16S鉴定细菌的种属PPT课件.pptx

利用16S rDNA鉴定细菌的种属1.1.什么是 16S rDNA？16SrRNA为原核生物核糖体RNA的一个亚基，16SrDNA就是编码该亚基的基因。原核生物的rRNA含有3种类型：23S、16S、5S rRNA，它们分别含有2900、1540和120个核苷酸。2.用16S rDNA进行细菌鉴定的原因16S rDNA在原核生物中普遍存在。16 S rDNA的相对分子量大小适中，约1500 bp，便于序列分析。在16S rRNA分子中，既含有高度保守的序列区域，又有中度保守和高度变化的序列区域，因而它适用于进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究。bp=base pair 2.图图16SrDNA基因组成（灰色为保守区，绿色为可变区）基因组成（灰色为保守区，绿色为可变区）16S rDNA基因全长1542 bp，由9个可变区和10个保守区组成。其中保守区反映了生物物种间的亲缘关系，而可变区则表明物种间的差异，且变异程度与细菌的系统发育密切相关。3.4.DNA的提取 挑取单菌落,然后置于装有100 LPrepMan Ultra的离心管中,涡旋震荡混匀30s左右，然后100水浴10min 后，以离心机最大转速离心3min，取10L上清液与490L ddH2O（即稀释50 倍），混匀作为下步PCR 的模板DNA。提取的DNA 于-20保存。检测：核酸蛋白仪/琼脂糖凝胶电泳5.1525R 5 AAG GAG GTG WTC CAR CC 36.PCR 反应条件反应条件试剂使用量（试剂使用量（20L体系体系）模板模板DNA（10ng100ng）2LTaq 酶酶(5U/L)0.2 L10Taq Buffer(Mg2+)2 LdNTPs(2.5mM)1 L引物引物F(10 M)0.5 L引物引物R(10 M)0.5 LddH2O 13.8 L1min30s7.判断16Sr DNA序列扩增是否成功:经琼脂糖凝胶电泳在1500 bp附近出现条带，说明16s rDNA已经扩增成功。8.9.https:/www.ncbi.nlm.nih.gov/https:/www.ncbi.nlm.nih.gov/10.11.12.13.14.15.16.17.18.19.20.21.22.23.24.25.26.27.28.29.30.