枣头上。花器症状表现为花器退化，花梗明显延长，是正常花梗的36倍，萼片、花瓣、雄蕊发育成小叶，雌蕊发育成小枝。枝叶症状表现为1年生发育枝的主芽和多年生发育枝上的隐芽非正常萌发，一年多次萌生出细小枝叶，病枝纤细，节间缩短，形成“丛状枝”。果实症状表现为大小不一，果面着色不匀，凸凹不平，凸起部位呈红色，凹陷部位呈绿色，果肉疏松，失去食用价值。A.2 地下部分 根部发病后，萌生的根蘖也呈稠密的丛枝状，长到 30cm 左右便停止生长继而枯死。病根发病初期皮呈褐色，后期形成点发性溃疡斑，最终死亡。DB11/T 1186-2015 4 B B 附 录 B（资料性附录）枣疯病病树分级 枣疯病病树分级见表B.1。表B.1 枣疯病病树分级表 病级 表现症状 0 无疯枝。仅有 1 2 个小病枝，其他枝条外观正常。病枝占总枝量的 1/4 以下，其他枝条外观正常。病枝占总枝量的 1/4 1/2 以下，其他枝条外观正常。病枝占总枝量的1/2 3/4以下，但尚有枝条外观正常。病枝占总枝量的3/4以上（含），病枝遍布全树，基本无正常枝条。DB11/T 1186-2015 5 C C 附 录 C（资料性附录）枣疯病植原体 PCR 检测和检验方法 C.1 枣树和植原体总DNA提取方法 C.1.1 CTAB碱裂解法 CTAB碱裂解法总DNA提取方法如下：a）取枣树树皮、叶柄、叶脉、根等含韧皮部组织，用液氮研磨成粉末状。b）称取0.1 g于2 mL离心管中,加入800 L 65 预热的CTAB提取液（2%CTAB、100 mM Tris-HCl pH 8.0、1.4 M NaCl、20 mM EDTA、0.2%-巯基乙醇），65 水浴1 h（期间轻轻混匀几次）。c）加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）抽提，12000 rpm离心10 min，取上清液至离心管。d）加入等体积氯仿轻轻混匀，12000 rpm离心10 min，取上清液至离心管。e）加入等体积异丙醇轻轻混匀。f）将混匀的液体转入DNA吸附柱CB3（吸附柱容积为700 L左右，可分次加入离心）中，12000 rpm离心30 sec，弃掉废液。g）向吸附柱CB3中加入700 L 70%乙醇，12000 rpm离心30 sec，弃掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中，然后重复洗脱步骤。h）吸附柱CB3放入收集管中，12000 rpm离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3放入1.5 mL离K心管并于室温开盖放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。i）向吸附膜的中央部位悬空滴加100 L 1TE，室温放置2 min 5 min，12000 rpm离心2 min，将溶液收集到离心管中，-20保存备用。C.1.2 试剂盒法 可直接用商品化植物基因组DNA快速提取试剂盒提取。C.2 枣疯植原体的PCR检测验证 C.2.1 引物以植原体16S rRNA基因保守序列设计引物对R16mF2/R2（R16mF2:5-CATGCAAGTCGAACGGA-3，R16mR2:5-CTTAACCCCAATCATCGA-3）和R16F2/R2（R16F2:5-ACGACTGCTAAGACTGG-3,R1:5-TGACGGGCGGTGACAAACCCC G-3）进行直接PCR或Nested-PCR。a）直接 PCR 反应体系(50 L)：1 L5 L 模板 DNA，1 L 10 mM dNTP，5 L10 PCR buffer，1 L4 L 引物(R16mF2/R16mR2)，加 0.5 uL Taq 酶，加蒸馏水至 50 uL。扩增条件：94 变性 5 min；94，45 s;52，30 s;72,90 s；扩增 30 个35 个循环，然后 72，10 min。b）Nested-PCR：取直接PCR产物稀释40倍后取1 uL作DNA模板，引物为R16F2/R2，其它条件同直接PCR。C.2.2 扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳，然后于紫外灯下检查1.2 kb（Nested-PCR）和1.4 kb（直接PCR）的特异扩增片段的有无。DB11/T 1186-2015 6 C.2.3 必要时回收PCR扩增产物，进行片段克隆和测序，进行BLAST比对或系统进化分析，鉴定确认病原。DB11/T 1186-2015 7 D D 附 录 D（资料性附录）常见传病叶蝉的生物学特性 常见传病叶蝉的生物学特性见表D.1。表D.1 常见传病叶蝉的生物学特性 生物学特性 凹缘菱纹叶蝉 Hishimonus sellatus（Uhler）,1896片突菱纹叶蝉 Hishimonus lamellatus Cai et Kuoh，1995 中华拟菱纹叶蝉 Hishimonoides chinensis Anufriev,1970 红闪小叶蝉 Typhlocyba sp.形态特征 属半翅目 Hemiptera，叶蝉科Cicadellidae。成虫体长 2.8 mm3.4mm，至翅端长 3.7mm4.6mm。体黄绿色，头部前方突出，具黄色光泽，头顶有数对不甚明显的淡黄褐色小斑纹，复眼暗绿色，单眼黄色，前翅灰白色，半透明，两翅合拢时呈菱纹斑。虫体的腹面黄色或淡黄绿色，足淡黄色，腹部背面中央黑褐色。若虫共 5 龄，体长 3.9mm4.3mm，头冠黄绿色，疏生褐色小斑点。复眼暗绿色，单眼黄色，胸背面浓褐色，被黄点。属半翅目 Hemiptera，叶蝉科Cicadellidae。成虫体长 2.75mm3.1mm,至翅端长 3.7mm4.0mm。成虫身体呈污黄微褐色，腹部背面黑褐色，侧缘区红黄色，前翅污白。整个虫体有黄褐至暗褐色斑纹，其中在头冠中域偏前的横槽区内有斑点 1 对，斑点前方近中央各有1 小斑点。若虫，脱皮 4 次,共五龄。雌性为黄褐色,雄性为黑褐色。属半翅目 Hemiptera，叶蝉科 Cicadellidae。成虫体长 3.3 mm3.8mm，头部淡黄色，头顶前缘具暗褐色斑纹 1 对。复眼暗红色。小盾板淡黄色，具橙褐色斑点。若虫共 5 龄，淡黄色，体背黄褐色，有光泽，头部和胸部背面具不规则褐纹。属半翅目 Hemiptera，叶蝉科Cicadellidae。成虫体狭长美观，雌虫体长 1.66 mm66mm，雄虫体长 2.25 mm2.38mm，复眼污白色，越冬态复眼为黑褐色。成虫羽化初时有两种颜色，污白色或微黄色，两天后变黄白色。成虫静止时从头的前缘至后缘沿着头缝的两侧各有 1 条红色纵纹，头缝处有断续黄白色条纹，下接前胸背板红色斑，近前缘斑纹中间有微黄白色不很明显的“小”字形红色斑纹 1 个。羽化初期为浅黄色，两天后由微红变红色（第一代有少部分斑纹为黄色，越冬态斑纹更明显）。发生规律 北京一年发生 5 代，以越冬卵在枣园中及周边的桑树表皮下越冬，也可在月季、蔷薇枝条上越冬。凹缘菱纹叶蝉在不同寄主上的分布随季节发生变化。第一代在 5 月初由桑树、月季上的越冬卵孵化，幼虫在桑树、月季上生长，5 月中下旬羽化交配后，成虫部分迁飞至枣树上产卵，其后在枣树上约 1 月发生 1 代。9 月10 月份发生的第 45 代世代重叠，进入发生高峰期，9 月份部分回迁到桑树上产卵越冬。一年发生 45 代。越冬成虫于 5 月上旬迁回至枣产卵，69 月初在枣园中出现 3 个成虫高峰，随后虫口密度下降。北京一年发生 3 代，以卵越冬，卵多产在枣树、酸枣或其他寄主的一、二年生枝条上，卵期约 232d。枣树萌芽期开始孵化，2d3d 即达到盛期，第一代若虫期（5 月上中旬）和成虫期（5 月下旬6 月中旬）集中而整齐。6 月中旬自第二代成虫开始与第一代成虫后期部分交替，以后数代交错更加严重。一年发生 2 代，以成虫在枣树下及枣林附近杂草丛中越冬，翌年5月初枣芽萌发后上树产卵、取食。5 月下旬6 月上中旬为产卵盛期，5 月下旬7月为若虫发生期，8 月上中旬为第 1 代成虫产卵盛期，8 月中下旬9 月上中旬为若虫发生盛期，8 月下旬第 2 代成虫开始羽化并准备越冬。DB11/T 1186-2015 8 附 录 E（资料性附录）输液治疗防治枣疯病方法 输液治疗防治枣疯病方法见表E.1，表E.2。表 E.1 输液治疗防治枣疯病方法 使用工具 手摇钻或电钻（钻头孔径 0.4cm）、输液器、袋子、管子、针头。药剂选择 四环素类农用抗生素 使用条件 树干直径超过 5cm 的病树。使用时间 在枣树展叶后至开花前至少 1 周，北京地区通常在 5 月份。使 用 方 法 配药 按照药剂使用说明，用适量的干净清水溶解药剂后，用 46 层纱布或多层卫生纸过滤，以减少沉淀和杂质，有利于加快树体吸收；治疗药液要随用随配，配制好的药液要在 24h 内用完。根据树干粗度和病情严重程度，确定输液数量，参见附录 B 枣疯病病情分级标准和附表 D.2 枣疯病树干滴注治疗用药量查算表。打孔 打孔的位置一般在病树树干上离地面 20cm30cm 处，用手摇钻或电钻在树干上钻孔径 0.45cm、深达木质部 2cm3cm 的注药孔；打孔时钻体必须保持稳定，使孔径均匀；钻注药孔时，钻头与树干的夹角最好在 45左右；注药孔位置尽可能与树上的疯枝相对应；要避免在死亡的木质部打孔，同时注药孔附近不能有树洞和裂缝，避免造成漏液。输液 输液瓶（袋）应尽量挂高，宜为 1.2m 以上，以加大压差，加快药液流量。为保证液流通畅，要排净输液管道中的气体。然后将针头斜向下插入，旋紧，避免漏液。插入针头后，打开输液器开关，检查输液瓶（袋）是否滴液、针头处是否漏液。不滴液可能是排气不畅或针头堵塞造成的，漏液可能是针头插得不紧不严，而漏液太快可能是注药孔打在了坏死或有裂缝的部位，应及时纠正。不漏液且能正常滴液后，放到最大输液速度处输液，一般 24h 左右输完。使用注意事项 在输液前，轻病树可按前述手术治疗方法去除疯枝，一定不能留桩，否则药液达不到桩上影响输液的治疗效果。也可以先输液，后去除疯枝，有利于药液到达全树。DB11/T 1186-2015 9 表 E.2 枣疯病树干输液治疗用药量查算表 干径（cm）干周（cm）不同病级病树参考用药量（500mL：瓶）1 级 2 级 3 级 4 级 5 级 5 15.7 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 6 18.84 0.5 0.5 0.5 0.5 1 7 21.98 0.5 0.5 1 1 1 8 25.12 1 1 1 1 1 9 28.26 1 1 1 1 1 10 31.4 1 1 1 1.5 1.5 11 34.54 1 1.5 1.5 1.5 1.5 12 37.68 1.5 1.5 1.5 1.5 2 13 40.82 1.5 1.5 2 2 2 14 43.96 2 2 2 2 2.5 15 47.1 2 2 2.5 2.5 2.5 16 50.24 2.5 2.5 2.5 2.5 3 17 53.38 2.5 2.5 3 3 3 18 56.52 3 3 3 3 3.5 19 59.66 3 3 3.5 3.5 3.5 20 62.8 3.5 3.5 3.5 4 4 21 65.94 3.5 4 4 4 4.5 22 69.08 4 4 4.5 4.5 5 23 72.22 4.5 4.5 5 5 5 24 75.36 5 5 5 5.5 5.5 25 78.5 5 5.5 5.5 6 6 26 81.64 5.5 6 6 6 6.5 27 84.78 6 6 6.5 6.5 7 28 87.92 6.5 6.5 7 7.5 8 29 91.06 7 7.5 8 8 8.5 30 94.2 8 8 8.5 8.5 9 E DB11/T 1186-2015 10 参 考 文 献 1 刘孟军，赵锦，周俊义.枣疯病病情分级体系研究J.河北农业大学学报，2006，29(1):31-33 2 樊新萍，乔永胜，田建保.枣疯病研究进展J.山西农业大学学报，2006，5(6):14-17 3 潘青华.枣疯病研究进展及防治措施J.北京农业科学，2002，3:4-8,21 4 刘孟军，赵锦，周俊义.枣疯病M.北京：中国农业出版社，2010 5 田国忠，张志善，李志清等.我国不同地区枣疯病发生动态和主导因子分析J.林业科学，2002，38（2）：83-91 6 温秀军，郭晓军，田国忠等.枣树品种抗枣疯病的抗性鉴定及抗病机理研究J.林业科学 2005,41(3):88-96 7 田国忠，徐启聪，李永等.野生酸枣疯病与栽培大枣疯病发生的关系J.植物保护学报，2009,36（6）：529-536 8 田国忠，李志清，胡佳续等.我国部分枣树品种（系）对枣疯病的抗性鉴定研究J.林业科技开发，2013，27（3）：19-25 9 赵京芬，胡佳续，宋传生等.北京市丰台区主栽枣树品种对枣疯病抗性试验J.中国森林病虫，2010，3：11-14 10 徐启聪，田国忠，王振亮等.中国各地不同枣树品种上枣疯病植原体的 PCR 检测及分子变异分析J.微生物学报，2009，49（11）：1510-1519 11 孙淑梅，张凤舞，田旭东.枣疯病的媒介昆虫凹缘菱纹叶蝉生物学和防治研究J.植保学报，1988，15(3):173-177 12 王焯，于保文，周佩珍等.枣疯病传毒昆虫研究 I.传毒昆虫中国拟菱纹叶蝉J.植物病理学报，1981，3：25-29 13 王焯，刘秀芳，周佩珍等.枣疯病综合防治技术研究J.中国果树，1988，2：40-41 14 田砚亭，王红艳，牛辰等.枣树脱除类菌原体(MLO)技术的研究J.北京林业大学学报，1993，15:20-26 _