临床微生物学检验ppt课件.pptx
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1、临床微生物学检验各种微生物的鉴定流程革兰阳性菌的简易鉴定流程接种不规则,棒状杆菌属24h观察菌落形态Bap生长良好参阅革兰阴性杆菌鉴定流程图转纯MAC生长良好G+球菌 革兰阳性球菌 成队、成链排列 凝固酶阴性 葡萄球菌或微球菌 革兰染色形态金葡菌CAMP实验溶血李斯特杆菌、芽孢杆菌、乳酸杆菌规则杆状触酶+G+杆菌触酶-凝固酶阴性凝固酶阳性否B群链球菌 肺炎链球菌其他 草绿色链球菌或 肠球菌结果GP卡是其他链球菌,化脓链球菌调菌悬液0.85-0.9麦氏点,上GP卡出结果G+圆形卵圆形YST卡结果革兰阴性菌(非粪便中)简易鉴定流程 接种 Bap生长良好MAC生长良好铜绿单胞菌粉红色或红色菌落 较小
2、、无色透明半透明菌落分纯MAC24h菌落有金属色泽 葡萄气味OX阳性调菌悬液0.65-0.7麦氏点,上GN卡BAP上/迁移生长24h出鉴定结果阴性是洋葱伯克霍尔德菌 类鼻疽伯克氏菌、巴斯德菌、其他否是变形杆菌属否大肠杆菌、沙雷菌,枸橼酸菌属,肠杆菌属,嗜麦芽窄食单胞菌,不动杆菌属,部分洋葱,其他上机接种MACTCBSSS24h无色、透明半透明菌落中心黑色菌落黄色菌落24h凝集G-,鱼群排列的弧菌革兰染色米泔水样便凝集诊断学清可疑沙门菌可疑志贺菌KIA、MIU疑似霍乱弧菌诊断学清诊断学清上机凝集上报疾控中心及主管部门出结果联系临床,询问病史扁平无色半透明蜡滴状蓝绿色疑似副溶血粪便中细菌(肠道粪便
3、菌)鉴定流程图 巧克力平板用于分离,BAP平板上在没有添加V因子的情况下不生长流感嗜血杆菌 脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌(卡他莫拉氏菌)接种血琼脂平板巧克力平板CO2培养箱24h光滑湿润透明或半透明菌落结果GN卡上机OX阳性、H2O2阳性G-球菌双球菌3种革兰氏阴性双球菌可能存在的部位 淋病奈瑟氏菌是阴道和咽部的致病菌,关节液中罕见 脑膜炎奈瑟氏菌是脑脊液、血标本中的致病菌,阴道(肛门)和痰中罕见 卡他莫拉氏菌是仅为痰、耳、眼睛和窦吸取物中的致病菌厌氧菌鉴定临床标本液体培养基(曾军)厌氧血平板、选择培养基庖肉培养基需氧培养24h厌氧培养48h48 h挑4-6个形状不同菌落,分别接种厌氧需养血琼
4、脂平板确定是否厌氧菌接种平板需氧培养接种平板厌氧培养不生长生长涂片革兰染色厌氧培养48h需氧培养分离,生化试验,鉴定菌落观察,形态染色专性厌氧菌兼性厌氧或需养生长L型细菌细菌L型是细菌因变异而产生的细胞壁缺陷型。根据其细胞壁的缺陷程度不同可分为两类:原生质体和圆球体。细菌L型呈杆状、丝状、圆形或卵圆形等多种形态,大小差别很大。因细胞壁缺失,革兰染色常发生改变,革兰阳性菌变为L型后,可染成阴性(有时仍为阳性)。在同一张片子上可同时见到革兰阳性及阴性菌,着色不均。细胞壁染色,菌体呈深紫色。细菌 L型需在高渗和营养丰富的条件下才能生长,生长缓慢,培养27天可见生长。在液体培养基中,呈颗粒状生长,颗粒
5、可粘附于管壁或沉淀于管底。在固体培养基中,有3种类型:“油煎蛋”样(L型)、颗粒状(G型)菌落、和丝状(F型)菌落。真菌培养 可疑隐球菌属YST卡酵母菌阳性圆形卵圆形菌体革兰染色24h沙保培养基标本墨汁负染粘液淡褐色鉴定可疑霉菌属可见分生孢子头和足细胞24h厚膜孢子实验上机鉴定牙管形成实验少量菌落阴性阳性再培养24h白色念珠菌各种鉴定试验革兰染色原理:细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异,主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物,乙醇能使它溶解,所以染色的前二步结果是一样的,但在G+细胞中,乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水,导致孔隙变小
6、,由于结晶紫和碘的复合物分子太大,不能通过细胞壁,保持着紫色。在G细胞中,乙醇处理不但破坏了胞壁外膜,还可能损伤肽聚糖层和细胞质膜,于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的复合物从细胞中渗漏出来,当再用衬托的染色液复染时,显现红色。红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞,但被紫色盖没,红色显示不出来。涂片龙胆紫液染色10s,水洗,甩干复染脱色初染媒染固定其作用是增强染料与细菌的亲和力,更好地加强染料与细胞的结合。目的:1、杀死细菌;2、使菌体与玻片粘附牢固;3、菌体蛋 白变性,易于着色。经火焰固定待干镜检目的是使脱色的细菌重新染上另一种颜色,以便与未脱色菌进行比较。帮助染料从被染色的细胞中脱色。利用细菌
7、对染料脱色的难易程度不同,而将细菌加以区分。革兰阳性细菌不易被脱色剂脱色,而革兰阴性细菌则易被脱色。酒精脱色10-20s,水洗,甩干碘溶液染色10s,水洗,甩干使细菌各成分着色砂黄溶液,8s,水洗,甩干红色紫色革兰阴性菌革兰阳性菌抗酸染色原理:分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红的颜色,达到染色目的。涂片固定复染脱色初染使各成分脱色,抗酸杆菌不易脱色镜检蓝色背景下,染成红色细长或略带弯曲的杆菌,并有分支趋向。酸性酒精溶液,2min,水洗甩干使各成分着色石碳酸复红溶液,5min,水洗甩干经火焰
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