DB37∕T 3534-2019 水中11种除草剂及代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱质谱法(山东省).pdf

ICS 67.080 C 53 DB37 山东省地方标准 DB 37/T 35342019 水中 11 种除草剂及代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of 11 herbicides and metabolites residues in water Liquid chromatography-mass spectrometry 2019 - 03 - 21 发布 2019 - 04 - 21 实施 山东省市场监督管理局 发 布 DB37/T 35342019 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 原理 . 1 4 试剂与材料 . 1 4.1 试剂 . 1 4.2 溶液配制 . 1 4.3 标准品 . 1 4.4 标准溶液配制 . 1 4.5 材料 . 2 5 仪器和设备 . 2 6 试样制备 . 2 7 分析步骤 . 2 7.1 提取和净化 . 2 7.2 定容 . 2 7.3 测定 . 2 7.4 平行试验 . 3 7.5 空白试验 . 3 8 结果计算 . 3 9 精密度 . 4 10 定量限和回收率 . 4 10.1 定量限 . 4 10.2 回收率 . 4 附 录 A （资料性附录） 质谱仪参数 . 5 附 录 B （资料性附录） 11 种除草剂及代谢物中英文名称、监测离子对、碰撞电压和保留时间 6 附 录 C （资料性附录） 11 种除草剂及代谢物多反应监测（MRM）色谱图 . 7 附 录 D （规范性附录） 实验室重复性限（r）数据表 . 11 附 录 E （规范性附录） 实验室再现性限（R）数据表 . 12 附 录 F （资料性附录） 11 种除草剂及代谢物添加水平和回收率数据 . 13 DB37/T 35342019 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由山东省农业农村厅提出并监督实施。 本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省农药检定所。 本标准主要起草人：周力、韩帅兵、张耀中、李向阳、姜士聚、吴亚玉、迟归兵、鞠易明、杨扬、林得平、于淼。 DB37/T 35342019 1 水中 11 种除草剂及代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准规定了水中11种除草剂及代谢物残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。 本标准适用于地表水和地下水中莠去津、脱乙基莠去津、脱异丙基莠去津、羟基莠去津、苯磺隆、苄嘧磺隆、吡嘧磺隆、异噁草松、甲草胺、乙草胺和丁草胺残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 水样中残留的除草剂及代谢物经聚合物亲水固相萃取小柱富集，然后用有机溶剂洗脱，浓缩定容，用液相色谱-质谱/质谱仪检测，外标法定量。 4 试剂与材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。 4.1 试剂 甲醇（CH3OH，65-56-1）：色谱纯。 4.2 溶液配制 4.2.1 甲醇-水溶液（5+95）：量取 10 mL 甲醇，加入 190 mL 水中，混匀。 4.2.2 0.02 %甲酸（HCOOH，64-18-6，色谱纯）水溶液（含 5 mmol/L 乙酸铵）：准确移取 0.2 mL 甲酸和称取 0.385 g 乙酸铵（CH3COONH4，631-61-8，色谱纯）于 1 000 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，现配现用。 4.3 标准品 11种除草剂及代谢物标准品：纯度95 %。 4.4 标准溶液配制 4.4.1 标准储备溶液：分别准确称取适量（精确至 0.1 mg）11 种除草剂及代谢物标准品于 10 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成浓度约为 100 mg/L 的标准储备溶液，0 4 保存，保存期为 6 个月。 DB37/T 35342019 2 4.4.2 中间标准溶液：准确吸取适量标准储备溶液（4.4.1），用甲醇稀释配制成 10 mg/L 的中间标准溶液，0 4 保存，保存期为 1 个月。 4.4.3 混合标准工作溶液：准确吸取适量的中间标准溶液（4.4.2），用甲醇稀释配制成所需浓度的混合标准工作溶液，现配现用。 4.5 材料 4.5.1 有机滤膜：0.22 m。 4.5.2 聚合物亲水固相萃取小柱（Hypersep Retain PEP1)，500 mg，6 mL）。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2 分析天平，感量为 0.0001 g。 5.3 氮吹仪。 5.4 固相萃取装置。 5.5 真空泵。 5.6 量筒：50 mL。 5.7 刻度离心管：10 mL。 6 试样制备 取水样品约1 L，将样品通过定性滤纸过滤，分三份倒入洁净的聚四氟乙烯样桶中，每份约250 mL，密封并做好标识，于-18 以下冷冻保存。在试样制备过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 7 分析步骤 7.1 提取和净化 7.1.1 依次用甲醇和水各 3 mL 对 SPE 小柱 （4.5.2） 进行预淋， 使每种溶剂在小柱中停留 3 min4 min。 7.1.2 准确量取 50.0 mL 水样上柱， 调节固相萃取装置 （5.4） 压力控制阀， 使水样以 1 mL/min2 mL/min的流速通过小柱，待水样全部通过小柱后，继续抽真空约 1 min，然后用 3 mL 甲醇水溶液（4.2.1）洗涤小柱，再抽真空约 1 min，弃去上述溶液，最后用 10 mL 甲醇淋洗小柱，将淋洗液收集于刻度离心管中。 7.2 定容 在50 的条件下，将淋洗液以氮气吹干，用甲醇定容至1.0 mL，经0.22 m滤膜（4.5.1）过滤后供液相色谱-质谱/质谱测定。 7.3 测定 7.3.1 液相色谱-质谱/质谱参考条件 1) Hypersep Retain PEP 柱是 Thermo Fisher 产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 DB37/T 35342019 3 下列参数不是必需的，可视所用仪器不同进行优化： a) 色谱柱：Shim-pack XR-ODS 2.0 mm（i.d）75 mm，1.6 m，或相当者； b) 流动相及梯度洗脱条件见表 1； 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间/min 流速/（mL/min） 流动相 A（甲醇）/% 流动相 B（0.02 %甲酸+ 5 mmol 乙酸铵水溶液）/% 0.00 0.35 10 90 0.50 0.35 10 90 2.00 0.35 60 40 5.00 0.35 60 40 9.00 0.35 95 5 11.50 0.35 95 5 12.00 0.35 10 90 c) 柱温：40 ； d) 进样量：0.5 L； e) 质谱仪参数：参见附录 A； f) 监测离子对、碰撞电压：参见附录 B。 7.3.2 定性测定 在相同实验条件下， 样液中被测物的色谱峰保留时间与标准工作液相同， 并且在扣除背景后的试样谱图中所选择的离子对均出现，各定性离子的相对丰度与标准品离子的相对丰度相比，偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。 表2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50 % 20 %至 50 % 10 %至 20 % 10 % 允许的相对偏差 20 % 25 % 30 % 50 % 7.3.3 定量测定 本标准采用外标-标准曲线法定量测定。用空白样品溶液配制基质混合标准工作溶液，以待测物峰面积为纵坐标、基质混合标准工作溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线对样品进行定量。样品溶液中待测物的响应值均应在标准工作曲线的线性范围以内； 如果超出线性范围， 应用空白基质溶液进行适当稀释后测定。11种农药及代谢物标准物质的参考保留时间参见附录B，液相色谱-质谱/质谱多反应监测（MRM）色谱图参见附录C。 7.4 平行试验 按上述步骤对同一试样进行平行试验。 7.5 空白试验 用符合GB/T 6682中规定的三级水作为空白试样，按上述步骤进行试验。 DB37/T 35342019 4 8 结果计算 液相色谱-质谱/质谱测定采用标准工作曲线法定量，试样中每种被测组分含量按式（1）计算： 10001000=VVCXSii . (1) 式中： Xi 试样中每种被测组分含量，单位为微克每升（g/L）； VS 试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）； Ci 从标准工作曲线得到的试样溶液中每种被测组分浓度，单位为微克每升（g/L）； V 样品溶液所代表的试样体积，单位为毫升（mL）。 计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。 9 精密度 9.1 在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差不大于重复性限（r），重复性限（r）的数据见附录 D。 9.2 在再现性条件下，两次独立测定结果的绝对差不大于再现性限（R），再现性限（R）的数据见附录 E。 10 定量限和回收率 10.1 定量限 本方法中11种除草剂及代谢物在水中定量限均为0.1 g/L。 10.2 回收率 本方法中11种除草剂及代谢物的添加水平和回收率范围见附录F。 DB37/T 35342019 5 A A 附 录 A （资料性附录） 质谱仪参数2) 液相色谱-质谱/质谱仪的质谱仪参数： a) 扫描方式：正离子扫描； b) 检测方式：多反应监测； c) 离子源：电喷雾离子源（ESI）； d) 电离电压：4.0 kV； e) 加热块温度：400 ； f) 温度：250 ； g) 检测器电压：1.74 kV； h) 碰撞气：氩气； i) 碰撞气压力：0.23 MPa j) 雾化气流速：3.0 L/min； k) 干燥气流速：10.0 L/min； l) 加热气流速：10.0 L/min。 2) 非商业性声明：所列参数是在岛津 LCMS-8050 液相色谱串联质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。 DB37/T 35342019 6 B B 附 录 B （资料性附录） 11 种除草剂及代谢物中英文名称、监测离子对、碰撞电压和保留时间 11种除草剂及代谢物中英文名称、监测离子对、碰撞电压和保留时间见表B.1。 表B.1 11 种除草剂及代谢物中英文名称、监测离子对、碰撞电压和保留时间 序号 中文名称 英文名称 保留时间/min 定量离子 碰撞电压/V 定性离子 碰撞电压/V 1 羟基莠去津 Hydroxyatrazin 2.30 198.00/156.10 -23.0 198.00/86.05 -17.0 2 脱异丙基莠去津 Atrazin-desisopropyl 2.72 174.00/104.05 -25.0 174.00/68.05 -28.0 3 脱乙基莠去津 Atrazin-desethyl 3.08 188.00/146.00 -20.0 188.00/104.05 -26.0 4 苯磺隆 Tribenuron-methyl 4.23 396.10/155.00 -18.0 396.10/181.00 -20.0 5 莠去津 Atrazine 4.38 216.10/174.00 -19.0 216.10/104.00 -28.0 6 苄嘧磺隆 Bensulfuron-methyl 5.07 411.00/149.00 -20.0 411.00/182.00 -20.0 7 异噁草松 Isooxadiazon 5.19 240.10/125.00 -21.0 240.10/89.10 -50.0 8 吡嘧磺隆 Pyrazosulfuron 7.02 415.00/182.00 -21.0 415.00/83.00 -51.0 10 乙草胺 Acetochlor 7.29 270.20/148.20 -17.0 270.20/133.10 -32.0 9 甲草胺 Alachlor 7.32 270.10/238.10 -10.0 270.10/163.00 -19.0 11 丁草胺 Machette 9.14 312.10/238.00 -15.0 312.10/162.00 -21.0 DB37/T 35342019 7 C C 附 录 C （资料性附录） 11 种除草剂及代谢物多反应监测（MRM）色谱图 11种除草剂及其代谢物多反应监测（MRM）色谱图见图C.1图C.11。 2.002.252.502.753.0005000001000000150000020000002500000198.0086.05(+)198.00156.10(+)羟基莠去津羟基莠去津100.0125.0150.0m/z0255075100Inten.156.1086.05 图C.1 羟基莠去津 2.252.502.753.003.25050000100000150000200000250000300000350000174.00104.05(+)174.0068.05(+)脱异丙基莠去津脱异丙基莠去津60708090100110m/z0255075100Inten.68.05104.05 图C.2 脱异丙基莠去津 2.753.003.253.503.750250000500000750000100000012500001500000188.00104.05(+)188.00146.00(+)脱乙基莠去津脱乙基莠去津100.0125.0150.0m/z0255075100Inten.146.00104.05 图C.3 脱乙基莠去津 DB37/T 35342019 8 4.004.254.504.750100000200000300000400000500000600000396.00181.00(+)396.10155.00(+)苯磺隆苯磺隆140150160170180190m/z0255075100Inten.155.00181.00 图C.4 苯磺隆 4.004.254.504.755.000500000100000015000002000000216.10104.00(+)216.10174.00(+)莠去津莠去津100.0125.0150.0175.0m/z0255075100Inten.174.00104.00 图C.5 莠去津 4.755.005.255.505.7502500005000007500001000000411.00182.00(+)411.00149.00(+)苄嘧磺隆苄嘧磺隆140150160170180m/z0255075100Inten.149.00182.00 图C.6 苄嘧磺隆 DB37/T 35342019 9 5.005.255.505.756.0005000001000000150000020000002500000300000035000004000000240.1089.10(+)240.10125.00(+)异噁草松异噁草松8090100110120m/z0255075100Inten.125.0089.10 图C.7 异噁草松 6.757.007.257.50025000050000075000010000001250000415.0083.00(+)415.00182.00(+)吡嘧磺隆吡嘧磺隆75.0100.0125.0150.0175.0m/z0255075100Inten.182.0083.00 图C.8 吡嘧磺隆 7.007.257.507.758.000250005000075000270.20133.10(+)270.20148.20(+)乙草胺乙草胺125.0130.0135.0140.0145.0150.0m/z0255075100Inten.148.20133.10 图C.9 乙草胺 DB37/T 35342019 10 7.007.257.507.758.0002500005000007500001000000270.00162.00(+)270.10238.10(+)甲草胺甲草胺150.0175.0200.0225.0m/z0255075100Inten.238.10162.00 图C.10 甲草胺 8.759.009.259.50050000100000150000200000250000300000350000312.10162.00(+)312.10238.00(+)丁草胺丁草胺150.0175.0200.0225.0m/z0255075100Inten.238.00162.00 图C.11 丁草胺 DB37/T 35342019 11 D D 附 录 D （规范性附录） 实验室重复性限（r）数据表 实验室重复性限（r）数据表见表D.1。 表D.1 实验室重复性限（r）数据表 序号 农药名称 含量 g/L 重复性限 r 含量 g/L 重复性限 r 含量 g/L 重复性限 r 含量 g/L 重复性限 r 1 羟基莠去津 0.1 0.0116 0.5 0.0635 1.0 0.108 5.0 0.813 2 脱异丙基莠去津 0.1 0.0115 0.5 0.0925 1.0 0.169 5.0 0.712 3 脱乙基莠去津 0.1 0.0123 0.5 0.0819 1.0 0.171 5.0 0.736 4 苯磺隆 0.1 0.0133 0.5 0.104 1.0 0.246 5.0 1.22 5 莠去津 0.1 0.0120 0.5 0.0980 1.0 0.142 5.0 0.685 6 苄嘧磺隆 0.1 0.0114 0.5 0.0705 1.0 0.150 5.0 0.645 7 异噁草松 0.1 0.0153 0.5 0.148 1.0 0.153 5.0 0.959 8 吡嘧磺隆 0.1 0.0078 0.5 0.0665 1.0 0.108 5.0 0.624 9 乙草胺 0.1 0.0113 0.5 0.0896 1.0 0.188 5.0 0.740 10 甲草胺 0.1 0.0142 0.5 0.117 1.0 0.165 5.0 0.702 11 丁草胺 0.1 0.0109 0.5 0.0723 1.0 0.136 5.0 0.753 DB37/T 35342019 12 E E 附 录 E （规范性附录） 实验室再现性限（R）数据表 实验室再现性限（R）数据表见表E.1。 表E.1 实验室再现性限（R）数据表 序号 农药名称 含量 g/L 再现性限R 含量 g/L 再现性限R 含量 g/L 再现性限R 含量 g/L 再现性限R 1 羟基莠去津 0.1 0.0167 0.5 0.0678 1.0 0.265 5.0 0.948 2 脱异丙基莠去津 0.1 0.0143 0.5 0.0852 1.0 0.180 5.0 0.948 3 脱乙基莠去津 0.1 0.0142 0.5 0.0834 1.0 0.182 5.0 0.915 4 苯磺隆 0.1 0.0607 0.5 0.232 1.0 0.431 5.0 2.06 5 莠去津 0.1 0.0173 0.5 0.132 1.0 0.155 5.0 0.910 6 苄嘧磺隆 0.1 0.0205 0.5 0.0855 1.0 0.178 5.0 0.664 7 异噁草松 0.1 0.0141 0.5 0.136 1.0 0.218 5.0 1.12 8 吡嘧磺隆 0.1 0.0137 0.5 0.0741 1.0 0.178 5.0 0.701 9 乙草胺 0.1 0.0116 0.5 0.0840 1.0 0.200 5.0 0.779 10 甲草胺 0.1 0.0155 0.5 0.111 1.0 0.183 5.0 0.873 11 丁草胺 0.1 0.0136 0.5 0.0691 1.0 0.140 5.0 0.959 DB37/T 35342019 13 F F 附 录 F （资料性附录） 11 种除草剂及代谢物添加水平和回收率数据 11种除草剂及代谢物添加水平和回收率数据见表F.1。 表F.1 11 种除草剂及代谢物在水中加标回收率情况 添加浓度 回收率（%） 农药名称 0.1g/L 0.5g/L 1g/L 5g/L 羟基莠去津 85.493.0 89.894.1 99.7112.8 85.699.5 脱异丙基莠去津 80.890.3 85.793.2 93.6110.8 80.490.9 脱乙基莠去津 81.191.3 84.493.9 95.4113.8 79.993.2 苯磺隆 50.269.7 54.075.9 67.1103.0 61.979.1 莠去津 71.789.2 76.383.9 86.5103.9 80.298.7 苄嘧磺隆 79.289.0 89.592.7 86.7102.2 80.395.2 异噁草松 63.380.8 68.676.5 72.288.7 72.696.4 吡嘧磺隆 80.689.7 91.394.2 87.7103.4 82.196.3 乙草胺 70.279.8 68.380.2 79.092.9 77.397.8 甲草胺 68.380.5 71.879.7 78.094.0 77.098.5 丁草胺 49.563.2 59.665.4 61.277.7 57.568.8 _