花露水中金银花投料研究.pdf

第3 7 卷第6 期2023年1 1 月天津化工Tianjin Chemical IndustryVol.37No.6Nov.2023花露水中金银花投料研究雷运桂，孙盛楠（清远市食品药品检验所，广东清远51 1 50 0）摘要：目的：以灰粘毛忍冬皂苷乙为山银花的专属性物质，金银花中不含此成分，以此确认花露水中投料情况。方法：采用液相色谱-三重四极杆质谱联用仪，流动相是甲醇（A)-5.0mmol/L乙酸铵的0.1%甲酸溶液（B），梯度洗脱程序为：0.0 0 2.0 0 min，1 0%A;2.0 0 4.50 m i n，1 0%A 升至9 0%A；4.50 6.00min,90%A;6.006.01 min,90%A降至1 0%A;6.018.00 min,10%A。在流速为 0.2 mL/min、柱温为4 0、进样量为5L条件下，通过对3 0 批市售花露水进行检测，以灰粘毛忍冬皂苷乙为对照品，金银花、山银花为对照药材。结果：3 0 批花露水产品中，有2 批里面检出产品标签与技术要求未标识的山银花成分灰粘毛忍冬皂苷乙。结论：该方法简单高效，适用于花露水中山银花代替金银花投料的分析，建议加强含有金银花成分产品的监管。关键词：花露水；金银花；山银花；灰粘毛忍冬皂苷乙doi:10.3969/j.issn.1008-1267.2023.06.009中图分类号：TQ041文献标志码：A文章编号：1 0 0 8-1 2 6 7(2 0 2 3)0 6-0 0 2 9-0 3中华人民共和国药典叫收录了金银花,其为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花。需夏初花开放前采收，干燥。金银花具有清热解毒、疏散风热功能，主治：痛肿疗疮、喉痹、丹毒、热毒血痫、风热感冒、温病发热。因此,金银花被广泛用于药品、食品、保健品及化妆品中。山银花也收录在中华人民共和国药典(2 0 2 0 年版)2 中，为忍冬科植物灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬或黄褐毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花。需夏初花开放前采收，干燥。山银花与金银花具有同样的主治功能。中华人民共和国药典（2 0 1 5年版）3 已使用化妆品原料名称目录，收录了金银花可用于化妆品投料的类别：忍冬提取物及花、叶子、藤提取物；红腺忍冬提取物。目前,市场上宣称含有金银花的产品繁多，如牙膏、花露水、驱蚊水等。因金银花价格比山银花价格高，加上两者容易混乱，商家也难以辩别。中华人民共和国药典(2020年版）2 中，山银花的检查是以灰粘毛忍冬皂苷乙为专属性成分。不少文献 4-8 也提出以灰粘毛忍冬皂苷乙作为区分金银花与山银花的专属成分。通过研究发现，有以金银花代替山银花或金银花中掺杂着山银花投料的现象9。在化妆品领域中，投料忍冬花提取物的产品应用越来越广泛。花露水按功效区分，有清?、祛痱止痒类，产品标签上是妆字号；有驱蚊类，产品标签是农药号。现在市面上许多花露水产品标签都标注含有忍冬花提取物。目前研究发现，灰粘毛忍冬皂苷乙是山银花的专属成分。因此,本实验建立液相色谱-三重四极杆质谱联用仪测定花露水中山银花所含灰粘毛忍冬皂苷乙的含量，为花露水的投料情况提供研究参考。1实验部分1.1样品来源收稿日期：2 0 2 3-0 5-0 5作者简介：雷运桂（1 9 8 1-）,女，理学士，副主任药师，研究方向为食品、药品、化妆品检验分析。30收集市面上的3 0 批花露水。产品标签有妆字号，也有农药字号。1.2试剂与仪器乙酸铵、甲酸均为LC/MS，赛默飞世尔科技(中国)有限公司；甲醇，色谱纯，赛默飞世尔科技(中国)有限公司。所用水均为密理博超纯水仪所制超纯水(电阻率为1 8.2 MQcm)。液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：WatersXEVOTQ；色谱柱：Waters ACQUITY UPLCBEH C18 1.7 m 2.150mm。医用离心机，长沙平凡仪器仪表有限公司。1.3实实验方法1.3.1液相色谱-三重四极杆质谱联用仪WatersXEVOTQ色谱及质谱条件1.3.1.1UPLC-MS/MS 色谱条件流动相是甲醇（A)-5.0mmol/L乙酸铵的0.1%甲酸溶液（B），梯度洗脱程序为：当0.0 0 2.0 0min 时,1 0%A;2.004.50 min 时,1 0%A升至90%A;4.506.00 min 时,9 0%A;6.006.01 min时,9 0%A降至 1 0%A;6.018.00 min 时,1 0%A。流速为0.2 mL/min；柱温为4 0;进样量为5uL。1.3.1.2UPLC-MS/MS 质谱条件电离子化模式为电喷雾离子源(ESI),扫描方式为多反应离子检测(MRM),正离子模式。灰毡毛忍冬皂苷乙的定性离子对为1 4 2 2.0 8/4 9 3.2 1 m/z，碰撞能量1(CE1)为50 V,定量离子对为1 4 2 2.0 8/1097.6 m/z,碰撞能量2(CE2)为50 V。1.3.2对照品溶液的配制取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成质量体积浓度为2 0 0 ng/mL的对照品溶液。1.3.3对照药材溶液的配制分别取金银花和山银花对照药材0.5g，置于具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称重，超声处理3 0 min后放冷，补重，滤过，精密量取续滤液0.1 mL，置于50 mL容量瓶中,用50%甲醇稀释并定容至刻度,摇匀,即得对照药材溶天津化工液。经0.2 2 m微孔滤膜过滤,滤液作为待测溶液。1.3.4供试品溶液的配制取市售花露水适量，离心（转速为4 0 0 0 r/min)5min，取上清液经0.2 2 m微孔滤膜过滤，滤液作为待测溶液。1.4实验结果1.4.1按照上述方法进行实验灰毡毛忍冬皂苷乙对照品、山银花和金银花对照药材、花露水阳性样品和花露水阴性样品如图1 图5所示。HUizhanmaorendongzaogan20230413-200ul Smooth(Mn,12x1)100%0-20230413-200ul Smooth(Mn,12x1)100%QTTTT1.00图1灰毡毛忍冬皂苷乙对照品HUlzhanmaorendongzaogan20230413-shanyinhua Smooth(Mn,12x1)100%020230413-shanyinhua Smooth(Mn,12x1)100%0-TTT1.00HUizhanmaorendongzaogan20230414-jinyinhua6 Smooth(Mn.12x1)0.771.452.38元2.58 3100-%20230414-jinyinhua6 Smooth(Mn,12x1)0.85107.1.012:13100vm%01.00HUlzhanmaorendongzaogan20230415-YP4-1Smooth(Mn,12x1)100%20230415-YP4-1Smooth(Mn,12x1)100%1.002023年1 1 月MRMof 2channels,ES+1422.081097.6HUizhanmaorendongzaogan4.391e+0036.41299.372.99e2HUlzhanmaorendongzaogan6.4252.775.28e1TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT2.003.00HUizhanmaorendongzaogan6.411680.701.68e3HUizhanmaorendongzaogan6.41276.222.76e22.003.00图2山银花对照药材MRMof2channels,ES+1422.081097.63.614.455.655.755.827.046.165e+001TTTTTTminMRMof 2channels,ES+1422.08493.213.593.674.724-84.5.04,6.49.6666.237e+001M4.002.003.00图3 金银花对照药材MRMof2.channels,ES+1422.081097.6HUizhanmaorendongzaogan2.970e+0046.381948.751.95e3HUizhanmaorendongzaogan6.38342.053.42e22.003.00图4 花露水阳性样品minMRMof2.channels,ES+1422.08493.218.097e+002TTTTmin4.005.004.005.005.004.005.006.00MRMof2.channels.ES+1422.081097.62.268e+004TrminMRMof2channels,ES+1422.08493.213.798e+003mmrmin6.007.00rmin6.007.00mrminMRMof2channels,ES+1422.08493.215.229e+003min6.007.007.00第3 7 卷第6 期HUizhanmaorendongzaogan20230417-7-3 Smooth(Mn,12x1)%0-20230417-7-3Smooth(Mn,12x1)2.451000.74.1:312.01%TT1.001.4.2供试品测定结果将市售3 0 批花露水提取液，注人液相质谱联用仪中，按照上述检验方法测定，其中2 批样品检出山银花的特征成分灰毡毛忍冬皂苷乙，2 8批样品未检出山银花的特征成分灰毡毛忍冬皂乙。1.4.3实验提取过程分析灰毡毛忍冬皂苷乙作为山银花特征成分，用于判断花露水中山银花替代金银花成分的情况，摸索提取过程：称取0.2 g至1 0 0 mL容量瓶中，加人50%甲醇定容至刻度。注人仪器后发现，个别样品只有1 4 2 2.0 8/1 0 9 7.6 m/z碎片存在色谱峰，1422.08/493.21m/z无响应。再取1.0 g花露水置于1 0 0 mL容量瓶中，加人50%甲醇定容至刻度。部分样品仍检验不出特征成分。由于花露水中主要成分为乙醇、水，金银花的投料量不确定，以至于金银花提取物成分含量不确定，直接影响灰毡毛忍冬皂苷乙浓度,影响结果判断。经过多番条件摸索，最后为了提高灰毡毛忍冬皂苷乙浓度，选择直接将适量花露水离心（4 0 0 0 r/min)5min,取上清液经0.2 2 m微孔滤膜过滤，进行检测。雷运桂等：花露水中金银花投料研究MRMof2channels,ES+2结论2.9.3.04.14.58.9851422.081097.65.80.6.28.6.896.481e+001mminMRMof2.channels.ES+3.781422.08493.213.364.494.786.16.6.69.7.276.429e+001min2.003.00图5花露水阴性样品31经对市售3 0 批花露水用液相质谱联用仪做检测，检出2 批产品中含有山银花的特征成分灰毡毛忍冬皂苷乙，阳性样品占比为6.7%。但是，不可避免会有某些产品含量低于定量限而不能判4.005.006.007.00断的情况发生。同时也表明，虽然标签及注册资料载明以忍冬花提取物作为原料，但实际上存在部分厂家以山银花代替金银花投料的情况。使用50%甲醇作为提取溶剂，液相质谱仪分析山银花的特征成分灰毡毛忍冬皂苷乙，操作方法高效、简单，适合市场监管技术机构和化妆品生产厂家日常检测工作使用。参考文献：1 DONG Y M,WU Y.Design of cosmetic foumulation contai-ning ffec-tive plant materialsJ.Detergent&Cosmetics,2017,40(9):1-3.2国家药典委员会.中华人民共和国药典(2 0 2 0 年版)，一部 S.北京：中国医药科技出版社，2 0 2 0.3国家药典委员会.中华人民共和国药典(2 0 1 5年版),一部 S北京：中国医药科技出版社,2 0 1 5.4薛强药用植物丁公藤和金银花活性成分及其混伪品鉴别研究 D北京：北京林业大学2 0 2 0.5】陆静娴,陈勇,黄琴伟,等.银翘解毒颗粒中金银花的投料规范性研究 J.中国现代应用药学,2 0 1 9,3 6(1 3):1 6 6 9-1 6 7 2.6陆顺瑶,谢培山,梁育珍,等.金银花和山银花的薄层色谱指纹图谱分析 .中药新药与临床药理,2 0 2 1,3 2(1):1 0 3-1 0 8.7】李文沛,俸婷婷,周英.金银花、山银花药效与安全性研究.山地农业生物学报,2 0 1 8,3 7(4):8 9-9 4.8何云.黔产金银花和山银花抗炎、免疫和保肝作用药效学对比研究 D贵阳:贵州大学,2 0 1 9.9郭娅,王文婷,何世新.银翘解毒丸中山银花替代金银花投料掺假研究 J,海峡药学,2 0 2 2,3 4(1 1):4 4-4 7.垃圾不乱扔举止显文明