KJ 201902 保健食品中罗格列酮和格列苯脲的快速检测 胶体金免疫层析法.docx
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1、附件2保健食品中罗格列酮和格列苯脲的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201902)1 范围本方法规定了保健食品中罗格列酮和格列苯脲的胶体金免疫层析快速筛查方法。本方法适用于声称具有辅助降血糖功能的保健食品中罗格列酮和格列苯脲成分的快速筛查。2 原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的罗格列酮和格列苯脲等物质经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线(T线)上抗原的结合,从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线(C线)颜色深浅比较,对样品中罗格列酮和格列苯脲成分进行定性判定。3 试剂与材料3.1 试剂除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 66
2、82规定的二级水。3.1.1 甲醇:色谱纯。3.1.2 三羟甲基氨基甲烷,Tris碱。3.1.3 浓盐酸。3.1.4 吐温-20。3.1.5 盐酸溶液:量取浓盐酸(3.1.3)16.7 mL,用水溶解并稀释至100 mL。3.1.6 缓冲液:称取12.1 g Tris碱(3.1.2),加适量水溶解,混匀,用盐酸溶液(3.1.5)调节pH至8.0,加入5.0 g吐温-20(3.1.4)搅拌均匀,定容至1000 mL。3.2 参考物质参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1,纯度均99%。表1 参考物质信息表序号中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量1马来酸罗格列
3、酮Rosiglitazone maleate155141-29-0C18H17N3O3S355.412格列苯脲Glyburide10238-21-8C23H28ClN3O5S494.00注:或等同可溯源物质。3.3 标准溶液配制3.3.1 罗格列酮标准储备液(1.0 mg/mL):精密称取适量罗格列酮参考物质(3.2),用甲醇(3.1.1)溶解并稀释至刻度,摇匀,配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液。-20避光保存,有效期1年。3.3.2 罗格列酮标准工作液(10g/mL):精密移取适量罗格列酮标准储备液(1.0mg/mL)(3.3.1)分别置于10mL容量瓶中,用甲醇(3.1.1)稀释至
4、刻度,摇匀,配制成浓度为10g/mL的标准工作液。-20避光保存,有效期3个月。3.3.3 格列苯脲标准储备液(1.0 mg/mL):精密称取适量格列苯脲参考物质(3.2),用甲醇(3.1.1)溶解并稀释至刻度,摇匀,配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液。-20避光保存,有效期1年。3.3.4 格列苯脲标准工作液(10g/mL):精密移取适量格列苯脲标准储备液(3.3.3)分别置于10mL容量瓶中,用甲醇(3.1.1)稀释至刻度,摇匀,制成浓度为10g/mL的标准工作液。-20避光保存,有效期3个月。3.4 材料罗格列酮胶体金免疫层析试剂盒及配套的试剂(可选),适用基质为保健食品。格列苯脲
5、胶体金免疫层析试剂盒及配套的试剂(可选),适用基质为保健食品。4 设备与仪器4.1 设备4.1.1 天平:感量为0.1 mg和0.01 g。4.1.2 涡旋混合器。4.1.3 移液器:20-200 L,100-1000 L,5 mL。4.1.4 离心机:转速可达4000 r/min以上。4.2 仪器4.2.1 读数仪:产品配套可使用的检测仪器(可选)。4.2.2 环境条件:温度10-40,相对湿度80%。5 分析步骤5.1 试样制备液体样品充分混匀,固体样品充分粉碎混匀。5.2 试样提取和净化5.2.1 液体基质量取0.5 mL0.02 mL试样于15 mL离心管中,加入4 mL缓冲液(3.1
6、.6),涡旋混合30 s,作为待测液。5.2.2 固体基质准确称取试样0.5 g0.01 g于15 mL离心管中,加1 mL甲醇(3.1.1),涡旋30 s,4000 rpm离心2 min或静置2 min。取250 L上清液于2 mL离心管中,加入750 L缓冲液(3.1.6),涡旋混合30s,作为待测液。注:试样提取和净化(5.2)过程可按照试剂盒说明书操作,不做限定。5.3 测定步骤5.3.1 试纸条与金标微孔测定步骤吸取200 L样品待测液于金标微孔中,抽吸5-10次使混合均匀,室温温育5 min;温育结束后,将试纸条吸水海绵端垂直向下插入金标微孔中,室温温育5 min,从微孔中取出试纸
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