供应商来源的实验大鼠和小鼠微生物监测结果分析：以复旦大学实验动物科学部为例.pdf

DOI:10.12300/j.issn.1674-5817.2023.060实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative MedicineAug.2023,43(4)黄 缨，医学博士，高级实验师，执业兽医资格（兽医全科类），现任复旦大学实验动物科学部实验动物质量监测和基因操作平台负责人。曾任美国洛克菲勒大学研究助理、英国阿伯丁大学医学院客座讲师。主要从事实验动物微生物质量监测、小鼠胚胎操作或转基因相关操作，以及疾病动物模型与神经系统疾病发生机制研究等工作，同时承担复旦大学实验动物学课程教学工作。主持国家自然科学基金青年项目1项，参与国家自然科学基金、科技部国家新药创制和科技部 973 计划等多个科研项目。作为第一作者或通信作者在Molecular Psychiatry、Molecular Brain等国内外学术期刊发表学术论文8篇，并以副主编身份参与编写教材实验动物学1部。供应商来源的实验大鼠和小鼠微生物监测结果分析：以复旦大学实验动物科学部为例黄缨,韦思羽,蔡 莉,强苏静,李冬婷,丁玉强(复旦大学实验动物科学部,上海200032)摘要 目的对供应商来源的实验大鼠、小鼠进行常规微生物监测，为实验动物设施科学管理提供重要依据，确保相关实验结果的可靠性。方法以复旦大学实验动物科学部为例，在2021年4月到2023年4月间，按照单纯随机抽样原则，对来自7家供应商的大鼠、小鼠进行微生物质量抽检。具体参照国家标准中SPF级实验动物必须排除的微生物指标及其检测方法进行。结果抽检动物的检测总合格率为80.36%。其中SPF级大鼠抽检合格率为52.63%，SPF级近交系小鼠抽检合格率为82.76%，SPF级远交系小鼠抽检合格率为86.67%，SPF级免疫缺陷小鼠抽检合格率为86.36%。检测不合格的细菌学指标集中在金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌和啮齿杆菌H型，检出率分别为10.76%、3.16%、2.53%和0.63%。不合格的血清学指标为仙台病毒，发生率为2.53%。此外，除国家标准规定SPF级小鼠必须排除的微生物指标外，还在近交系小鼠中检测到阿米巴原虫和肠杆菌属菌株；在免疫缺陷小鼠中检测到产酸性克雷伯杆菌，检出率分别为1.15%、2.30%和4.55%。结论供应商来源的大小鼠动物中存在一定的病原体感染发生率，相关动物设施有必要强化实验动物微生物监测，确保接收和饲养动物的质量，这对提高实验结果准确性和保护实验动物从业人员的职业健康具有重要意义。关键词 微生物；监测；供应商；实验动物质量；大鼠；小鼠中图分类号 Q95-33 文献标志码 A 文章编号 1674-5817（2023）04-0347-08Microbiological Monitoring Analysis of Laboratory Rats and Mice from Vendors:Department of Laboratory Animal Science of Fudan University as an ExampleHUANG Ying,WEI Siyu,CAI Li,QIANG Sujing,LI Dongting,DING Yuqiang(Department of Laboratory Animal Science,Fudan University,Shanghai 200032,China)Correspondence to:HUANG Ying(ORCID:0009-0001-4460-4311),E-mail:ying_ABSTRACT Objective Conduct routine microbiological monitoring of laboratory rats and mice from vendors to provide an important basis for the scientific management of laboratory animal facility and ensure the reliability of relevant experimental data obtained from laboratory animals.Methods Taking the Department of Laboratory Animal Science of Fudan University as an example,between April 2021 and April 2023,rats and mice purchased from 7 vendors were sampled for microbiological quality according to the principle of simple random sampling on the arrival days of animal delivery.Then,surveillance tests were 华东会议优秀论文展 Excellent Papers at the East China Conference第一作者 黄 缨（1974），女，博士，高级实验师，研究方向：疾病动物模型与神经系统疾病发生机制。E-mail：ying_。ORCID：0009-0001-4460-431347实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative MedicineAug.2023,43(4)conducted to examine the microbiological contaminations according to the national standards of SPF laboratory animals.Results The total qualified rate was 80.36%,with 52.63%in SD rat,82.76%in inbred mice,86.67%in outbred mice and 86.36%in immunodeficient mice in details.The most frequent bacteria isolated were Staphylococcus aureus,Pseudomonas aeruginosa,Klebsilla pneumoniae and Rodentibacter heylii,and their detection rates were 10.76%,3.16%,2.53%and 0.63%,respectively.Serological assays demonstrated the highest prevalence for virus was Sendai virus,and the detection rate was 2.53%.In addition to the pathogens those must be excluded from SPF rodents,Entamoeba muris and Enterobacter spp.were also detected in inbred mice,and Klebsiella oxytoca was detected in immunodeficient mice,with the detection rates of 1.15%,2.30%and 4.55%,respectively.Conclusion There are certain incidences of pathogen infections in laboratory rats and mice from vendors,and an efficient microbiological monitoring of laboratory animals should be implemented in animal facilities,in order to eliminate pathogen infections in laboratory animals,which is required for improving the accuracy of research results and protecting the occupational health of laboratory animal practitioners as well.Key words Microbiology;Monitoring;Vendor;Laboratory animal quality;Rat;Mouse病原体感染会对实验动物健康造成很大损害，也会给科学研究的结果分析带来不确定性。部分感染实验动物的病原体还可同时感染人，因此致病微生物的存在会给实验动物从业人员（包括所有使用实验动物的研究人员和接触实验动物的饲养人员、管理人员）带来健康风险和生物安全隐患1-2。实验动物微生物监测是指利用有效实验方法对实验动物微生物状态进行检测3，是实验动物行业管理中一个非常重要的环节，目前已有一系列的法律、法规和标准加以规范性约束和指导4。生物医学研究使用的实验动物中，有相当数量是购自具有一定生产规模和严格管理措施的实验动物供应商。为了更好地对研究者使用的实验动物进行质量评估，保证所用实验动物的健康质量以及减少潜在生物危害风险，复旦大学实验动物科学部对近3年来购自不同供应商的实验大鼠、小鼠，在购入当天进行随机抽样检测，旨在为加强设施内实验动物的微生物质量管理提供依据。1材料与方法1.1动物标本来源及抽样方法所有动物检测标本均随机抽取于 2021 年 4 月2023年4月复旦大学实验动物科学部从7家实验动物供应商购入的实验大鼠、小鼠。这些供应商均具备实验动物生产许可证，其中4家位于上海，其余3家分别位于江苏、浙江和北京。1.2动物抽样包装、标本采集与检测项目在收到订购动物的当天，单纯随机抽样，然后将所抽取的动物按SPF级别进行包装后，运送至标本采样实验室。参照国家标准GB 14922.12001实验动物 寄生虫学等级及监测及GB 14922.22011实验动物 微生物学等级及监测，挑选SPF级大鼠、小鼠必须排除项目，包括细菌、病毒和寄生虫指标。1.3检测方法与结果判定体外寄生虫及体内蠕虫、原虫指标的检测和结果判定分别参照国家标准GB/T 18448.12001 实验动物 体外寄生虫检测方法、GB/T 18448.62001实验动物 蠕虫检测方法、GB/T 18448.92001实验动物 肠道溶组织内阿米巴检测方法 和 GB/T 18448.102001肠道鞭毛虫和纤毛虫检测方法进行。细菌学指标检测分别参照 GB/T 14926.12001实验动物 沙门菌检测方法、GB/T 14926.62001实验动物 支气管鲍特杆菌检测方法、GB/T 14926.92001 实 验 动 物 鼠 棒 状 杆 菌 检 测 方 法、GB/T 14926.122001 实验动物 嗜肺巴斯德杆菌检测方法、GB/T 14926.132001实验动物 肺炎克雷伯杆菌检测方法、GB/T 14926.142001实验动物 金黄色葡萄球菌检测方法和GB/T 14926.172001实验动物 绿脓杆菌检测方法进行标本采集和培养接种。采集气管分泌物或回盲肠部内容物，接种于特定培养基/板后（表1），37 培养24 h，然后根据所检测指标的菌落生长特点（表1），再挑选可疑菌落接种于特定培养板（购自上海科玛嘉微生物技术有限公司、北京陆桥技术股份有限公司），放置于细菌培养箱（购自德国Memmert公司，型号 IN110）之中，进行37 增菌培养。24 h后提取菌落DNA，并利用细菌16 S rDNA序列特点结合分子生物学技术，对细菌进行种属鉴348实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative MedicineAug.2023,43(4)定5。针对16 S区域的特异性PCR引物正向引物序列为5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3，反向引物序列为5-GGTTACCTTGTTACGACTT-3，对应扩增产物长度为1.5 kb。其余检测指标参照GB/T 14926.502001实验动物酶联免疫吸附试验原理，采用CO2吸入安乐死或戊巴比妥钠（购自美国 Sigma 公司）溶液腹腔注射（1%剂量，30 mg/kg体重）法深度麻醉动物后，采集动物血液，室温静置30 min后以4 000 r/min速率离心20 min，分离得到血清，再利用商用酶联免疫反应试剂盒（购自苏州西山生物技术有限公司）进行针对性检 测 操 作，并 利 用 酶 标 仪（购 自 德 国 Berthold Technologies公司，型号Tristar 5）扫描结果。所有阳性标本都会进行二次检测以确认结果，排除意外因素产生的假阳性。本研究实验方案经复旦大学 实 验 动 物 科 学 部 动 物 伦 理 委 员 会 审 核 批 准（202304018Z）。1.4图片采集及作图病原体图片由显微镜（购自日本 Olympus 公司，型号SC180或SZ61）采集拍摄。检测合格率=抽检合格动物数/抽检动物总数100%。病原体检出率=携带有病原体的动物数/抽检动物总数100%。通过GraphPad Prism 8和Adobe Photoshop CC 2019软件进行结果作图。2结果2.1抽检合格率近3年一共抽检158只SPF级动物，其中SD大鼠19只，近交系小鼠87只，远交系小鼠30只，免疫缺陷表1 SPF级大鼠、小鼠必须排除细菌培养及相对应的菌落特征汇总Table 1 Colony characteristics and Gram nature of bacteria excluded in SPF mice/rats on nutrient agar plates细菌Bacteria支气管鲍特杆菌Bordetella bronchiseptica鼠棒状杆菌Corynebacterium kutscheri嗜肺巴斯德杆菌Pasteurella pneumotropica沙门菌Salmonella spp.金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus肺炎克雷伯菌Klebsiella pneumoniae绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa采样动物Animal大鼠大鼠、小鼠大鼠、小鼠大鼠、小鼠大鼠、小鼠大鼠、小鼠大鼠、小鼠革兰染色Gram staining-+-+-培养物质Sample呼吸道分泌物呼吸道分泌物呼吸道分泌物回盲肠部内容物回盲肠部内容物回盲肠部内容物回盲肠部内容物第一天接种Inoculation on day 1培养基Culture medium血平板DHL平板血平板血平板DHL平板高盐甘露醇DHL平板NAC液37 培养24 h后的典型菌落特点Colony characteristics after 24 h at 37 直径Diameter/mm1210.51211513颜色/色泽Color/luster灰白色无色半透明白色无光泽灰白色或露滴样无色半透明，带黑心或全黑黄色凸起淡粉色,大而隆起浑浊均匀生长溶血性Hemolysis轻微-溶血/-溶血-溶血，或轻微-溶血/其他Other/触之较硬，不易乳化聚集时质地似奶油表面光滑湿润周边培养基从红色变黄色光滑湿润，呈黏液脓汁状菌落扁平，可产绿色色素第二天再接种Inoculation on day 2培养基Culture medium血平板血平板血平板血平板血平板血平板NAC平板37 培养24 h后是否-溶血-Hemolytic reaction after 24 h at 37 否否否否是（白或金黄圆形凸起菌落）否/注：+，阳性；-，阴性；/，不适合或没有需要特别说明的特性；DHL，胆硫乳琼脂；NAC，N-乙酰-L-半胱氨酸。Note：+，positive；-，negative；/，unsuitable or no special characteristics；DHL，deoxycholate hydrogen sulfide lactose；NAC，N-acetyl-L-cysteiner.349实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative MedicineAug.2023,43(4)小鼠22只。检测了SPF级大鼠、小鼠必须排除的全部病原体指标，抽检动物检测总合格率为 80.38%。其中，SD大鼠、近交系小鼠、远交系小鼠和免疫缺陷小鼠的抽检合格率分别为 52.63%、82.76%、86.67%和86.36%。2.2各种病原体检出率在对抽检动物进行体内外采样后，显微镜下未观察到体外节肢动物，也未发现有蠕虫、纤毛虫或鞭毛虫。采用培养法及结合分子生物学方法对包括沙门菌、鼠棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌、嗜肺巴斯德杆菌（包括嗜肺啮齿杆菌和啮齿杆菌H型）和支气管鲍特杆菌这8种细菌学指标进行检测时，发现有17只动物体内检出金黄色葡萄球菌，5只动物检出绿脓杆菌，4只动物检出肺炎克雷伯杆菌，1只动物体内检测出啮齿杆菌H型，不合格指标的检出率分别为 10.76%、3.16%、2.53%和0.63%（表2，图1）。其中，近交系小鼠中，肺炎克雷伯杆菌和金黄色葡萄球菌的检出率分别为2.30%和14.94%；远 交 系 小 鼠 中，绿 脓 杆 菌 的 检 出 率 为13.33%；免疫缺陷小鼠中，肺炎克雷伯杆菌和绿脓杆菌的检出率分别为9.09%和4.55%；SD大鼠中，金黄色葡萄球菌和啮齿杆菌 H 型的检出率分别为 21.05%和5.26%（表3）。表2 20212023年供应商来源的SPF级大鼠、小鼠必须排除的病原体指标检测结果Table 2 Pathogen test results of SPF mice/rats from vendors during 2021-2023 according to national standards微生物检测指标Pathogens tested寄生虫指标（镜检）Parasites(microscopic examination)体外In vitro体内In vivo细菌学指标（培养/分子生物学方法）Bacteria(culture/molecular biology methods)支气管鲍特杆菌 Bordetella bronchiseptica*鼠棒状杆菌 Corynebacterium kutscheri嗜肺啮齿杆菌 Rodentibacter pneumotropicus啮齿杆菌H型 Rodentibacter heylii沙门菌 Salmonella spp.金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus肺炎克雷伯杆菌 Klebsiella pneumoniae绿脓杆菌 Pseudomonas aeruginosa病毒等指标（酶联免疫吸附实验）Viruses,etc(ELISA)汉坦病毒 Hantavirus*小鼠肝炎病毒 Mouse hepatitis virus#鼠痘病毒 Ectromelia virus#仙台病毒 Sendai virus小鼠肺炎病毒 Pneumonia virus of mice呼肠孤病毒III型 Reovirus type 3小鼠细小病毒 Minute virus of mice#大鼠细小病毒Rat parvovirus*大鼠冠状病毒 Rat coronavirus*支原体 Mycoplasma spp.泰泽病原体 Tyzzers organism弓形体 Toxoplasma gondii节肢动物 Ectoparasites蠕虫 All Helminths鞭毛虫 Flagellates纤毛虫 CiliatesRV株H-1株检测数No.of testedanimals1581581581581915815815815815815815819139139158158158139191919158158158合格数（合格率/%）No.of qualified animals(rate/%)158(100)158(100)158(100)158(100)19(100)158(100)158(100)157(99.37)158(100)141(89.24)154(97.47)153(96.84)19(100)139(100)139(100)154(97.47)158(100)158(100)139(100)19(100)19(100)19(100)158(100)158(100)158(100)检出数（检出率/%）No.of positiveanimals(rate/%)0(0)0(0)0(0)0(0)0(0)0(0)0(0)1(0.63)0(0)17(10.76)4(2.53)5（3.16)0(0)0(0)0(0)4(2.53)0(0)0(0)0(0)0(0)0(0)0(0)0(0)0(0)0(0)注：*只有大鼠检测的项目；#只有小鼠检测的项目；其余项目为大鼠、小鼠都检测的项目。Note：*tested on rats；#tested on mice；the others tested on rats and mice.350实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative MedicineAug.2023,43(4)利用酶联免疫方法对包括汉坦病毒、小鼠肝炎病毒、鼠痘病毒、仙台病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒III型、小鼠细小病毒、大鼠细小病毒RV株和H-1株、大鼠冠状病毒、支原体、泰泽病原体和弓形体这13种指标进行检测时，发现4只动物血清中有仙台病毒抗体存在，检出率为2.53%（表2），而其在SD大鼠中的检出率为21.05%（表3）。此外，除国家标准中规定的SPF级小鼠必须排除的病原体指标外，还在近交系小鼠中检测到1只动物携带有阿米巴原虫，2只动物携带有肠杆菌属菌株，分别为神户肠杆菌（Enterobacter kobei）和阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae），并在1只免疫缺陷小鼠中检测到产酸克雷伯杆菌，检出率分别为1.15%、2.30%和4.55%（图1，表3）。3讨论实验动物作为生命科学重要的研究工具和工作基础，被广泛应用于医学、药学等众多领域。但是实验动物所携带的一些病原微生物或寄生虫，不仅可能对动物本身健康造成伤害，也影响研究结果的准确性和可重复性，部分病原体还会传播给人并导致人体疾病。因此，对实验动物进行日常的微生物检测是非常必要的。本次监测所抽检的供应商来源实验动物，整体合格率高于80%，且小鼠合格率高于大鼠，被检测出病原体感染的动物没有呈现明显的临床感染症状。本次检测的病原体中，以金黄色葡萄球菌的检出率最高（10.76%），其中SD大鼠的检出率最高（21.05%），其次为近交系小鼠（14.94%），免疫缺陷小鼠也有发现（4.55%）。金黄色葡萄球菌可引起动物和人的多种化脓性炎症，包括败血症等严重全身感染6。其他检测出的病原体还包括肺炎克雷伯杆菌、绿脓杆菌、啮齿杆菌H型和仙台病毒。肺炎克雷伯杆菌可引起动物或人的严重呼吸道感染7-8；本次监测中，这个病原体在2.30%的近交系和9.09%的免疫缺陷小鼠中都有检出。绿脓杆菌可对动物或人造成例如结膜炎、伤口化脓、注：ac分别为肠杆菌、产酸克雷伯杆菌、肺炎克雷伯杆菌在DHL琼脂平板上的生长情况（标尺大小为2 mm）；de分别为金黄色葡萄球菌、啮齿杆菌H型在血平板上的生长情况（标尺大小为2 mm）；f为绿脓杆菌在NAC琼脂平板上的生长情况（标尺大小为2 mm）；g为阿米巴原虫在回盲部内容物中的图片（标尺大小为10 m）。三角箭头代表病原体菌落或虫体。Note：a-c,Colonies of Enterobacter spp.,Klebsiella oxytoca,and Klebsiella pneumoniae growth on DHL agar plates,respectively;d-e,Colonies of Staphylococcus aureus and Rodentibacter heylii growth on blood plates，respectively;f,Colonies of Pseudomonas aeruginosa growth on NAC agar plates;g,Image of Entamoeba muris in the ileocecal region.Triangular arrow indicates the bacterial colony or amoeba body.Scale bar=2 mm(a-f),10 m(g).图1 20212023年供应商来源的SPF级大鼠、小鼠细菌或寄生虫检测阳性代表图片Figure 1 Representative images of positive bacteria or parasites detected in SPF mice/rats from vendors during 2021-2023351实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative MedicineAug.2023,43(4)胃肠道溃疡和败血症等症状7-9；本次监测中也有13.33%的远交系抽检小鼠检测到绿脓杆菌的存在。SD大鼠中除了检出有金黄色葡萄球菌存在外，还有5.26%的动物中检测到啮齿杆菌H型感染，21.1%的动物检测到仙台病毒感染。啮齿杆菌H型是属于嗜肺巴斯德杆菌中的一种10，可引起机体的化脓性炎症。仙台病毒则可引起机体的出血性肺部感染，而仙台病毒和啮齿杆菌H型的混合感染甚至可引起机体的致命性肺炎7。此次在多家供应商的动物中都检测出病原体阳性指标，与之前北京地区供应商动物检测结果11比较，虽然不合格指标存在一定差异，但相同病原体（例如仙台病毒和金黄色葡萄球菌）的检出率都要低于北京地区，推测不同病原体的流行情况存在很大的地域或设施差异性。之前还有研究显示上海市的大鼠全部感染指数高于小鼠3，本次监测结果也显示大鼠的检测合格率明显低于小鼠。目前，实验小鼠的使用量明显高于大鼠，动物供应商更关注小鼠质量控制，这可能是大鼠合格率低于小鼠的主要原因。本研究观察阶段正好包含新型冠状病毒肺炎在供应商所在地严重流行时期，虽然大量的动物生产人员出现健康异常可能会影响供应商的正常动物生产质量，但考虑到阳性指标检出日期实际上主要集中在2021年4月到2022年2月之间，而且在2022年上半年上海的新型冠状病毒疫情严重流行时期，复旦大学实验动物科学部也被迫暂停或极大减少了实验动物购买，相应的动物抽检及监测也随之暂停或减少。此外，对于检测出有阳性指标的大小鼠供应商，还会采取暂停数月表 3 20212023年供应商来源的SPF级大鼠、小鼠检出病原体在不同动物群中的分布情况Table 3 Distribution of pathogens detected in different groups of SPF mice/rats from vendors during 2021-2023项目Pathogens检出总情况Summary国家标准规定必须排除病原体 Pathogens required free of animals in national standards肺炎克雷伯杆菌Klebsiella pneumoniae金黄色葡萄球菌Staphylococcus ureus绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa啮齿杆菌H型Rodentibacter heylii仙台病毒Sendai Virus非国标规定检测病原体 Pathogens unrequired free of animals in national standards阿米巴原虫Entamoeba muris产酸克雷伯杆菌Klebsiella oxytoca肠杆菌属Enterobacter spp.SD 大鼠SD rats检测数No.of tested animals191919191919191919检出数(率/%)No.of positive(rate/%)9(47.36)0(0)4(21.05)0(0)1(5.26)4(21.05)0(0)0(0)0(0)合格率/%Rate of qualified/%52.6310078.9510094.7478.95100100100近交系小鼠Inbred mice检测数No.of tested animals878787878787878787检出数(率/%)No.of positive(rate/%)15(17.24)2(2.30)13(14.94)0(0)0(0)0(0)1(1.15)0(0)2(2.30)合格率/%Rate of qualified/%82.7697.7085.0610010010098.8510097.70远交系小鼠Outbred mice检测数No.of tested animals303030303030303030检出数(率/%)No.of positive(rate/%)4(13.33)0(0)0(0)4(13.33)0(0)0(0)0(0)0(0)0(0)合格率/%Rate of qualified/%86.6710010086.67100100100100100免疫缺陷小鼠Immunodeficient mice检测数No.of tested animals222222222222222222检出数(率/%)No.of positive(rate/%)3(13.64)2(9.09)0(0)1(4.55)0(0)0(0)0(0)1(4.55)0(0)合格率/%Rate of qualified/%86.3690.9110095.4510010010095.45100352实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative MedicineAug.2023,43(4)从该供应商处购买阳性动物相同品系动物的措施。所以，疫情所带来的不可抗力可能对本次研究相关动物检测的统计及分析结果没有很大影响。免疫缺陷动物由于自身特点，更容易受到病原体的感染并产生严重的临床症状。此次抽检发现免疫缺陷动物的合格率相对较高，可能也是因为供应商对此类动物的质量控制更严格。但需要指出的是，由于机体抗体的产生与T、B细胞的正常功能有很大关联12，在监测免疫缺陷动物的一些病原体携带情况时，如果单纯检测血清中抗体的水平，可能会因为动物本身免疫系统问题而出现假阴性结果。因此，在分析检测结果时，一定要结合动物体临床表征来进行综合分析，必要时采用其他检测方法，例如检测组织中特定抗原的水平或是特定核酸的含量，才能更好地反映此类动物的真实健康状况。此外，少量抽检动物中还检测到有产酸克雷伯杆菌、肠杆菌属菌株和阿米巴原虫的存在。产酸克雷伯杆菌可引起实验动物化脓性中耳炎、肺炎等疾病13，并与肠杆菌属细菌、金黄色葡萄球菌等类似，都属于条件性致病菌，是医院患者发生院内感染的主要原因之一14-15。目前对于鼠内阿米巴原虫的致病性研究非常少。同属的内阿米巴属原虫的种类很多，但目前发现能引起人类致病的种类并不多，一般也被认为是条件性致病原体，可导致机体发生腹泻、侵袭性结肠炎、肝脓肿和转移性感染，严重时可致死16-17。实验动物科学研究中，通常会因为实验操作而使整个动物体处于亚健康状态。同时，一些实验动物本身就是免疫缺陷动物，其更容易受到病原体的侵蚀而表现出不良反应。虽然这3种检测到的病原体并不是国家标准规定的SPF级实验动物必须排除类别，但也应引起实验动物从业人员关注。综上，从供应商购买的实验大鼠、小鼠中，有一定比例的动物存在细菌、病毒或寄生虫感染。为了确保科学研究的顺利进行和相关实验结果的准确性，以及更好保障实验动物从业人员的职业健康，实验动物饲养设施有必要对购入的实验动物进行检测，并设置一定时间的隔离检疫期。及早发现隐患并合理处置是首选的应对方式。同时，也有必要将检测结果反馈给动物供应商，以提醒和督促供应商强化动物的质量控制。通过实验动物使用方和生产供应方的密切合作，才能更好保证科学研究的顺利进行，提高相关生物安全性。致谢：感谢本部负责订购和接收实验动物的沈园兴老师及黄灵红老师，也感谢中国科学院分子细胞卓越创新中心动物实验技术平台吴宝金老师、陈国元老师和纪文韬老师在本次实验动物检测工作中提供的帮助和建议。医学伦理声明Medical Ethics Statement本研究涉及的所有动物采样及检测实验过程严格遵守实验室管理制度，并通过复旦大学实验动物科学部动物伦理委员会审核批准（202304018Z）。All samples of this study were collected in animals and tested strictly following laboratory regulations,and approved by the Animal Ethics Committee of the Department of Laboratory Animal Science at Fudan University(Approval No.202304018Z).作者贡献 Author Contribution 黄缨负责实验设计、采样、实验操作、实验指导、文章写作；韦思羽、蔡莉、强苏静和李冬婷负责采样及实验操作；丁玉强负责文章修改及建议。利益声明 Declaration of Interest 所有作者均声明本文不存在利益冲突。参考文献 References1袁喆,王纯睿,罗华婷,等.感染性疾病研究新进展述评及展望J.西部医学,2023,38(1):1-5,13.DOI:10.3969/j.issn.1672-3511.2023.01.001.YUAN Z,WANG C R,LUO H T,et al.Review and prospect of new progress in research on infectious diseasesJ.Med J West China,2023,38(1):1-5,13.DOI:10.3969/j.issn.1672-3511.2023.01.001.2LIBERTUCCI J,YOUNG V B.The role of the microbiota in infectious diseasesJ.Nat Microbiol,2019,4(1):35-45.DOI:10.1038/s41564-018-0278-4.3冯丽萍,陶凌云,周洁,等.上海地区实验动物病原体感染指数分析J.中国实验动物学报,2016,24(3):309-312.DOI:10.3969/j.issn.1005-4847.2016.03.018.FENG L P,TAO L Y,ZHOU J,et al.Analysis of laboratory animal pathogen infection indexes in Shanghai areaJ.Acta Lab Animals Sci Sin,2016,24(3):309-312.DOI:10.3969/j.issn.1005-4847.2016.03.018.4罗银珠,闵凡贵,王静,等.病原微生物防控在实验动物设施管理与生物安全控制中的作用探讨J.实验动物与比较医学,2021,41(5):443-449.DOI:10.12300/j.issn.1674-5817.2020.219.LUO Y Z,MIN F G,WANG J,et al.Prevention and control