葡萄糖淀粉酶(课堂PPT).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Glucoamylase,1,淀粉酶,2,葡萄糖淀粉酶GA,3,催化域,连接域,结合域,基本结构,三个功能区,O-Glycosylated Linker,4,基本结构,黑曲霉糖化酶,GA,GA,催化域CD,O-糖基化域,淀粉结合域SBD,限制性水解,不含淀粉结合域SBD，少数甚至不含O-糖基化域,5,催化域CD结构,含13股-螺旋，折叠成桶状（/）,6,结构，桶的核心为一个口袋状，催化中心位于其中,6,催化机制,酸碱催化,7,连接域结构,起连接CD和SBD的作用，一般被O-糖基化修饰,不同真菌来源的糖化酶该区域的氨基酸序列可变性较大,在生物活性条件下，甘露糖比半乳糖更容易以O-方式连接到连接域的Ser和Thr残基上,8,连接域结构与功能的关系,GAGpI:,增加了一段重复的,O-,糖基化连接域,2个重组,蛋白酶,GA470-493：缺少O-糖基化连接域中Ala,470,-Thr,493,氨基酸序列,结果：GAGpI的热稳定性及PH稳定性都有所提高，这主要是由于它含有额外的O-糖基化连接域，增加了糖基化位点，因此碳水化合物的含量也增加,9,淀粉结合域结构,具有八条折叠股，形成两个主要的片层：第一个包括五个反平行的链，第二个包括一个平行和一对反平行的链,10,淀粉结合域功能,使得不溶性底物与溶液中的酶相互作用,使底物结合到催化区域的活性位点上,破坏淀粉颗粒的表面，提高淀粉水解率,11,水解过程,先为吸附，然后形成一种复合体，破坏维系淀粉分子螺旋结构的氢键，然后不断水解淀粉的糖苷键，水解使得淀粉颗粒的表面形成一系列的空穴，最后达到破坏淀粉结构的效果。,12,水解速率,13,实际应用中存在的问题及拟解决途径,水解-1,6糖苷键,的性能差,热稳定性不够,PH稳定性低,1.添加普鲁兰酶,2.改变CD中回环3和回环5结构,1,.定点突变某,些氨基酸,2.选用产糖化,酶稳定性高的,菌株,定点突变,14,Thank you,15,