高效毛细管电泳.pptx

2024/4/8 周一高效毛细管电泳仪器（高效毛细管电泳仪器（1）2024/4/8 周一高效毛细管电泳仪器（高效毛细管电泳仪器（2）2024/4/8 周一高效毛细管电泳仪器（高效毛细管电泳仪器（3）2024/4/8 周一5.7.1 高效毛细管电泳分析的基本原理高效毛细管电泳分析的基本原理 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同而实现分离。1.1.经典电泳分离法的不足经典电泳分离法的不足 所用分离柱的柱径大，柱较短，分离效率不高（远低于HPLC），温度影响大。高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进。2024/4/8 周一2.2.高效毛细管电泳技术上的重要突破高效毛细管电泳技术上的重要突破高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进：高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进：一是采用了0.05mm内径的毛细管；二是采用了高达数千伏的电压。毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小了温度效应，使电场电压可以很高。电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小，柱长增加。高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。2024/4/8 周一3.3.电泳现象与电渗流现象电泳现象与电渗流现象 电泳现象电泳现象：带电离子在电场作用下的迁移，速度电泳 电渗流现象电渗流现象：玻璃表面存在硅羟基,pH3时,形成双电层，在高电场的作用下引起柱中的溶液整体向负极移动，速度电渗流。2024/4/8 周一4.分离过程分离过程 电场作用下，柱中出现：电泳现象和电渗流现象。带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流两种速度的矢量和。阳离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出；中性粒子无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出；阴离子：两种效应的运动方向相反，电渗流 电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。2024/4/8 周一5.5.分离类型分离类型八种分离类型八种分离类型(1)(1)毛细管区带电泳（毛细管区带电泳（CZECZE）最普遍、最基本的一种分离模式。(2)(2)毛细管凝胶电泳（毛细管凝胶电泳（CGECGE）将聚丙烯酰胺在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。可分离测定蛋白质、DNA等。2024/4/8 周一(3)(3)毛细管胶束电动色谱（毛细管胶束电动色谱（MECC）在缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。在电场力的作用下，胶束在柱中移动。由于电泳流和电渗流的方向相反，且电渗流 电泳，则带负电的胶束以较慢的速度向负极方向移动，中性试样分子在胶束相和溶液（水相）两相间分配，疏水性强的组分与胶束结合得较牢，流出时间长。可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围。2024/4/8 周一5.7.2 毛细管电泳仪的基本结构毛细管电泳仪的基本结构 电压：030kV。分离柱不涂敷任何固定液。紫外或激光诱导荧光检测器。（可检测到：10-2110-19 mol/L）2024/4/8 周一5.7.3 高效毛细管电泳的主要特点和应用高效毛细管电泳的主要特点和应用高分辨率：理论塔板数高达数百万块，甚至数千万块。高灵敏度：可检测出低至10-21 mol/L浓度的物质。高分析速度：可在3min内分离30种阴离子；1.7min分离19种阳离子；4min可分离10种蛋白质。试样用量少：仅需几nL（10-9 L）的试样。仪器简单操作成本低：分析一个试样仅需几毫升流动液。不足之处：不足之处：进样不够方便。应用范围相对较窄。分析阴离子时，由阴极进样，在阳极检测。但电渗流方向与阴离子受电场力作用移动方向相反，出峰时间较长。请选择内容：请选择内容：结束结束结束结束5.1 色谱分析法基础色谱分析法基础 5.2 色谱理论基础色谱理论基础 5.3 气相色谱法气相色谱法 5.4 高效液相色谱法高效液相色谱法 5.5 超临界流体色谱法超临界流体色谱法 5.6 色谱定性与定量分析方法色谱定性与定量分析方法 5.7 高效毛细管电泳分析法简介高效毛细管电泳分析法简介 第六章第六章