洁净区区环境检测及控制.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,LOGO,LOGO,LOGO,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,LOGO,LOGO,术语及定义,1.,洁净等级,根据国际标准,ISO 14644-1,规定，以单位容积空气中发现的粒子的数量来确定洁净等级。,GMP-2010,中将洁净区分为四个级别：,A,、,B,、,C,、,D,。,2.,洁净室,根据需要对空气的传播粒子和其他因素进行控制（例如气流速度和方向、温度、湿度、压力、微生物污染等）的一个密闭区域。,3.,洁净室三态：,空态,：已经建造完成并可以投入使用的洁净室，它具备所有相关的功能，但是室内没有任何生产设备和操作人员。,静态,：室内各种设备安装完毕，可以随时投入运行的洁净室。但是室内没有操作人员。,动态,：处于正常使用的洁净室，包括所有的设备和操作人员。,洁净生产环境污染风险的控制,空气中微生物基本为革兰氏阳性菌，它们有可能形成芽孢使其耐热性增大。这类芽孢一旦被尘埃包藏，耐热性比单独存在状态上升一个数量级。革兰氏阳性菌芽孢有厚的皮层结构，只含核酸及少量萌发必需物，含水量极低在灭菌过程中呈现很强耐热性。,为防止空气中耐热菌污染生产系统，需要将生产系统置于洁净环境下。净化环境的建立和维持，主要依赖：,1.,高效过滤器有效地控制送入室内空气的洁净度；,2.,合理的气流组织排除已经发生的污染,通过反复的循环就可以把污染控制在一个稳定的水平上，这个水平就应该低于相应的洁净度级别；,3.,通过调整压力差和气流走向的平衡来达到防止外界污染或交叉污染从门或各种缝隙部位侵入室内的目的。,洁净区环境监测前的准备,1.,在进行测试之前，应先确定待测区域、测试状态、仪器设备、测试规程、采样点位置、评价标准以及相关注意事项。,2.,建立环境监测程序。,3.,所有仪器设备在未进入被测区域时，应保证其符合性、有效性和安全性。,4.,所有的工作人员，包括与测试、维护有关 的人员，应该定期接受与洁净区生产有关的 培训，其中包含涉及到的卫生知识和基本微生物知识。,温湿度的监控,室内温湿度主要影响产品工艺条件和细菌的繁殖条件、以及由操作舒适度带来的对产品质量的影响；,测量位置,空调机送回风温度；,室内代表性点;,室中心；,室内温湿度计处,(,与显示仪表比较,),；,测点选择高度应离地面0,.8m,，距设备周围,0.8m,以外处，并应避开出、回风口处；点间距不应大于,2m,，点数不应少于,5,个。,测试仪器,便携式温湿度计,判断标准,符合,GMP,规范和具体工艺提出的温湿度要求。,GMP,-2003,版,洁净室,(,区,),的温度和相对湿度应与药品生产工艺要求相适应。无特殊要求时，,温度应控制在,18-26,，相对湿度控制在,45-65%,。,GMP-2010,版,对温湿度无要求，只要满足人员舒适度即可。生产工艺对温湿度有特殊要求时，应根据工艺要求确定。,空气压差,的监控,差压检测对象,：区域压差、房间压差,压差标准,：外界环境与洁净室、不同功能洁净室之间的压差均应,10,Pa(2010版GMP）,压差的测试条件,应在所有的门都关闭的条件下，由高压向低压、由平面布置上与外界最远的里间房间开始，依次向外测试；有孔洞相通的不同等级相邻的洁净室（区），其洞口处宜有合理的气流流向等。,空气差压在洁净室管理中的作用,在门窗关闭的情况下，防止洁净室外的污染由缝隙掺入洁净室内；,在门开启时，保证有足够的气流向外流动，尽量削减由开门动作和人的进入瞬时带进来的气流量，并在以后门开启状态下，保证气流方向是向外的，以便把带入的污染减小到最低程度。,室内换气次数监控,室内换气次数的作用：,有效地阻止室外的污染侵入室内和保持室内的压力；,形成良好的气流组织，迅速有效地排除室内污染；,控制污染源，减少污染发生量,测试仪器,风速测试仪；,测试方法,风口法,(,现场测定，不在风管上打孔，不进,夹层,),；,离送风面约,15-30cm,处进行测试,取样数量为该层流装置送风面的面积的,10,倍的平方,根，但不小于,4,个，每个过滤器或,FFU,(风机过滤器机组）出口必须有一,个测试点,取样点按送风面平均分布,标准：,水平层流：,0.45,m/s20%；,垂直层流：,0.35,m/s20%；,单向流系统在其工作区域必须均匀送风，风速为,0.3 6 0.54m/s(,指导值）,。应当有数据证明单向流的状态并经过验证。,数据处理,室内总风量：,L=,该室各风口平均风速,(m/s),室内风口截面积,F(m2)3600(m3/h);,换气次数：,N=L/,房间体积,V(m3)(,次,/,时,),；,判断与调整,换气次数应符合设计要求，否则结合差压调整。,标准：,GMP,验证指南,-2003,A,级、,B,级：只测风速；,C,级：,25,次；,D,级：,15,次。,室内气流流型的监控,气流流型测试的目的是确定在控制区层流洁净空气系统保护下，气流与机械设备的相互作用，选择和改善气流流型，使之产生最小的湍流和最大的清除能力；,测试仪器,发烟器，风速仪，,35mm,照相机或摄像机；,检测方法：,用发烟器或悬挂单丝线的方法逐点观察、记录（有条件的话可以拍摄）气流流型，并在测点布置的剖面图上标出流向。,用摄像机拍摄烟雾流动方向层流：,单向平行移动,测点布置,垂直单向流（层流）洁净室选择纵、横剖面各一个，以及距地面高度,0.8m,、,1.5m,的水平面各,1,个；,水平单向流（层流）洁净室选择选择纵剖面和工作,区高度水平面各,1,个，以及距送回风墙面,0.5m,和房,间中心处等,3,个横剖面，所有面上的测点间距均为,0.21m,；,乱流洁净室选择通过代表性送风口中心的纵、横剖面和工作区高度的水平面各,1,个，剖面上测点间距,为,0.20.5m,，水平面上的测点间距为,0.51m,，两个,风口之间的中线上应有测点；,检测应在空气净化调节系统或层流净化装置正常运行并使气流稳定后进行。,检测送风口或层流净化装置的风速符合规定要求。检,查压差表读数，确认洁净室压差符合规定要求；,用发烟器在规定的测点以及,“典型位置”（产品或原料,在工作环境中暴露的上方及四周等）释放可见的烟,雾，并随气流形成可见的流线。用发烟器或悬挂单丝,线的方法逐点观察、记录（有条件的话可以拍摄）气,流流型，并在测点布置的剖面图上标出流向；,当烟雾流过,“典型位置”时拍摄下流线。烟雾应能够流,经这些,“典型位置”，而不因空气的湍流造成回流。否,则应对空气净化调节系统、设备位置或物料摆放位置,进行调整。,在操作人员进入层流保护区内进行操作时摄下流线。,操作时烟雾应不会回流到,“典型位置”的任何一点，,否则必须建立防止污染的规程或措施；,确认所产生的湍流是否会将污染物从其它地方携带,到流水线的关键操作点。如果能，调整气流以得到,最小的湍流并迅速清洁。如果不能防止湍流，则必,须建立不同的空气动力学模型（如在灌装设备上使,用散流器）。,可接受标准,应绘出气流流型图，对流型图进行分析解释。,悬浮粒子限度检测,悬浮粒子,用于空气洁净度分级的空气悬浮,粒子尺寸范围在,0.1m-1000m,的固体或液体粒子。对于悬浮粒子计数测量仪，一个微粒球的面积或体积产生一个响应值，不同的响应值等价于不同的微粒直径。,2010版,GMP,对环境悬浮粒子监控有静态和动态两个标准。,悬浮粒子的标准,2010,版,GMP,空气悬浮粒子的标准规定如下表：,方法提要,(GBT1629,2,-2010),采用计数浓度法，即通过,测试洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某粒径的悬浮 粒子数，来评定洁净室（区）的悬浮粒子洁净度级别。,设备,及原理,：,激光粒子计数器,(,用于粒径大于或等于,0.1,m,的悬浮粒子计数）,：,空气中的悬浮粒子在激光的照射下产生衍射现象，衍射光强度与悬浮粒子的体积成正比。,检测步骤：,（一）测试前采样布点：,根据,受检区域,的洁净级别及检测面积，结合平面图确定采样布点方案。,1.,采样点数的确定,最少采样点数目可在以下两种方法中任选一种：,(1)N,L,=A,1/2,式中：,N,L-,最少采样点,A-,洁净室或被控洁净室的面积，单位为平方米（,m,2,),(2),最少采样点数可从表,1,中查到,（,SOP,采用此法,）,2.,采样点的位置,采样点一般在离地面,0.8m,高度的水平面上均匀布置。,采样点多于,5,点时，也可以在离地面,0.8m,1.5m,高度的区域内分层布置，但每层不少于,5,点。,采样点布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于稀疏，下列采样点的图示图,1,可作参考。,注：,为采样点。,3.,采样次数的限定：对任何小洁净室或局部空气净化区域，总采样次数不得 小于,5,次。,4.,采样量：不同洁净度级别每次最小的采样量见表,2,。,（Y09-3016激光尘埃粒子计数仪采样量：2.83L/min）,表,2,最小采样量,洁净度级别,采样量，,L/,次,0.5m,5m,A,级,5.66,8.5,C,级,2.83,8.5,D,级,2.83,8.5,5.,采样注意事项：,在确认受检区域温湿度和压差达到要求后，方可进行采样。,对于单向流，计数器采样管口朝向应正对气流方向，对于非单向流，采样管口宜向上。,布置采样点时，应避开回风口。,采样时，测试人员应在采样口的下风侧。,（二）检测,（三）结果 计算,1.,采样点的平均粒子浓度,A=,C,1,+C,2,+,+,C,N,N,式中：,A,某一采样点的平均粒子浓度，粒,/m,3,;,C,i,某一采样点的粒子浓度（,i=1,，,2,，,，,N,），粒,/m,3,；,N,某一采样点上的采样次数，次。,2.,平均值的均值,M=,A,1,+A,2,+,+A,L,L,式中：,M,平均值的均值，即洁净室（区）的平均粒子浓度，粒,/m,3,；,Ai,某一采样点的平均粒子浓度（,i=1,，,2,，,，,L,），粒,/m,3,；,L,某一洁净室（区）内的总采样点数，个。,3.,标准偏差,SE=,式中：,SE,平均值均值的标准误差，粒,/m,3,。,（,A,1,-M,）,2,+,（,A,2,-M,）,2,+,（,A,L,-M,）,2,L,（,L,-,1,）,4.,置信上限,:,从正态分布抽样得到的实际值按给定的置信度(此处为95%）计算得到的估计上限将大于实际均值，则称计算得到的这一均值估计上限为置信上限。,UCL=M+tSE,（,4,）,式中：,UCL,平均值均值的,95%,置信上限，粒,/m,3,；,t,95%,置信上限的,t,分布系数，见表,3,。,表,3 95%,置信上限的,t,分布系数,采样点数,L,2,3,4,5,6,7,8,9,9,t,6.31,2.92,2.35,2.13,2.02,1.94,1.90,1.86,注：当采样点数多于,9,点时，不需要计算,UCL,。,(,四）,结果,判断：,判断悬浮粒子洁净度级别应依据下述二个条件。,1.,每个采样点的平均粒子浓度必须低于或等于规定的级别界限，即,Ai,级别界限。,2.,全部采样点的粒子浓度平均值均值的,95%,置信上限必须低于或等于,规定的级别界限，即,UCL,级别界限。,3.,判定标准（,GMP2010,版）,洁净区（室）环境的微生物监控,洁净环境的微生物控制，主要使用传统的,浮游菌采样检测法,和,沉降菌测试法,来判断：,浮游菌检测,浮游菌采样仪器,工作原理,抽真空，空气进入；,微生物与培养基撞击后粘在培养基上面；,取出培养皿，送检；,采样速度快，待机时间长；,减少菌落的重叠，,无需对结果进行校正，,微生物还原率高；,可根据需要设定取样体积和延时时间,专门的浮游采样器,;,测试前应检查采样器培养皿等,消毒,气流速度和采样时间,现场检测人员：,2,人，测点高度距地面,0.8,米，测点,布置按,GB/T16293,标准，一般为均匀布置，多于,5,点,可以分层；每测点采样次数不少于,1,次。,35,培养不小于,48,小时后计数。,浮游菌检测标准,沉降菌检测,方法提要：（,GBT16294-2010,）,本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。,测试状态,:,静态和动态两种状态均可进行测试。,静态测试时，室内测试人员不得多于,2,人。,沉降菌测试前，被测洁净室（区）由使用者决定是否需要预先消毒。,测试时间、采样布点方法、采样点数的确定,与悬浮粒子检测方法相同。,采样点数目除了应满足最少采样点数，同时必须满足最少培养皿数。,表,4,最少培养皿数,洁净度级别,最少培养皿数,A,级,14,C,级,2,D,级,2,备注：,SOP,中,A,级洁净区培养皿数暂定为,2,。,测试步骤：,测试前培养皿表面必须严格消毒。,将培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿表面暴露在空气中。,静态测试时，培养皿暴露时间为,30min,以上；,动态测试时，培养皿暴露时间为不大于,4h,。,全部采样结束后，将培养皿倒置于,30-35,恒温培养箱中培养，时间 不少于,2d,。,每批培养基要有对照试验，检验培养基本身是否污染，可每批选定,3,只培养皿作对照培养。,菌落计数：,用肉眼对培养皿上所有的菌落直接 计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用,5-10,倍放大镜检查，有否遗漏。,若平板上有,2,个或,2,个以上的菌落重叠，可分辨时仍以,2,个或,2,个以上菌落计数。,结果计算：,用计数方法得出各个培养皿的菌落数，平均菌落数的计算，见下面公式,M1+M2+,M,n,M=,n,式中：,M,平均菌落数；,M,1,1,号培养皿菌落数；,M,2,2,号培养皿菌落数；,M,n,n,号培养皿菌落数；,n,培养皿总数。,结果判断：,用平均菌落数判断,符合,医药工业洁净室,要求的受检区域,空气中的微生物，,受检区域,内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。,洁净度级别,沉降菌,/,皿,A,级,1,C,级,50,D,级,100,监控报警限度标准和纠偏限度标准,对于微生物测试的取样频次，如果出现下列情况应考虑修改，在评估以下情况后，也应确定其它项目的测试频次：,连续超过报警限度和纠偏限度；,停工时间比预计延长；,关键区域内发现有传染的试剂；,在生产期间，空气净化系统进行任何重大的维修；,环境设施的限制引起工艺的改变；,日常操作记录反映出倾向性的数据；,净化和消毒规程的改变；,引起生物污染的事故等,更衣效果检测,原理：,本测试方法采用接触碟法，即通过将表面培养基（接触碟）按压在更衣后的洁净服表面，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以表面培养基的菌落数来判定洁净服上的活微生物数，并以此来评定洁净服更衣效果。,测试步骤：,1,.标记：按照采样人数、采样点及每点采样平皿数对表面培养基进行标记。,每次至少检测,5,人；更衣效果检测采样点包含：手套、胸口、前臂、帽兜额头处、颈部,、,靴子与工作裤接口处；每个采样点采样,2,个平皿。,2,.,采样：在人员手消毒、更衣戴上手套后，进风淋室前进行。用表面培养基直接按压洁净服及手套表面进行采样。,3,.,培养：将采样后的平皿放置在电热恒温培养箱内,35,培养,48h,后观察计数。,结果判断：,胸口、前臂、帽兜、颈部、靴子与工作裤接口处的检测结果平均值（,cfu/,皿）应,5,，手套检测结果平均值（,cfu/,皿）应,1,。,紫外消毒及臭氧消毒检测,紫外消毒,1.物理学指标：即剂量不小于100000W.s/cm2,辐照剂量=强度（w/cm）照射时间（s）,2.生物学检测:杀灭率99.9%,3.检测方法：紫外辐照计距离紫外灯正下方1m检测。,4.合格标准,a.紫外线灯在万级洁净厂房开启30 min后，能达到空气消毒效果；,b.紫外线灯在传递窗间开启30 min后，能达到物料表面灭菌效果。,臭氧消毒,1,.臭氧消毒工艺流程：,运行空调净化系统关闭新风进口关闭回风排放阀门打开臭氧发生器（60min）检测消毒效果,2.合格标准：,a.在臭氧发生器开启后30min内洁净室内臭氧浓度10ppm（19.63mg/m3）,b.臭氧浓度达到10ppm时开始计时，直到臭氧发生器停止工作臭氧浓度降至10ppm以下终止，时间应60min；臭氧灭菌后，臭氧浓度衰减至安全标准0.15ppm 所需的时间应30min,c.检测灭菌前后洁净区表面菌落及沉降菌，万级表面菌落/沉降菌菌落数（CFU/皿）平均3,洁净,/,无菌区域消毒灭菌,消毒,对付微生物的一种手段；其目的是消除其活性或者破坏微生物。在地上、墙上、玻璃上、固定管路的外部、贮罐外部、盥洗盆、人员的手表面喷洒消毒剂；,注意：消毒可以使孢子、微生物产生耐受性；,灭菌,以完全杀灭微生物,(,包括,芽孢和顽固的有机体,),为目的；消灭一切有机体以及完全铲除其恢复活性能力的手段。,洁净室常用消毒剂,醇类：醇类消毒剂使微生物的蛋白质变性，在没有水的情形下，蛋白质不易被变性，在乙醇中加入一些水会使杀菌效力更佳。,酚类化合物：广谱抑菌，对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌以及真菌均有杀伤作用。酚类消毒剂适宜用水溶液或含乙醇的水溶液配制。有效浓度为,400 ppm,到,1300,ppm之间。,季铵盐类化合物：季铵盐类化合物在酸性或碱性环境均能杀死细菌或真菌，在碱性环境中的杀菌效力稍强一些。如新洁尔灭溶液,(0.05%,0.1%,的苯扎溴铵,溶液,),液体灭菌剂和杀孢子剂：次氯酸钠、二氧化氯、过氧化氢、戊二醛、甲醛和过氧乙酸等；,消毒剂定期交替使用不同消毒剂是为了防止环境中微生物对同一种消毒剂产生抗性影响实际的消毒效果。,无菌生产场地常用化学熏蒸对区域进行灭菌，亦称大消毒；,灭菌介质,甲醛气体,/,戊二醛气体（分中和与不中和处理）；,石碳酸与乳酸混合气体,(1:1),；,气化双氧水；,臭氧、紫外线；,灭菌方法对室内换气速度的影响,气体熏蒸的废气排除速度与熏蒸方法有关；,气体熏蒸的废气排除与中和处理与否有关；,与,HVAC,系统中的排风与新风系统设计有关，通常希望,新风在排废气时的进风量与回风量相等。,与自动控制水平有关。,通过化学气体残留测试确认系统是否满足工艺要求的灭菌周,期。甲醛消毒与排气至人员可以进入周期为,24,小时。,谢谢！,