加减三甲散及其拆方对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的影响.doc

加减三甲散及其拆方对肝纤维化大鼠肝细胞
凋亡的影响

作者：乔胃娟 杨宇 周新颖 袁建 刘旺华 闫颖

【摘要】 目的 通过观察加减三甲散及其拆方对肝纤维化大鼠肝

细胞凋亡的影响， 部分阐明本方及拆方治疗肝纤维化的机理。方法 使

用四氯化碳诱导复制大鼠肝纤维化模型，观察各组对大鼠肝细胞凋亡

的影响。结果 各治疗组均能显著降低凋亡细胞数，与模型组比较，差

异有非常统计学意义（P＜0.01） 结论 加减三甲散及其拆方能够通过 。

降低细胞凋亡对实验性肝纤维化起到一定的治疗作用。

【关键词】 加减三甲散 滋阴 肝纤维化 肝细胞 凋亡

【Abstract】 Objective: To partly clarify the mechanism of

Modified San Jia Powder and its Sub-Formulas on hepatic fibrosis

by observing the Effects of them on hepatic cell Apoptosis of

rats with hepatic fibrosis. Methods: Using CCl4 to copy the

hepatic fibrosis model in rats, and hepatic cell Apoptosis is

tested. Results: All the therapeutic groups can decrease the

level of Apoptosis（P＜0.01） Conclusion: Modified San Jia 。

Powder and its Sub-Formulas have the effects on experimental

hepatic fibrosis by lowering the level of Apoptosis.

【Key words】 Modified San Jia Powder Yin-enriching hepatic

fibrosis hepatic cell Apoptosis

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肝纤维化是各种慢性肝病发展过程中的共同病理表现， 是慢性肝

病向肝硬化发展中的主要中间环节[1]。 "客邪交固于血脉，主客交浑，

最难得解，久而愈固，治法当乘其大肉未消、真元未败，急用三甲散，

多有得生者" 三甲散乃吴又可创制，加减三甲散为本课题组在三甲散 。

的基础上加以调整，为临床上治疗肝病的经验方。本实验在"主客交"

理论指导下，通过观察加减三甲散及其拆方对肝纤维化大鼠肝细胞凋

亡的影响，探讨该方治疗肝纤维化的机理。

1 实验材料

1.1 实验动物

雄性 SD 大鼠 体重 180～200g，由成都中医药大学实验动物中心

提供。

1.2 实验药品

(1)加减三甲散及其拆方组水煎液(全方组药物:龟板 15g、穿山

甲 10g、僵蚕 10g、蝉蜕 5g、鳖甲 15g、土鳖虫 10g、桃仁 10g、当归

10g、柴胡 10g、白芍 10g、甘草 5g；滋阴组药物：鳖甲 15g、龟板 15g、

当归 10g、白芍 10g、甘草 5g；去滋阴药组药物：穿山甲 10g、僵蚕

10g、蝉蜕 5g、土鳖虫 10g、桃仁 10g、柴胡 10g) 购自北京同仁堂成

都分店。以上药物经加水浸泡、常规煎煮、过滤及水浴蒸发制成每毫

升含 1g 生药的水煎液（浓度 100％） 高温灭菌后 4℃冰箱保存备用。 ，

（2）秋水仙碱片：云南植物药业有限公司生产，0.5mg/片，批

号：20080701，0.5mg 溶于 10ml 蒸馏水配成悬浊液，4℃冰箱保存备

用。

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1.3 实验试剂

（ 1 ） 四 氯 化 碳 分 析 纯 专 用 试 剂 纯 度 ³ 99.5% 质 量 标 准

GB/T688-1992 密度 1.592～1.598(20℃)四川航嘉生物医药科技有限

责任公司 批号：20080128，常温保存备用。

（2）鲁花花生油 山东鲁花集团有限公司，批号：3700116036。

（3）TUNEL 凋亡检测试剂盒：美国 ROCH 公司产品。

1.4 实验仪器

显微镜（LEICA DM 4000B） 。

2 实验方法

110 只大鼠随机分为正常对照组、病理模型组、阳性对照组、加

减三甲散组、滋阴组、去滋阴药组，除正常对照组为 10 只外，其余各

组各 20 只。除正常组外，其余各组均用四氯化碳腹腔注射造模，

0.2ml/100g，首次 0.5ml/100g，2 次/周，共 8 周。加减三甲散组、滋

阴组、去滋阴药组造模同时给予药物治疗，每天上午 8 点灌胃，连续

8 周。给药剂量按有关成人日用量与大鼠的体重体表面积比折算为等

效剂量分别灌胃给予相应药物，阳性对照组予秋水仙碱水溶液 0.5×

10-3g/kg，加减三甲散组给予加减三甲散浸膏 11g 生药/kg，滋阴组给

予滋阴药物浸膏 5.5g 生药/kg， 去滋阴药组给予去滋阴药物 5.5g 生药

/kg。正常对照组和病理模型组给予等容积生理盐水。共给药 8 周。实

验结束时， 空白对照组外，
除 其余各组随机挑选 10 只大鼠放血处死后,

取肝脏组织用中性甲醛固定,石蜡包埋、切片,采用末端转移酶介导脱

氧尿苷三磷酸缺口末端标记(TUNEL)法检测肝细胞凋亡,具体步骤按试

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