大肠菌群检验.ppt
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1、二、大肠菌群的定义及检测方法,1、大肠菌群的传统定义 大肠菌群(Coliform group)系指一群需氧及兼性厌氧,在37 24小时能发酵乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 包括肠杆菌科的艾希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属和克雷伯菌属。其中以艾希氏菌属为主,称为典型大肠杆菌,其它三属习惯上称为典型大肠杆菌。2、大肠菌群检验的标准方法(1)最近拟数法(MPN)(GB4789.2-1994),第一页,共13页。,样品 0.1g3 0.01g 3 0.001g 3 乳糖胆盐发酵管 37 24hr 产酸产气管 伊红美蓝平板(分离) 37 24hr可疑菌落 乳糖发酵管(证实) 37 24hr 根据经
2、证实的乳糖胆盐发酵管 阳性管数,查MPN表。,第二页,共13页。,(2)平板直接计数法(SN0169-92),样品 0.1g2 0.01g 2 0.001g 2 结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)37 24hr 计数紫红色菌落,乘以稀释倍数报告,第三页,共13页。,3、ISO关于大肠菌群的定义(ISO9308-1:2000)(ISO:INTERNATIONAL STARDIZATION ORGANIZATION国际标准化组织),大肠菌群是革兰氏阴性、无芽孢、氧化酶阴性的杆状细菌,可需氧或兼性厌氧地生长在含胆盐(或其他具有同样抑制生长性能的表面活性剂)的培养基上,当在36 2培养时,通常能于48h
3、r内发酵乳糖产酸和醛。它们还具有-半乳糖苷酶。,第四页,共13页。,4、依据-半乳糖苷酶快速测定大肠菌群的原理,大肠菌群产生的-半乳糖苷酶可分解培养基中的酶底物(即色基与-半乳糖的结合物),使带色基团游离而显色或发荧光。该反应灵敏快速。 测定-半乳糖酶常用的底物有4-甲基伞形酮-D半乳糖苷(MUGal)、5-溴-4氯-3-吲哚-D-半乳糖苷(X-gal)、3,4-环已酮-D-半乳糖苷和8-羟基喹啉-D-半乳糖苷等。1993年Brenner等人用加4-甲基伞形酮-D-半乳糖苷(MUGal)和吲哚氧基-D-葡糖醛酸苷的培养基检测大肠菌群和大肠杆菌3,取得满意结果。1995年该方法被美国国家环境保护
4、署采纳(Code of Federal Regulation 40,141.21 Protection Of Environment)。美国SIGMA公司有商品化试剂,但价格昂贵。 2000年James等独家报导了一种新的检测大肠菌群的酶底物茜素-D-半乳糖苷(Aliz-gal)。该试剂具有比同类酶底物更灵敏的性能,在固体培养基中可使大肠菌群呈现带色菌落,色素为脂溶性不扩散,易与辨别,另还可以和不同的阳离子(Fe、Al、K、NH4)形成带色的螯合物,这样就便于和其他的显色剂合用,组成具有多种性能的鉴别培养基,以提高检测的灵敏度。目前,国内外均无商品化试剂出售。,第五页,共13页。,三、应用4-
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