维生素c的定量测定.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,维生素c的定量测定,维生素c的定量测定,第1页,定量测定维生素,C,方法,一,.,氧化还原法,1.,直接碘量法,2.2,6-,二氯酚靛酚滴定法,二,.,分光光度法,1.,紫外快速测定法,2.2,4-,二硝基苯肼法,3.,高铁还原法测定血浆中抗坏血酸,三,.,光电比浊法,四,.,电化学法,五,.,荧光分析法,1.,抗坏铁酸微量荧光测定法,2.,抗坏铁酸总量荧光测定,维生素c的定量测定,第2页,直接碘量法定量测定维生素,C,原理,维生素,c,分子中含有烯二醇基，易被,I2,定量氧化成含二酮基脱氢维生,c,，故可用直接碘量法测定定含量。,从上式能够看出，在碱性条件下有利于反应向右进行，但维生素,c,还原性很强，在碱性环境中易被空气中,O2,氧化，故滴定时加一些,HAc,使滴定在弱酸性溶液中进行，以降低维被空气氧化所造成误差。,维生素c的定量测定,第3页,2,6-,二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素,C,原理,维生素,C,含有很强还原性。它可分为还原性和脱氢型，还原型抗坏血酸能还原染料,2,6-,二氯酚靛酚（,DCPIP,），本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，,2,6-,二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。一旦溶液中维生素,C,已全部被氧化时，则滴下染料马上使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中维生素,C,刚才全部被氧化，此时即为滴定终点。,维生素c的定量测定,第4页,C,C,C,C,C,C,HO,H,HO,HO,O,H OH,O,2,N,OH,Cl,Cl,O,+,C,C,C,C,C,C,O,H,O,HO,O,H OH,O,2,N,OH,Cl,Cl,O,还原型抗坏血酸,氧化型脱氢抗坏血酸,2,，,6,二氯酚靛酚（红色）,还原型,2,，,6,二氯酚靛酚（无色）,O,蓝色,),OH,+,N,Cl,Cl,O,H,H,维生素c的定量测定,第5页,维生素,C,2,，,6,二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间影响。紫外快速测定法，是依据维生素,C,含有对紫外产生吸收和对碱不稳定特征，于,243nm,处测定样品液与碱处理样品液二者消光值之差，经过查标准曲线，即可计算样品中维生素,C,含量。,紫外快速测定法,定量测定维生素,C,原理,维生素c的定量测定,第6页,光电比浊法原理,在酸性介质中,抗坏铁酸与亚硒酸,(H2SeO3),能定量地进行氧化还原反应,.1mol,抗铁酸能将,2mol,亚硒酸还原成硒,.,在一定条件下,生成元素硒在溶液中形成稳定悬浊液,.,当抗铁酸浓度在,0-4mg/25-50ml,范围内,该溶液生成浊度与抗坏铁酸含量成正比,.,将试液置分光光度计上测其浊度能够定量地测定抗坏铁酸,.,维生素c的定量测定,第7页,荧光分析法原理,用酸洗活性炭将抗坏铁酸氧化为顺式脱氢抗坏铁酸,然后与邻苯二胺缩合成一个荧光性化合物,.,样品中其它荧光杂质干扰能够经过向氧化后样品中加入硼酸,使脱氢抗坏铁酸形成 硼酸脱氢抗坏铁酸络合物,它不与邻二苯胺生成荧光化合物,.,这么能够测定其它荧光杂质空白荧光强度而加以校正,.,维生素c的定量测定,第8页,碘量法定量测定维生素,C,（,1,）配制,0.05moll-1I2,标准溶液 称取,6.5g I2,和,12.5gkI,置于小研钵中,加水少许,研磨至全部溶解后移入棕色瓶中,加水,500ml,摇匀后避光阴凉处放置过夜。,（,2,）标定,I2,溶液浓度 吸收,25.00ml I2,溶液置于,250ml,锥形瓶中,加水,50ml,用标定过,Na 2S2O3,标准溶液滴定至浅黄色后,加入,0.2%,淀粉溶液,2-4,滴,继续用,Na2S2O3,溶液滴定至蓝色恰好退去,依据下式计算,I2,溶液浓度。,维生素c的定量测定,第9页,（,3,）维生素,c,含量测定 准确称取约,0.2g,维生素,c,放入锥形瓶中,加入新蒸过蒸馏水,50ml2 moll-1HAc,使其溶解,加淀粉指示剂,1ml,马上用,I2,标准溶液滴定至浅蓝色,按下式计算维生素,c,含量,维生素,C,含量,=c(I,2,),*,V(I,2,),*,M(,维生素,C)/S,样,维生素c的定量测定,第10页,二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素,C,一、试剂,2%,草酸溶液,:,草酸,2g,溶于,100ml,蒸馏水中。,1%,草酸溶液,:,草酸,1g,溶于,100ml,蒸馏水中。,标准抗坏血酸溶液（,1mg/ml,）,:,准确称取,100mg,纯抗坏血酸（应为雪白色，如变为黄色则不能用）溶于,1%,草酸溶液中，并稀释至,100ml,，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。,0.1%2,6-,二氯酚靛酚溶液,:250mg 2,6-,二氯酚靛酚溶于,150ml,含有,52mg NaHCO3,热水中，冷却后加水稀释至,250ml,，贮于棕色瓶中冷藏（,4,）约可保留一周。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。,维生素c的定量测定,第11页,二、材料,苹果、卷心菜等。,三、器材,锥形瓶（,100ml,），组织捣碎器，吸量管（,10ml,），漏斗，滤纸，微量滴定管（,5ml,），容量瓶（,100ml,，,250ml,）。,四、提取,水洗洁净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取,20g,，加入,20ml 2%,草酸，用研钵研磨，四层纱布过滤，滤液备用。纱布可用少许,2%,草酸洗几次，合并滤液，滤液总体积定容至,50ml,。,五、标准液滴定,准确吸收标准抗坏血酸溶液,1ml,置,100ml,锥形瓶中，加,9ml 1%,草酸，用微量滴定管以,0.1%2,6-,二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持,15s,不褪色，即达终点。由所用染料体积计算出,1ml,染料相当于多少毫克抗坏血酸（取,10ml 1%,草酸作空白对照，按以上方法滴定）。,维生素c的定量测定,第12页,六、样品滴定,准确吸收滤液两份，每份,10ml,分别放入,2,个锥形瓶内，滴定方法同前。另取,10ml 1%,草酸作空白对照滴定。,七、计算,式中：,VA,为滴定样品所耗用染料平均毫升数；,VB,为滴定空白对照所耗用染料平均毫升数；,C,为样品提取液总毫升数；,D,为滴定时所取样品提取液毫升数；,T,为,1ml,染料能氧化抗坏血酸毫克数,;,W,为待测样品重量（,g,）。,维生素c的定量测定,第13页,紫外快速测定法定量测定维生素,C,一、材料、仪器与试剂,（一）材料：各种水果蔬菜、果汁及饮料。,（二）仪器：紫外分光光度计、离心机、分析天平、容量瓶（,10ml,25ml,）、移液管（,0.5ml,，,1.0ml,）、吸管、研钵。,（三）试剂,1,10%,盐酸：取浓盐酸,133ml,，加水稀释至,500ml,。,2,1%,盐酸：取浓盐酸,22ml,，加水稀释至,100ml,。,3,1mol/L,氢氧化钠溶液：称取,40gNaOH,，加蒸馏水，不停搅拌至溶解，然后定容至,1000ml,。,维生素c的定量测定,第14页,二、操作步骤,（一）标准曲线制作,1,抗坏血酸标准溶液配制：用分析天平准确称取抗坏血酸,10mg,，加,2ml 10%,盐酸，加蒸馏水定容至,100ml,，混匀。此抗坏血酸溶液浓度为,100ug/ml,。,2.,标准曲线绘制,1,2,3,4,5,6,7,8,标准抗坏血酸溶液加入体积（,ml,）,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.8,1.0,9.9,9.8,9.7,9.6,9.5,9.4,9.2,9.0,总体积（,ml,）,10.0,10.0,10.0,10.0,10.0,10.0,10.0,10.0,抗坏血酸溶液浓度（,ug/ml,）,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,8.0,10.0,维生素c的定量测定,第15页,3,消光值测定：以蒸馏水为空，在,243nm,处测定标准系列抗坏血酸溶液消光值，以抗坏血酸含量（,ug,）为横坐标，以对应消光值为纵坐标作标准曲线。,维生素c的定量测定,第16页,二）样品测定,1,样品提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取,5.00g,于研体中，加入,2-5ml 1%,盐酸，匀浆，转移到,25ml,容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄,清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可经过离心（,1 0000g,10min,）来消除。,2,样品测定：取,0.1-0.2ml,提取液，放入盛有,0.2-0.4ml 10%,盐酸,10ml,容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在,243nm,处测定其消光值。,3,待测碱处理液制备：分别吸收,0.1-0.2ml,提取液，,2ml,蒸馏水和,0.6-0.8ml 1mol/L,氢氧化钠溶液依次放入,10ml,容量瓶中，混匀，,15min,后加入,0.6-0.8ml 10%,盐酸，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在,243nm,处测定其消光值。,维生素c的定量测定,第17页,4,由待测样品与待测碱处理样品消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中维生素,C,含量。,5,也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液消光值，经过查标准曲线，计算出样品维生素,C,含量。,四、计算,V,总,Vc,含量（,g/g,）,=,V1W,总,式中：,从标准曲线上查得抗坏血酸含量（,g,）,V1,测消光值时吸收样品溶液体积（,ml,）,V,总,样品定容体积（,ml,）,W,总,称样重量（,g,）,维生素c的定量测定,第18页,关于维生素,C,常识,维生素,C,是人类营养中最主要维生素之一，缺乏它时会产生坏血病，所以又称为抗坏血酸（,ascorbic acid,）。它对物质代谢调整含有主要作用。多年来，发觉它还有增强机体对肿瘤抵抗力，并含有化学致癌物阻断作用。,维生素,C,是含有,L,系糖型不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物绿色个别及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中含量更为丰富。,维生素c的定量测定,第19页,