液相色谱吸附色谱PPT课件.ppt

在吸附色谱中在吸附色谱中在吸附色谱中在吸附色谱中 t tR R=t=tmm（1 1KVs/VmKVs/Vm）V VR R=V=VmmKVKVS S其中其中其中其中K K是吸附平衡常数，是吸附平衡常数，是吸附平衡常数，是吸附平衡常数，VsVs为固定相，即吸附剂的吸附为固定相，即吸附剂的吸附为固定相，即吸附剂的吸附为固定相，即吸附剂的吸附表面积，也可以用吸附剂的量来表示。表面积，也可以用吸附剂的量来表示。表面积，也可以用吸附剂的量来表示。表面积，也可以用吸附剂的量来表示。M在吸附剂上存在着吸附平衡，即吸附在吸附剂上存在着吸附平衡，即吸附 解吸附；解吸附；M若组分的吸附能力强，则在吸附状态时间长，解吸附状若组分的吸附能力强，则在吸附状态时间长，解吸附状态时间短，即态时间短，即tR大，保留时间长，大，保留时间长，K(K)大。大。12021分离机制：分离机制：吸附系数注：注：注：注：K Ka a与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质 及温度有关及温度有关 nextnext吸附平衡吸附平衡 X Xmm+nY+nYa a X Xa a+nY+nYmm 22021分离机制：分离机制：注：注：Ka与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质 及温度有关及温度有关分离机制：分离机制：各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离吸附吸附解吸解吸再吸附再吸附再解吸再解吸无数次洗脱无数次洗脱分开分开 m.流动相；流动相；a.吸附剂；吸附剂；Xm.流动相中溶质分子；流动相中溶质分子；Ym.流动相分子；流动相分子；Xa.被吸附的溶质分子被吸附的溶质分子 32021二、吸附等温线二、吸附等温线 吸附等温线可用来描述分配系数吸附等温线可用来描述分配系数K（吸附（吸附平衡常数）随组分浓度变化的规律。即在一定平衡常数）随组分浓度变化的规律。即在一定温度下，组分在吸附剂上达到平衡时，用组分温度下，组分在吸附剂上达到平衡时，用组分在固定相中的量（在固定相上被吸附着的浓度）在固定相中的量（在固定相上被吸附着的浓度）对组分在流动相中的浓度（未被吸附）作图，对组分在流动相中的浓度（未被吸附）作图，即得吸附等温线。即得吸附等温线。420211、线性等温线、线性等温线TT K=tg=CK=tg=CS S/C/Cmm M特点特点：TT 组分的组分的组分的组分的K K为一常数，不随为一常数，不随为一常数，不随为一常数，不随组分的浓度而变化；组分的浓度而变化；组分的浓度而变化；组分的浓度而变化；TT虽然组分的前沿、中心、虽然组分的前沿、中心、虽然组分的前沿、中心、虽然组分的前沿、中心、尾部浓度不等，但由于尾部浓度不等，但由于尾部浓度不等，但由于尾部浓度不等，但由于K K与浓度无关，是常数，所与浓度无关，是常数，所与浓度无关，是常数，所与浓度无关，是常数，所以组分的分子以相同的速以组分的分子以相同的速以组分的分子以相同的速以组分的分子以相同的速度迁移，得到完全对称的度迁移，得到完全对称的度迁移，得到完全对称的度迁移，得到完全对称的峰；峰；峰；峰；TT组分的保留时间，不随样组分的保留时间，不随样组分的保留时间，不随样组分的保留时间，不随样品的浓度而变化。品的浓度而变化。品的浓度而变化。品的浓度而变化。三种吸附等温线三种吸附等温线三种吸附等温线三种吸附等温线 520212、凸型等温线、凸型等温线（Langmuir型等温线）型等温线）M特点：特点：TTK K是浓度的函数，随浓度而变是浓度的函数，随浓度而变是浓度的函数，随浓度而变是浓度的函数，随浓度而变化；化；化；化；TT当组分浓度增大时，当组分浓度增大时，当组分浓度增大时，当组分浓度增大时，K K减小，减小，减小，减小，组分更多地分配于流动相中；组分更多地分配于流动相中；组分更多地分配于流动相中；组分更多地分配于流动相中；TT对于组分谱带中，不同浓度对于组分谱带中，不同浓度对于组分谱带中，不同浓度对于组分谱带中，不同浓度区域的分子（前、中、后），区域的分子（前、中、后），区域的分子（前、中、后），区域的分子（前、中、后），因浓度不同，因浓度不同，因浓度不同，因浓度不同，K K不同；中心的不同；中心的不同；中心的不同；中心的浓度高，浓度高，浓度高，浓度高，K K小，迁移快；两头小，迁移快；两头小，迁移快；两头小，迁移快；两头浓度低，浓度低，浓度低，浓度低，K K大，迁移慢，形成大，迁移慢，形成大，迁移慢，形成大，迁移慢，形成拖尾峰；拖尾峰；拖尾峰；拖尾峰；TT造成谱带不对称，造成谱带不对称，造成谱带不对称，造成谱带不对称，t tR R值偏移，值偏移，值偏移，值偏移，谱带展宽。谱带展宽。谱带展宽。谱带展宽。62021M原因：原因：TT吸附剂上常存在一些强烈的活性中心，当组分在吸附剂吸附剂上常存在一些强烈的活性中心，当组分在吸附剂吸附剂上常存在一些强烈的活性中心，当组分在吸附剂吸附剂上常存在一些强烈的活性中心，当组分在吸附剂上被吸附时，先占据活性能力最强的活性中心，然后占上被吸附时，先占据活性能力最强的活性中心，然后占上被吸附时，先占据活性能力最强的活性中心，然后占上被吸附时，先占据活性能力最强的活性中心，然后占据次强的、弱的、最弱的，这样，当样品量大时，少部据次强的、弱的、最弱的，这样，当样品量大时，少部据次强的、弱的、最弱的，这样，当样品量大时，少部据次强的、弱的、最弱的，这样，当样品量大时，少部分占据强吸附中心；其它的在弱吸附中心，则移动快，分占据强吸附中心；其它的在弱吸附中心，则移动快，分占据强吸附中心；其它的在弱吸附中心，则移动快，分占据强吸附中心；其它的在弱吸附中心，则移动快，K K值小，所以随浓度的增大，值小，所以随浓度的增大，值小，所以随浓度的增大，值小，所以随浓度的增大，K K减小，移动快。减小，移动快。减小，移动快。减小，移动快。M克服方法：克服方法：TTa a、减少上样量，使之在线性容量内（线性容量，即吸减少上样量，使之在线性容量内（线性容量，即吸减少上样量，使之在线性容量内（线性容量，即吸减少上样量，使之在线性容量内（线性容量，即吸附等温线为线性的区间所对应的组分的浓度区间）。附等温线为线性的区间所对应的组分的浓度区间）。附等温线为线性的区间所对应的组分的浓度区间）。附等温线为线性的区间所对应的组分的浓度区间）。TTb b、覆盖强活性中心（用极性物质），增大线性容量、覆盖强活性中心（用极性物质），增大线性容量、覆盖强活性中心（用极性物质），增大线性容量、覆盖强活性中心（用极性物质），增大线性容量TT用某种物质覆盖强活性中心，减低其吸附能力的过程，用某种物质覆盖强活性中心，减低其吸附能力的过程，用某种物质覆盖强活性中心，减低其吸附能力的过程，用某种物质覆盖强活性中心，减低其吸附能力的过程，叫减活。叫减活。叫减活。叫减活。720213、凹型等温线（反凹型等温线（反langmuir型等温线）型等温线）TT随浓度大，随浓度大，随浓度大，随浓度大，K K大；大；大；大；TT则浓度大的区域移动慢，形则浓度大的区域移动慢，形则浓度大的区域移动慢，形则浓度大的区域移动慢，形成伸舌头峰。成伸舌头峰。成伸舌头峰。成伸舌头峰。M原因：原因：TTa a、化学吸附、化学吸附、化学吸附、化学吸附TTb b、相对于流动相超载，即、相对于流动相超载，即、相对于流动相超载，即、相对于流动相超载，即当样品量过大时，局部浓度当样品量过大时，局部浓度当样品量过大时，局部浓度当样品量过大时，局部浓度过高，流动相对其溶液能力过高，流动相对其溶液能力过高，流动相对其溶液能力过高，流动相对其溶液能力有限，只能洗脱少量，所以有限，只能洗脱少量，所以有限，只能洗脱少量，所以有限，只能洗脱少量，所以浓度低处移动快。浓度低处移动快。浓度低处移动快。浓度低处移动快。M克服：克服：TT减少上样量。减少上样量。减少上样量。减少上样量。82021（一）吸附剂的类型（一）吸附剂的类型M1、极性吸附剂、极性吸附剂TT吸附剂表面是极性的，选择性吸附极性大的化合吸附剂表面是极性的，选择性吸附极性大的化合吸附剂表面是极性的，选择性吸附极性大的化合吸附剂表面是极性的，选择性吸附极性大的化合物。极性强，则保留能力强。物。极性强，则保留能力强。物。极性强，则保留能力强。物。极性强，则保留能力强。M2、非极性吸附剂、非极性吸附剂TT吸附力主要靠色散力，即大分子量的化合物、易吸附力主要靠色散力，即大分子量的化合物、易吸附力主要靠色散力，即大分子量的化合物、易吸附力主要靠色散力，即大分子量的化合物、易极化的化合物。极化的化合物。极化的化合物。极化的化合物。三、常用吸附剂三、常用吸附剂 多孔、微粒状物质多孔、微粒状物质多孔、微粒状物质多孔、微粒状物质92021（二）吸附剂的吸附能力（活性）（二）吸附剂的吸附能力（活性）M1、影响吸附剂吸附能力的因素：、影响吸附剂吸附能力的因素：TT吸附剂的表面积吸附剂的表面积吸附剂的表面积吸附剂的表面积TT吸附剂表面的化学组成及表面原子或基团的吸附剂表面的化学组成及表面原子或基团的吸附剂表面的化学组成及表面原子或基团的吸附剂表面的化学组成及表面原子或基团的几何排列几何排列几何排列几何排列TT含水量（对极性吸附剂来讲）含水量（对极性吸附剂来讲）含水量（对极性吸附剂来讲）含水量（对极性吸附剂来讲）含水量越多，则吸附能力越弱含水量越多，则吸附能力越弱含水量越多，则吸附能力越弱含水量越多，则吸附能力越弱102021M2、吸附能力的定量指标、吸附能力的定量指标活度活度TT活度：使吸附剂的活性标准化，它反映了吸附剂的活活度：使吸附剂的活性标准化，它反映了吸附剂的活活度：使吸附剂的活性标准化，它反映了吸附剂的活活度：使吸附剂的活性标准化，它反映了吸附剂的活性与含水量的关系。性与含水量的关系。性与含水量的关系。性与含水量的关系。TT方法：方法：方法：方法：BrockmanBrockman法法法法样品：六种标准染料（样品：六种标准染料（样品：六种标准染料（样品：六种标准染料（0.040.04 w/vw/v）10ml10ml（石油醚（石油醚（石油醚（石油醚溶解）溶解）溶解）溶解）色谱柱：干法装柱，柱长色谱柱：干法装柱，柱长色谱柱：干法装柱，柱长色谱柱：干法装柱，柱长5cm5cm将样品上柱，用将样品上柱，用将样品上柱，用将样品上柱，用20ml20ml洗脱剂（石油醚洗脱剂（石油醚洗脱剂（石油醚洗脱剂（石油醚苯苯苯苯 =4:1=4:1）洗）洗）洗）洗脱，用染料在柱上位置来确定吸附剂的活度。脱，用染料在柱上位置来确定吸附剂的活度。脱，用染料在柱上位置来确定吸附剂的活度。脱，用染料在柱上位置来确定吸附剂的活度。112021122021M3、活度级别、活度级别 I I 级级级级 V V 级级级级含水量含水量含水量含水量 增大增大增大增大吸附能力吸附能力吸附能力吸附能力 降低降低降低降低活活活活 性性性性 下降下降下降下降132021M4、活化、活化TT将吸附剂加热，去除其吸附的水的过程。将吸附剂加热，去除其吸附的水的过程。将吸附剂加热，去除其吸附的水的过程。将吸附剂加热，去除其吸附的水的过程。M5、减活、减活TT加入减活剂，降低吸附剂活性加入减活剂，降低吸附剂活性加入减活剂，降低吸附剂活性加入减活剂，降低吸附剂活性142021（三）常用吸附剂（三）常用吸附剂硅胶、氧化铝硅胶、氧化铝 1 1、硅胶（、硅胶（、硅胶（、硅胶（SiOSiO2 2xHxH2 2OO）结构：内部结构：内部硅氧交联结构硅氧交联结构多孔结构多孔结构 表面表面有硅醇基有硅醇基氢键作用氢键作用吸附活性中心吸附活性中心 游离羟基游离羟基 键合羟基键合羟基 硅醚结构（非极性，对硅醚结构（非极性，对极性化合物不保留）极性化合物不保留）152021特性：特性：1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物物质质极极性性，吸吸附附能能力力强强极极性性吸吸附附中中心心，不不易易洗洗脱脱 2）吸水）吸水失活失活 105110OC烘干烘干30分钟分钟(可逆失水可逆失水)吸附力最大吸附力最大 500OC烘干烘干(不可逆失水不可逆失水)活性丧失，无吸附力活性丧失，无吸附力适用：适用：分析酸性或中性物质分析酸性或中性物质 162021 含水量含水量%硅胶的活性硅胶的活性 0 I 级级 5 II 级级 15 III 级级 25 IV 级级 38 V 级级 172021续前续前续前续前2、氧化铝：、氧化铝：分离亲脂性成分分离亲脂性成分 活化：活化：400，6h 级级 加入相应的水加入相应的水 级级TT 碱性氧化铝碱性氧化铝碱性氧化铝碱性氧化铝 pH 9pH 910 10 适于分析碱性、中性物质适于分析碱性、中性物质适于分析碱性、中性物质适于分析碱性、中性物质TT 中性氧化铝中性氧化铝中性氧化铝中性氧化铝 pHpH7.5 7.5 适于分析酸性碱性和中性物质适于分析酸性碱性和中性物质适于分析酸性碱性和中性物质适于分析酸性碱性和中性物质TT 酸性氧化铝酸性氧化铝酸性氧化铝酸性氧化铝 pH 4pH 45 5 适于分析酸性、中性物质适于分析酸性、中性物质适于分析酸性、中性物质适于分析酸性、中性物质182021 含水量含水量含水量含水量%氧化铝的活性氧化铝的活性氧化铝的活性氧化铝的活性 0 0 I I 级级级级 3 3 II II 级级级级 6 6 III III 级级级级 10 10 IV IV 级级级级 15 15 V V 级级级级 192021（四）极性吸附剂对化合物的选择性（四）极性吸附剂对化合物的选择性M1 1、极性吸附剂选择性吸附极性大的化合物、极性吸附剂选择性吸附极性大的化合物M2 2、化合物的极性大小，由化合物的官能团决定、化合物的极性大小，由化合物的官能团决定TT常见官能团的极性大小：常见官能团的极性大小：常见官能团的极性大小：常见官能团的极性大小：烷烯醚硝基化合物（二甲胺）烷烯醚硝基化合物（二甲胺）烷烯醚硝基化合物（二甲胺）烷烯醚硝基化合物（二甲胺）酯类酯类酯类酯类酮酮酮酮醛硫醇醛硫醇醛硫醇醛硫醇胺类酰胺醇酚羧酸胺类酰胺醇酚羧酸胺类酰胺醇酚羧酸胺类酰胺醇酚羧酸TT判断化合物极性大小时：判断化合物极性大小时：判断化合物极性大小时：判断化合物极性大小时：1.1.1.1.基团母核相同时，则分子中基团的极性大，整个分子的极性基团母核相同时，则分子中基团的极性大，整个分子的极性基团母核相同时，则分子中基团的极性大，整个分子的极性基团母核相同时，则分子中基团的极性大，整个分子的极性大；极性基团多，极性大大；极性基团多，极性大大；极性基团多，极性大大；极性基团多，极性大2.2.2.2.分子中双键多，吸附力强；共轭双键多，吸附力强分子中双键多，吸附力强；共轭双键多，吸附力强分子中双键多，吸附力强；共轭双键多，吸附力强分子中双键多，吸附力强；共轭双键多，吸附力强3.3.3.3.取代基的空间排列：取代基的空间排列：取代基的空间排列：取代基的空间排列：同一母核中，羟基处于能形成分子内氢键的位置，则吸同一母核中，羟基处于能形成分子内氢键的位置，则吸同一母核中，羟基处于能形成分子内氢键的位置，则吸同一母核中，羟基处于能形成分子内氢键的位置，则吸附力弱于不能形成分子内氢键的位置。附力弱于不能形成分子内氢键的位置。附力弱于不能形成分子内氢键的位置。附力弱于不能形成分子内氢键的位置。M3 3、非极性吸附剂给出相反顺序。、非极性吸附剂给出相反顺序。202021四、洗脱剂（流动相、溶剂）四、洗脱剂（流动相、溶剂）（一）洗脱剂的洗脱强度（对组分（一）洗脱剂的洗脱强度（对组分K值的影响）值的影响）（二）洗脱剂的选择性（二）洗脱剂的选择性212021（一）洗脱剂（流动相）对组分（一）洗脱剂（流动相）对组分K值的影响值的影响M1、在固定相上与组分分子的竞争作用、在固定相上与组分分子的竞争作用TT溶剂极性强溶剂极性强溶剂极性强溶剂极性强 洗脱能力强洗脱能力强洗脱能力强洗脱能力强 溶剂强度（溶剂强度（溶剂强度（溶剂强度（0 0）大）大）大）大洗脱剂极性强，易被吸附剂所吸附，即易将组分分子从吸附剂洗脱剂极性强，易被吸附剂所吸附，即易将组分分子从吸附剂洗脱剂极性强，易被吸附剂所吸附，即易将组分分子从吸附剂洗脱剂极性强，易被吸附剂所吸附，即易将组分分子从吸附剂上置换下来，即洗脱能力强，称之为强洗脱剂或溶剂强度大。上置换下来，即洗脱能力强，称之为强洗脱剂或溶剂强度大。上置换下来，即洗脱能力强，称之为强洗脱剂或溶剂强度大。上置换下来，即洗脱能力强，称之为强洗脱剂或溶剂强度大。M2、流动相对组分的溶解能力、流动相对组分的溶解能力TT对组分溶解度大对组分溶解度大对组分溶解度大对组分溶解度大 洗脱能力强洗脱能力强洗脱能力强洗脱能力强 溶剂强度（溶剂强度（溶剂强度（溶剂强度（0 0）大）大）大）大吸附剂对组分的吸附能力一定时，则流动相对组分的溶解能力吸附剂对组分的吸附能力一定时，则流动相对组分的溶解能力吸附剂对组分的吸附能力一定时，则流动相对组分的溶解能力吸附剂对组分的吸附能力一定时，则流动相对组分的溶解能力越强，组分溶解在流动相中越多，组分的越强，组分溶解在流动相中越多，组分的越强，组分溶解在流动相中越多，组分的越强，组分溶解在流动相中越多，组分的K K值越小，移动越快。值越小，移动越快。值越小，移动越快。值越小，移动越快。222021M3、各种溶剂的极性顺序（即强度顺序）、各种溶剂的极性顺序（即强度顺序）TT根据溶剂的极性判断（如前）根据溶剂的极性判断（如前）TT根据文献中根据文献中 0 0值比较值比较TT实验确定实验确定M4、混合溶剂的强度。、混合溶剂的强度。TTP=P=a aP Pa a+b bP Pb b其中其中 为体积分数；为体积分数；P P为极性参数为极性参数232021（二）洗脱剂（流动相）的选择性（二）洗脱剂（流动相）的选择性M1、溶剂与组分分子之间的作用力、溶剂与组分分子之间的作用力TT色散作用、偶极作用、氢键作用、介电作用色散作用、偶极作用、氢键作用、介电作用色散作用、偶极作用、氢键作用、介电作用色散作用、偶极作用、氢键作用、介电作用M2、溶剂的分类、溶剂的分类TT以上四种作用力中，主要考虑偶极、氢键作用力，以上四种作用力中，主要考虑偶极、氢键作用力，以上四种作用力中，主要考虑偶极、氢键作用力，以上四种作用力中，主要考虑偶极、氢键作用力，按它们的大小，把常用的溶剂分类按它们的大小，把常用的溶剂分类按它们的大小，把常用的溶剂分类按它们的大小，把常用的溶剂分类 242021常用溶剂分类组别组别溶剂名称溶剂名称I I脂肪族醚、三烷基胺脂肪族醚、三烷基胺IIII脂肪醇脂肪醇IIIIII吡啶衍生物、吡啶衍生物、THFTHF、酰胺（除甲酰胺外）、乙二醇醚、亚砜、酰胺（除甲酰胺外）、乙二醇醚、亚砜IVIV乙二醇、苯甲醇、甲酰胺、乙酸乙二醇、苯甲醇、甲酰胺、乙酸V VCHCH2 2ClCl2 2、二氯乙烷、二氯乙烷VIVI酮、酯、腈、聚酯酮、酯、腈、聚酯VIIVII卤代芳氢、芳氢、芳香醚、硝基化合物卤代芳氢、芳氢、芳香醚、硝基化合物VIIIVIII水、氯仿、间甲苯酚、氟烷醇水、氯仿、间甲苯酚、氟烷醇252021262021M3、溶剂选择性、溶剂选择性TT处于同一组的溶剂，在色谱分离中具有相似的选择性；处于同一组的溶剂，在色谱分离中具有相似的选择性；处于同一组的溶剂，在色谱分离中具有相似的选择性；处于同一组的溶剂，在色谱分离中具有相似的选择性；TT在分组三角形中相差较远的组中的溶剂，其选择性相差较大：在分组三角形中相差较远的组中的溶剂，其选择性相差较大：在分组三角形中相差较远的组中的溶剂，其选择性相差较大：在分组三角形中相差较远的组中的溶剂，其选择性相差较大：组：良好的质子受体（醚、胺等），优先与含羟基化合物（如组：良好的质子受体（醚、胺等），优先与含羟基化合物（如组：良好的质子受体（醚、胺等），优先与含羟基化合物（如组：良好的质子受体（醚、胺等），优先与含羟基化合物（如酚、羧酸等）作用；酚、羧酸等）作用；酚、羧酸等）作用；酚、羧酸等）作用；组：既可作为质子受体，又可作为质子给体；组：既可作为质子受体，又可作为质子给体；组：既可作为质子受体，又可作为质子给体；组：既可作为质子受体，又可作为质子给体；组：良好的质子给体溶剂（组：良好的质子给体溶剂（组：良好的质子给体溶剂（组：良好的质子给体溶剂（HH2 2OO、CHClCHCl3 3等），与碱性样品优先等），与碱性样品优先等），与碱性样品优先等），与碱性样品优先作用。作用。作用。作用。组（硝基化合物、腈、胺等）：与偶极矩大的组分之间的组（硝基化合物、腈、胺等）：与偶极矩大的组分之间的组（硝基化合物、腈、胺等）：与偶极矩大的组分之间的组（硝基化合物、腈、胺等）：与偶极矩大的组分之间的作用力大。作用力大。作用力大。作用力大。M4、改善选择性、改善选择性TT根据组分的性质，选择合适的溶剂。根据组分的性质，选择合适的溶剂。根据组分的性质，选择合适的溶剂。根据组分的性质，选择合适的溶剂。TT利用多元溶剂，既可调节利用多元溶剂，既可调节利用多元溶剂，既可调节利用多元溶剂，既可调节K K值，又可调节选择性。值，又可调节选择性。值，又可调节选择性。值，又可调节选择性。272021M3、溶剂选择性、溶剂选择性TT处于同一组的溶剂，在色谱分离中具有相处于同一组的溶剂，在色谱分离中具有相处于同一组的溶剂，在色谱分离中具有相处于同一组的溶剂，在色谱分离中具有相似的选择性；似的选择性；似的选择性；似的选择性；M4、改善选择性、改善选择性TT根据组分的性质，选择合适的溶剂。根据组分的性质，选择合适的溶剂。根据组分的性质，选择合适的溶剂。根据组分的性质，选择合适的溶剂。TT利用多元溶剂，既可调节利用多元溶剂，既可调节利用多元溶剂，既可调节利用多元溶剂，既可调节K K值，又可调节选值，又可调节选值，又可调节选值，又可调节选择性。择性。择性。择性。282021吸附剂、被分离物质、流动相的选择原则吸附剂、被分离物质、流动相的选择原则292021五、吸附色谱分离体系的系统选择五、吸附色谱分离体系的系统选择（一）选择固定相（吸附剂）（一）选择固定相（吸附剂）（二）洗脱剂的选择（流动相的选择）（二）洗脱剂的选择（流动相的选择）302021（一）选择固定相（吸附剂）（一）选择固定相（吸附剂）M1、固定相的吸附能力、固定相的吸附能力：TT极性固定相：组分分子极性官能团多，极性固定相：组分分子极性官能团多，则吸附作用强。则吸附作用强。分离极性组分分离极性组分TT非极性固定相：分离非极性组分非极性固定相：分离非极性组分M3、固定相的预处理、固定相的预处理TT活度级别、活化、减活活度级别、活化、减活 312021（二）洗脱剂的选择（流动相的选择）（二）洗脱剂的选择（流动相的选择）选择流动相时，需同时对固定相、流动相及组分的性质全选择流动相时，需同时对固定相、流动相及组分的性质全选择流动相时，需同时对固定相、流动相及组分的性质全选择流动相时，需同时对固定相、流动相及组分的性质全面考虑。面考虑。面考虑。面考虑。M1、对溶剂的要求、对溶剂的要求:TT稳定、粘度低、能溶解样品，浸润固定相、高纯度、挥稳定、粘度低、能溶解样品，浸润固定相、高纯度、挥稳定、粘度低、能溶解样品，浸润固定相、高纯度、挥稳定、粘度低、能溶解样品，浸润固定相、高纯度、挥发性好、安全价廉发性好、安全价廉发性好、安全价廉发性好、安全价廉M2、一般步骤、一般步骤根据固定相和组分的性质，选择一合适强度的溶剂，使根据固定相和组分的性质，选择一合适强度的溶剂，使根据固定相和组分的性质，选择一合适强度的溶剂，使根据固定相和组分的性质，选择一合适强度的溶剂，使KK值在值在值在值在2 25 5范围内，即选用不同溶剂调节范围内，即选用不同溶剂调节范围内，即选用不同溶剂调节范围内，即选用不同溶剂调节K=2K=25 5。若在一定若在一定若在一定若在一定n n下，不能很好分离，则需改善系统的选择性，下，不能很好分离，则需改善系统的选择性，下，不能很好分离，则需改善系统的选择性，下，不能很好分离，则需改善系统的选择性，此时可根据组分的性质，选用二元溶剂系统来改善选择此时可根据组分的性质，选用二元溶剂系统来改善选择此时可根据组分的性质，选用二元溶剂系统来改善选择此时可根据组分的性质，选用二元溶剂系统来改善选择性，同时保持一定的溶剂强度，即使性，同时保持一定的溶剂强度，即使性，同时保持一定的溶剂强度，即使性，同时保持一定的溶剂强度，即使KK在在在在2 25 5。可通过实验选择不同组别的溶剂来筛选。可通过实验选择不同组别的溶剂来筛选。可通过实验选择不同组别的溶剂来筛选。可通过实验选择不同组别的溶剂来筛选。若二元溶剂仍不凑效，可试用三元溶剂。若二元溶剂仍不凑效，可试用三元溶剂。若二元溶剂仍不凑效，可试用三元溶剂。若二元溶剂仍不凑效，可试用三元溶剂。322021六、实验操作基本技术六、实验操作基本技术 经典柱色谱经典柱色谱经典柱色谱经典柱色谱 图示图示图示图示M1、装柱：将固定相装入柱管内、装柱：将固定相装入柱管内柱管：玻璃柱、石英柱、尼龙柱，柱管：玻璃柱、石英柱、尼龙柱，柱管：玻璃柱、石英柱、尼龙柱，柱管：玻璃柱、石英柱、尼龙柱，柱径柱径柱径柱径:柱长柱长柱长柱长1:101:102020TT方法：方法：方法：方法：干法装柱干法装柱干法装柱干法装柱湿法装柱湿法装柱湿法装柱湿法装柱TT注意事项注意事项注意事项注意事项:倾入时，一次性连续倾入柱子，以免由于颗粒大小不倾入时，一次性连续倾入柱子，以免由于颗粒大小不倾入时，一次性连续倾入柱子，以免由于颗粒大小不倾入时，一次性连续倾入柱子，以免由于颗粒大小不同，沉降速度不同，引起柱子出现的分层。同，沉降速度不同，引起柱子出现的分层。同，沉降速度不同，引起柱子出现的分层。同，沉降速度不同，引起柱子出现的分层。搅拌要均匀（除气泡），洗脱过程中不能有气泡。搅拌要均匀（除气泡），洗脱过程中不能有气泡。搅拌要均匀（除气泡），洗脱过程中不能有气泡。搅拌要均匀（除气泡），洗脱过程中不能有气泡。固定相粒度要均匀，即装成的柱子密度要均匀，固定固定相粒度要均匀，即装成的柱子密度要均匀，固定固定相粒度要均匀，即装成的柱子密度要均匀，固定固定相粒度要均匀，即装成的柱子密度要均匀，固定相粒度大小要均匀。相粒度大小要均匀。相粒度大小要均匀。相粒度大小要均匀。332021M2、上样：、上样：TT方法：方法：方法：方法：液体上样：即将样品溶液加到色谱柱顶即可。液体上样：即将样品溶液加到色谱柱顶即可。液体上样：即将样品溶液加到色谱柱顶即可。液体上样：即将样品溶液加到色谱柱顶即可。固体上样：用一定的固定相与样品溶液拌匀，挥干固体上样：用一定的固定相与样品溶液拌匀，挥干固体上样：用一定的固定相与样品溶液拌匀，挥干固体上样：用一定的固定相与样品溶液拌匀，挥干溶剂，将带样品的固定相均匀地加到柱顶。适用于溶剂，将带样品的固定相均匀地加到柱顶。适用于溶剂，将带样品的固定相均匀地加到柱顶。适用于溶剂，将带样品的固定相均匀地加到柱顶。适用于干柱或大量样品分离（粗柱子）干柱或大量样品分离（粗柱子）干柱或大量样品分离（粗柱子）干柱或大量样品分离（粗柱子）TT注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：要使样品谱带窄、均匀、平整要使样品谱带窄、均匀、平整要使样品谱带窄、均匀、平整要使样品谱带窄、均匀、平整不能使柱内产生气泡不能使柱内产生气泡不能使柱内产生气泡不能使柱内产生气泡 342021