乙肝病毒感染的检测手段和诊断指标ppt课件.ppt

乙肝病毒感染的检测手段和诊断指标乙肝病毒乙肝病毒HVB（hepatitis B virus）引起人类急、慢性肝炎的DNA病毒，也称丹氏颗粒。我国的乙肝病毒感染率约60%-70%；乙肝表面抗原携带率约占总人口的7.18%。乙肝病毒的检测手段乙肝病毒的检测手段免疫学方法免疫学方法a)酶免疫法（ELISA）b)时间分辨荧光分析技术（TRFIA）c)胶体金法分子生物学方法分子生物学方法a)HBV-DNA法（PCR）b)bDNA法乙肝病毒检测指标乙肝病毒检测指标酶免疫法（酶免疫法（ELISAELISA）酶免疫法（酶免疫法（ELISAELISA）酶免疫法（酶免疫法（ELISAELISA）酶免疫法（酶免疫法（ELISAELISA）目的：对乙肝血清标志物进行定性的分析优点：简单、快速、稳定缺点：敏感度相对较低；出现钩状效应（前带/后带）和受到交叉污染的可能性较大；不能够对乙肝病毒标志物实施动态观察；对低水平HBV感染标志物的漏检率相对较高。时间分辨荧光分析技术时间分辨荧光分析技术（TRFIATRFIA）示踪剂：镧系元素流程：1.具有双功能基团的镧系元素对抗原或抗体进行标记2.通过时间延迟将非特异性的荧光去除3.发生特异性结合时，抗原抗体复合物在可以增强液中发生解离，在特定的激发光的激发作用下发出一种特定波长的荧光，在固定的时间对特异性荧光进行检测即可意义：适用于急诊或手术前对HBV病毒进行定性检查，其主要优点在于检测速度较快、操作简单方便，对操作技术和检测环境的要求相对较低。胶体金法胶体金法胶体金：由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态。原理：胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。类型：免疫胶体金光镜染色法 免疫胶体金电镜染色法 胶体金免疫层析法 等胶体金法胶体金法优点：检测速度相对较快，在取得血清的情况下，一般情况下在十分钟之内就可以对结果进行判读。缺点：只能对乙肝病毒实施定性检测，准确率与酶联免疫吸附试验比较相对低，且对于弱阳性的表现度相对较差，造成弱阳性标本的漏读和误读的可能性相对较大，性价比跟准确度方面都要略逊于ELISA。传统PCRPCR-ELISA实时定量PCRHVB-DNA法（法（PCR）原理：探针杂交方法：bDNA是人工合成的侧链DNA片段，每个侧链上都可以带标记物。在用于检测的微孔板上包被有一套人工合成的HBV-DNA特异性核苷酸捕获探针，当HBV-DNA从细胞中释放出来时，被板上的捕获探针所捕获。另一套靶向延伸探针既能与捕获的HBV-DNA杂交，又能与预放大探针杂交。随后，放大探针与预放大探针杂交，形成bDNA复合物。标记有多个碱性磷酸酶的探针固定到该复合物上，与发光底物共同孵育，记录发光强度，并根据标准曲线求得HBV-DNA浓度。意义：目标物不被扩增,但检测信号被放大,从而提高了灵敏度。bDNA法法（branched DNA）参考文献参考文献【1】胡晓丹,目前乙肝病毒不同临床检测方法的对照研究J.国际病毒学杂志,2015,Vol.22,supplement.142-143.【2】王健,闵福援,乙肝病毒血清标志物的检测方法及其临床意义J.中华检验医学杂志，2005，Vol.28,No.1.113-115.【3】张宝华,黄婷,乙型肝炎病毒检测方法的相关性分析J.现代检验医学杂志,2010,Vol.7,No.4.69-71.【4】王家杰,何庆明,刘佳文,李宝玲,李金红,乙型肝炎病毒标志物定量检测方法的评价J.国际检验医学杂志,2015,Vol.3,No.1.123-124.【5】魏来,乙型肝炎与丙型肝炎病毒感染临床检测的进展J.2015,Vol.28,No.6.657-659.-Thanks-