白细胞计数和分类.ppt

诊断学诊断学-实验一实验一 白细胞计数白细胞计数 浙江中医药大学附属二院浙江中医药大学附属二院 实验一、实验一、白细胞计数白细胞计数 1.原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。2.试剂器材试剂器材 白细胞稀释液：冰乙酸白细胞稀释液：冰乙酸 2.0ml 10g/L亚甲蓝亚甲蓝 3滴滴 加蒸馏水加蒸馏水 至至100ml器材器材 改良牛鲍血细胞计数板及改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、专用盖片、微量吸管、带孔吸头、带孔吸头、1ML刻度刻度移液管、小试管、洁移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、净软纱布、干棉球、光学显微镜。光学显微镜。毛细血管采血标准操作程序毛细血管采血标准操作程序 操作步骤：操作步骤：1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。或足跟两侧采血。2 轻轻按摩采血部位。轻轻按摩采血部位。3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。4 紧捏刺血部位，使其自然充血。紧捏刺血部位，使其自然充血。5 用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度 23mm，稍加挤压以血液流出为宜。，稍加挤压以血液流出为宜。6 用干棉球擦去第一滴血。用干棉球擦去第一滴血。7 按需要依次采血。按需要依次采血。8 采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。微量吸管的使用微量吸管的使用1将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；指轻微挤压排出适量空气；3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；4用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；5将微量将微量吸管插入小试管底部，吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出三指轻微用力慢慢排出血液，血液，用上清液冲洗管内用上清液冲洗管内余血余血2-3次，轻摇次，轻摇试管试管混匀；混匀；6拔出微量吸管弃入污物桶。拔出微量吸管弃入污物桶。3.操作步骤操作步骤（1）加稀释液加稀释液 用用移液管移液管向小试管内加入向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液白细胞稀释液。（2）采血、稀释用）采血、稀释用微量吸管采血微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试，拭去管外余血，释放于小试 管管底部，用上部底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，稀释液洗净吸管内余血，轻摇轻摇试管试管混匀，静置等其溶混匀，静置等其溶血。血。（3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。支持堤上。（4）充计数池将小试管轻微振荡）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白匀后的白细胞悬液，充入计数池内。细胞悬液，充入计数池内。静置静置2-3min，使细胞沉于，使细胞沉于计数计数池底面池底面。（5）调试显微镜）调试显微镜 将计数板放置载物台上，将计数板放置载物台上，选择（选择（4 ）低倍镜，调节聚低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至低倍镜（低倍镜（10），），调节光调节光亮亮。（6）计数计数 低倍镜下计数四角低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞个大方格内白细胞总数，压线细胞数上不数上不数下，数左不数右数下，数左不数右。4.结果计算结果计算白细胞总数白细胞总数=4大格白细胞数（大格白细胞数（N）/410 20 106 =N 20 109/L用用.109/L（小数点后一位）表示（小数点后一位）表示5细胞计数原则细胞计数原则大方格四边压线细胞数左大方格四边压线细胞数左不数右，数上不数下，不数右，数上不数下，弓形移动弓形移动实验报告内容原理试剂器材操作步骤实验结果讨论诊断学 实验二 白细胞分类白细胞分类1.分分类原理：白原理：白细胞分胞分类计数是将血液制数是将血液制备成涂片，瑞氏染色成涂片，瑞氏染色后后显微微镜下根据白下根据白细胞的形胞的形态特征特征进行分行分类计数。通常分数。通常分类100个白个白细胞，胞，计算得出各种白算得出各种白细胞所占百分比胞所占百分比 2.瑞瑞氏氏染染色色原原理理：瑞瑞氏氏染染料料溶溶于于甲甲醇醇，离离解解为带正正电的的碱碱性性美美兰（M+）和和带负电的的酸酸性性伊伊红（E-）离离子子。细胞胞的的染染色色既既有有物物理理的的吸吸附附作作用用，又又有有化化学学的的亲和和作作用用。各各种种细胞胞成成分分的的化化学学性性质不不同同，对染染料料的的亲和和力力也也不不一一样，故故可可呈呈不不同的着色特点。同的着色特点。3.器材器材n光学光学显微微镜n推片，推片，载玻片玻片试剂nWright染液染液 Wright 1.0g 甲醇甲醇 600mln磷酸磷酸盐缓冲液（冲液（PH6.46.8）n香柏油香柏油标本来源本来源nEDTA-K2抗凝全血抗凝全血 3 3白细胞分类：白细胞分类：细胞分布均匀的体尾交界胞分布均匀的体尾交界处，滴，滴加香柏油一滴，加香柏油一滴，油油镜下分下分类计数。数。分分类时要有要有秩序秩序的的连续进行，避行，避免主免主观选择视野。通常分野。通常分类计数数100个白个白细胞，胞，计算并算并报告各种白告各种白细胞所占比例。胞所占比例。结果记录方式结果记录方式结果记录方式结果记录方式：Ne Ne 正正正正 一一一一 Ly Ly 正正正正Mo Mo 正正正正Eo Eo 正正正正Ba Ba 正正正正q中中性性粒粒细胞胞（Ne）：在在瑞瑞氏氏染染色色血血涂涂片片上上呈呈圆形形，胞胞浆染染粉粉红色色，核核形形一一叶叶（杆杆状状核核）至至五五叶叶不不等等，以以三三叶叶者者多多见，染成深紫染成深紫红色，胞色，胞浆中有中有许多多细小均匀紫小均匀紫红色色颗粒。粒。各类成熟白细胞的形态学：各类成熟白细胞的形态学：q嗜酸性粒嗜酸性粒细胞（胞（Eo）：较中性粒中性粒细胞稍大，胞核多胞稍大，胞核多为两叶，两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，色，胞胞浆内充内充满粗大均匀的嗜酸性粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色粒，瑞氏染色时呈桔呈桔红色，有折光性。色，有折光性。q嗜碱性粒嗜碱性粒细胞（胞（Ba）：胞：胞浆中含有大小不等的嗜碱性中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色粒，瑞氏染色时呈呈兰黑色。于光学黑色。于光学显微微镜下常下常见胞胞浆中有中有小空泡，乃因嗜碱性小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活粒易溶于水或因功能活动而脱而脱颗粒粒所致；核呈淡紫所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。色常看不清，呈杆状或分叶状。q淋巴淋巴细胞（胞（Ly）：胞体呈：胞体呈圆形，在成人血涂片中以小淋形，在成人血涂片中以小淋巴巴细胞胞为多多见，核大呈深紫色致密而，核大呈深紫色致密而浓染，胞染，胞浆量极少；量极少；大淋巴大淋巴细胞胞胞胞浆量量较多，呈清澈的淡多，呈清澈的淡蓝色，可色，可见少量嗜少量嗜苯胺苯胺蓝颗粒，胞核粒，胞核圆或或椭圆，常偏向，常偏向细胞一胞一侧，染色，染色较深。深。单核核细胞（胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上：在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体，胞体圆形、形、椭圆形或不形或不规则形；核形多种多形；核形多种多样，最重要的特点是染色最重要的特点是染色质较细致疏松，呈致疏松，呈丝网状或条网状或条缕状，着色状，着色较淡胞淡胞浆较多，淡多，淡兰色，含大量色，含大量细小小尘土土样颗粒。粒。正常成人外周血白细胞分类参考值：正常成人外周血白细胞分类参考值：Ne 50%70%Ly 20%40%Mo 3%8%Eo 0.5%5%Ba 0%1%实验报告原理方法各类细胞百分比报告讨论