革兰氏阳性无芽胞杆菌.pptx

,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第二十一章 革兰氏阳性无芽胞杆菌第二十二章,G+,形成芽孢的细菌,李氏杆菌和猪丹毒丝杆菌所引起的疾病是临床上常见多发病。前者的代表种为产单核细胞李氏杆菌是一种胞内寄生菌，产生溶血素，可用增菌法鉴出。后者是常见的猪病的重要病原性细菌，自然界中分布十分广泛，明胶穿刺培养成试管刷状。炭疽杆菌是炭疽的病原，该病有重要的公共卫生意义。该菌在形态上有双重性，以其荚膜和毒素致病，该菌的微生物学诊断十分重要。致病性梭菌很多，它们在形态、培养特点、所致疾病方面各有特点，但多以毒力强大的外毒素致病，其中以气肿疽梭菌、腐败梭菌、诺维氏梭菌较为重要。,章节题目：,第,21,章 革蓝氏阳性无芽孢杆菌,第,22,章 革蓝氏阳性产芽孢杆菌,目的要求：,掌握坏死杆菌、李氏杆菌、猪丹毒丝杆菌和炭疽杆菌的重要特性；重要病原性梭菌的异同点,了解肾杆菌的主要特性,本节重点：,坏死杆菌、李氏杆菌、猪丹毒丝杆菌和炭疽杆菌的重要特性,本节难点：,无,第十二章 革兰氏阳性无芽胞杆菌,有,3,个属：,李氏杆菌属,丹毒丝菌属,肾杆菌属,第一节 李氏杆菌属,本属细菌为,G+,杆菌,需氧或兼性厌氧,无芽胞,无荚膜,2025,下能运动,37,不运动,有,7,个种：,产单核细胞李氏杆菌,伊氏李氏杆菌,韦氏李氏杆菌,塞氏李氏杆菌,格氏李氏杆菌：不致病,莫氏李氏杆菌：不致病,产单核细胞李氏杆菌,一、所致疾病：,细胞内寄生菌，牛羊易感，小牛、羔羊表现为败血症或肝脏坏死，成年牛间表现为神经症状的,“,转圈病,”,，母畜可致流产。,孕妇可致流产，儿童出现神经症状，兽医易患皮肤型李氏杆菌病。,产单核细胞李氏杆菌,二、形态及染色特点：,G+,规则的短杆菌，呈,“,发渣,”,状，两端钝圆，有时排列成,V,型，,20-25,下培养产生,4,根周身鞭毛，,37,下一根鞭毛，无芽孢，无荚膜。,三、培养及生化特性,普通培养基上可生长，但加入血液或血清生长更佳，,4,下可缓慢增殖（特点）。,1,血清琼脂：圆形，光滑透明，淡蓝色小菌落。,2,血平板：,型狭窄溶血环。棒状杆菌和丹毒杆菌为,溶血。,三、培养及生化特性,3,肉汤：均匀浑浊，时间久可形成粘稠 沉淀，无菌环，无菌膜。,4,明胶穿刺：沿穿刺线生长，呈倒立树 木状，不液化明胶。,5,生化特点：发酵糖产酸不产气，其他具体看书。,四、微生物学诊断,1,分离培养及鉴定,取患畜血液，脑组织研磨液，加入,50ml,胰蛋白胨肉汤中,3724h,划线含有,5%,绵羊血的胰蛋白胨琼脂是否有,溶血及淡蓝色小菌落。,四、微生物学诊断,1,分离培养及鉴定,挑取特征性菌落作纯培养后，用纯培养物作以下试验：染色：,G+,短杆菌。溶血性检查：,溶血，,20,25,运动。,生化试验：略,动物致病试验：肉汤培养物鸽子胸肌注射,1ml,，豚鼠皮下,1ml,，,2-5d,内鸽子死亡，豚鼠死亡。,2,血清学检查：凝集反应。,病羊，牛，猪血清凝集价达,12501500,。,马：,11000,12500,流产牛：,1800,11600,五、免疫防治,1,灭活强毒菌株免疫小鼠产生数月坚强免疫力。,2,免疫能通过淋巴细胞被动转移，但不能通过血清,被动转移。,第二节 丹毒丝菌属,只有,1,个种，即：猪丹毒丝菌（猪丹毒杆菌）,一、所致疾病,1,引起,3,12,月龄猪丹毒，,3,4,周岁羔羊慢性多发性关节炎，鸡，火鸡衰弱和下痢、鸭的败血症并侵害输卵管。,第二节 丹毒丝菌属,一、所致疾病,2,实验动物以小鼠和鸽子最易感，家兔和豚鼠抵抗力强。,3,人感染后发生皮肤病变称,“,类丹毒,”,，病状与人的丹毒病相似，人的丹毒病由化脓性链球菌属致。,猪丹毒病理,一、发病机理,二、病理变化,（,如图,）,（一）、急性败血型,（二）、亚急性疹块型,（三）、慢性型,1,、猪丹毒心内膜炎,2,、慢性猪丹毒关节炎,3,、皮肤坏死,二、形态及染色特征,G+,直或稍弯曲的细杆菌,单在或,V,形排列,在慢性病猪的心内膜中呈长丝状，无荚膜，无芽胞，无鞭毛。,三、培养特性,微需,O,2,或兼性厌氧，普通培养基上不生长。,1,血平板：湿润，光滑透明，灰白色露珠样的圆形小菌落，,溶血（李氏杆菌狭窄的,溶血）。,三、培养特性,2,血清肉汤：轻度混浊，有少量白色粘稠沉淀，无菌环，无菌膜。,3,明胶穿刺：沿穿刺线横向四周生长，如试管刷状，不液化明胶。,4,麦康凯平板：不生长。,四、微生物诊断,1,取材：高热期病猪静脉采血，死后取心脏，肝、脾，肾，骨髓，淋巴结，涂片染色镜检，,G+,细杆菌，可初步诊断。,2,分离培养,血平板：露珠状小菌落，,溶血,麦康凯：不生长,3,动物致病性试验,病料制成盐水乳剂，小鼠皮下,0.2ml,，鸽子胸肌,1ml,，豚鼠皮下,1ml,。结果：,小鼠，鸽子，,2-5d,，死亡，尸体剖检可分离大量丹毒菌。豚鼠不反应。,4,血清学诊断：凝集反应。,（,1,）玻片法：取标准抗原,2,滴，,1,个加病猪血清，另一个加生理盐水，,2min,内凝集为,+,。,（,2,）试管法：将血清作,150,和,1100,释稀,2,管，每管,1ml,，加标准抗原,12,滴。,37,放,2-4 h,，如,150,凝集，为阳性。,免疫荧光试验，环状沉淀试验。,五、免疫治疗,1,本菌有良好免疫原性，应用猪丹毒活菌苗,GC,42,。,2,灭活疫苗：三联苗（猪瘟，猪丹毒，猪肺疫）。,3,抗猪丹毒血清预防及治疗。,4,青霉素治疗。,第三节 肾杆菌属,鲑肾杆菌：,致鲑鱼、鳟鱼的细菌性肾病，,外观无明显变化，,剖检可见肾脏的乳白色颗粒肉芽肿病灶。,本次小节,李氏杆菌和猪丹毒丝杆菌所引起的疾病是临床上常见多发病,前者的代表种为产单核细胞李氏杆菌,是一种胞内寄生菌，产生溶血素，可用增菌法鉴出,后者是常见的猪病的重要病原性细菌，自然界中分布十分广泛，明胶穿刺培养成试管刷状,第十三章,G+,形成芽孢的细菌,产芽孢的细菌包括,6,个属：,芽孢杆菌属：引起动物疾病,梭菌属：引起动物疾病,芽孢乳杆菌属,脱硫肠状菌属,芽孢八叠球菌属,颤螺菌属,第一节 芽孢杆菌属,本属种类繁多有,34,个正式种和,24,个不正式种，对人畜致病的主要是：,炭疽芽孢杆菌：致炭疽,蜡状芽孢杆菌：引起食物中毒,一、炭疽芽孢杆菌,（一）致病性：能引起人和动物的炭疽病,1,、牛、绵羊，鹿等最易感：急性败血症。,2,、猪、马、骆驼、山羊次之：猪表现为慢性咽部局限感染。,3,、狗、猫食肉兽有相当抵抗力：表现为肠炭疽。,4,、禽类不感染。,5,、人由于接触病畜尸体或污染畜产品：引起肠炭疽，肺炭疽，皮肤炭疽。,6,、死亡家畜通常表现为尸僵不全，血液凝固不良，呈煤焦油状，天然孔出血。,炭疽病理,一、发病机理,二、病理变化,（一）、败血型炭疽（,如图,）,（二）、痈型炭疽,1,、咽炭疽,（,1,）、急性咽炭疽,（,2,）、慢性咽炭疽,2,、皮肤炭疽痈,3,、肠炭疽痈,4,、肺炭疽痈,（二）形态及染色特征,G,+,大杆菌，无鞭毛，不运动，芽胞位于菌体中央，直径不大于菌体，可形成荚膜。,在动物组织或血液中，单在或,2,5,个菌连接成短链，菌体矢直，菌端平截而呈,“,竹节状,”,，围绕以丰厚的荚膜，荚膜抗腐败能力强，菌体因腐败而消失后，荚膜仍可残留称为,“,菌影,”,。,组织中的菌体只有遇到游离氧时，才形成芽孢。所以怀疑为炭疽病时，严禁剖检，避免与,O,2,接触，耳尖采血涂片。,在培养基中，形成长链，在普通培养基上不形成荚膜，并于培养,18,24h,开始形成芽孢。,体内炭疽杆菌,体外炭疽杆菌,（三）培养特性,需氧兼性厌氧，营养要求不高。,1,普通培养基上：强毒株形成灰白色不透明，大而扁平，表面干燥，边缘呈卷发状的粗糙菌落（,R,）；弱毒株形成小而隆起，光滑湿润，边缘整齐的,S,型菌落。,2,血平板：不溶血（类炭疽呈,溶血）,3,普通肉汤：上部清朗，底部有絮状沉淀，无菌环和菌膜，轻摇试管，沉淀物徐徐上升，缠绕成团而不散开。,培养特点,（三）培养特性,4,明胶穿刺：,沿穿刺线缓慢液化，形成倒立的松树状。,5,青霉素串珠试验,：,在含有,0.5,单位,/ml,的青霉素培养基中培养时，由于细胞壁中粘肽合成受到抑制，因而形成原生质体相互连接成串称为,“,串珠反应,”,，这是该菌特有的反应。,（四）生化特性,糖发酵：,G+,蔗,+,麦,+,菊,+,蕈糖,+,果糖,+,甘油,+,伯胶糖,木甘露醇淀粉,+,硝酸盐还原,+,吲哚,H,2,S,H,2,O,2,+,（五）抵抗力,1,繁殖体的抵抗力不强：,60 30,60min,杀死,75 5,15min,杀死。一般消毒剂短时间内可将其杀死，未剖检的尸体，细菌随腐败而迅速死亡。,2,芽胞抵抗力特强：干燥状态下存活,10,年，土壤中,20,30,年,。,（六）抗原性：,有,4,种主要抗原成分,1,荚膜多肽抗原：与毒力有关，是一种半抗原，此抗原的抗体无保护作用，但有特异性较强，可用该抗体进行荚膜肿胀试验及荧光抗体法进行鉴定细菌。,（六）抗原性：,有,4,种主要抗原成分,2,菌体多糖抗原：当毒力无关，但性质稳定，耐高温高压，抗原性不被破坏。可用来制备炭疽热沉淀反应用抗原，即,Ascoli,氏反应。此法特异性不高，与其它芽孢菌能发生交叉反应。,3,保护性蛋白抗原（,PA,）：是毒素组成成分，具有免疫原性，能使机体产生抗体保护被感染。,4.,芽孢抗原,（七）毒素和毒力,1,荚膜：抗吞噬和消除抗体作用，利于细菌扩散。,2,炭疽毒素：包括水肿毒素和致死性毒素,2,种，由,3,个亚单位组成：,水肿因子（,EF,）（脂蛋白）,致死因子（,LF,）（蛋白质）,保护性抗原（,PA,）（蛋白质）,三者单独均无毒性作用，只有,PA-EF,或,PA-LF,结合才有致病作用。,作用机理：毒素作用于微血管内皮,C,，使之通透性增强，损害肾脏，干扰糖代谢，引起弥散性血管内凝血，导致动物死亡。,（八）微生物学诊断,严禁剖检，自耳根部采血，必要时切开肋间取脾脏，皮肤炭疽取渗出液。,1,细菌学检查,取材、涂片、染色、镜检：发现有荚膜的竹节状大杆菌（初步诊断）。,分离培养：,a.,普通平板。,b.,血平板。,c.,选择性培养基：如戊烷脒琼脂、,溶菌酶正铁,血红素琼脂、,Knisely,培养基，,37 16,20h,挑选可疑菌落与其它大杆菌作鉴别诊断。,生化试验,致病性试验：被检病料制成,15,悬液，小白鼠,0.1ml,皮下注射，兔、豚鼠,0.2-0.3ml,，动物死于败血症，剖检取脏器涂片镜检可见,G+,有荚膜大杆菌，确诊。,2,血清学试验：用已知抗体，检测炭疽抗原。,Ascoli,氏沉淀反应：,1902,年创立，用加热抽提炭疽杆菌多糖抗原与已知抗体进行沉淀反应，适用于各种病料、皮张、腐败尸体。缺点是特异性不高，敏感性差。,间接血凝试验：抗血清吸附于炭粉或乳胶上，进行玻片凝集试验。,青霉素串珠试验。,荧光抗体试验。,琼脂扩散试验：检查是否有,PA,产生。,（九）防治,1,号炭疽芽胞苗：巴斯德将强毒株,42.5,培养,10-12,天，使其丧失形成芽孢的能力，然后,35,培育,4-7,天，使其恢复形成芽孢的能力，用这种细菌制成疫苗叫,号炭疽芽胞苗。,2,无毒炭疽芽孢苗：南非畜牧兽医研究所选育的一株弱毒变种，失去形成荚膜能力，比,号炭疽芽孢易余毒力强。此疫苗对山羊有强烈反应,可引起严重反应，甚至死亡。,3,抗炭疽血清,以下图片为鼠疫相关,鼠疫的坏死及出血,二、蜡样芽孢杆菌,广泛存在在于自然界，如土壤、水、空气、饲料、食品，一定条,件下，对人致病：引起人胃肠道感染（食物中毒）、眼球炎、新,生儿上呼吸道感染和脐带炎。自然情况下，引起牛的乳腺炎，驴,的皮下水肿，犬，猫腹泻。,蜡样芽孢杆菌,第二节 梭菌属,一、属的特性,厌氧芽孢杆菌，芽孢呈卵圆形或圆形，直径大于菌体，使菌体膨大呈梭形，故得名。大多数有鞭毛（魏氏梭菌除外），无荚膜（魏氏梭菌除外），,G+,。,二、分类及所致疾病,本属有,80,个种，多为非致病菌，常见致病菌约为,11,种。,三、疾病类型及诊断原则,疾病类型有,5,大类。,1,气肿疽与恶性水肿：急性败血症且有气性水肿症状。,气肿疽：气肿疽梭菌引起，经消化道感染。,恶性水肿：病原复杂，动物（腐败梭菌）、人,（,A,型产气荚膜梭菌）。,诊断原则：病原菌的检查。,2,羊快疫、羊猝狙、肠毒血症、黑疫、细菌性血红素尿：均为毒血症。,（,1,）羊猝狙：,C,型魏梭菌引起。,（,2,）肠毒血症：,B,型魏氏梭菌引起。,这两个病，细菌不一定侵入体内，而在肠道中产生毒素，故微生物诊断主要靠肠内容毒素检查（查毒素）,2,羊快疫、羊猝狙、肠毒血症、黑疫、细菌性血红素尿：均为毒血症。,（,3,）羊快疫：腐败梭菌经消化道感染，进入血液造成败血症，主要检查病原。,（,4,）黑疫：,B,型诺维氏梭菌,（,5,）细菌性血红素尿：溶血梭菌此二菌存在于肝脏，当肝受损时，乘机繁殖，产生毒素致病，主要查病原，次要查毒素。,3,羔羊痢疾，犊牛痢疾，人禽的坏死性肠炎,由魏氏梭菌在肠道内产生毒素所致，细菌不一定侵入体内，主要查毒素。,4,人畜的肉毒中毒、人魏氏梭菌食物中毒：均由病原菌在食物或饲料中生长繁殖，产生毒素被食入而中毒。,肉毒症：,主要检查肉毒毒素，其次细菌学检查。,魏氏梭菌食物中毒：,可疑食物分离细菌，并测定其,毒素产生能力。,5,破伤风：破伤风梭菌经伤口感染，产生破伤风毒素引起，症状极为特征,“,木马状,”,，不需微生物诊断。,四、梭菌属分离鉴定应注意事项,1,专性厌氧，必须采用厌氧培养物。焦性没食子酸法、共栖法，肝块肉汤、铁钉牛乳。,2,培养基必须是新鲜配制，厌氧条件下保存。,3,梭菌在培养基表面蔓延生长，不易得到单个菌落，为了得到单个菌落，可将琼脂量加到,46%,（一般,2%,），或划线接种后在表面再加注一层琼脂培养基，以限制其蔓延生长。,四、梭菌属分离鉴定应注意事项,4,污染严重时，,80 20min,杀死杂菌，,25,下培养。,5,腐败梭菌，魏氏梭菌容易在死后侵入动物体，而诺维梭菌、溶血梭菌存在正常动物体内，故从动物体分离出这些梭菌，并不能肯定它们就是病原，应进行毒力测定。,五、产气荚膜梭菌,旧名：魏氏梭菌，自然界分布广，可见于污水，土壤，饲料，食物及人畜肠道中，一定条件下，引起多种严重疾病。,（一）形态染色特征,G,+,粗大正直杆菌，单在或成双排列，无鞭毛，一般条件下培养芽孢很少产生，有荚膜。,产气荚膜梭菌,（二）培养特性,厌氧要求不高，普通培养基上易生长。,1,葡萄糖血平板：圆形，光滑，隆起，淡灰白色中等大小菌落，有的可形成圆盘形边缘呈锯齿状，表面有辐射状条纹的,“,勋章,”,样大菌落，产生,“,双重溶血环,”,内环,溶血，外环为,溶血。,2,肝块肉汤：,5-6h,，均匀浑浊，产生大量气体。,（三）生化特性,1,牛乳暴烈发酵：魏氏梭菌接种牛乳培养基,8-10h,后，发酵牛乳中的乳糖使牛乳酸凝，同时产生大量气体使凝块变多孔的海绵状，严重时，被冲成数段，甚至喷出管外。,2,明胶液化，糖发酵,H,2,S+,吲哚,HNO,3,（四）型别及病原性,据毒素将该菌分为,5,个型：,A,，,B,，,C,，,D,，,E,A,型产气荚膜梭菌：引起人畜气性坏疽，食物中毒，牛、羔羊、仔猪、兔、肠毒血症。,B,：羔羊痢疾，其它动物肠毒血症。,C,：绵羊猝狙，还有肠毒血症及坏死性肠炎。,D,：羔羊，绵羊，牛肠毒血症。,E,：犊牛，羔羊肠毒血症，但很少发生,（五）微生物学诊断,细菌学诊断意义不大，因为魏氏梭菌是人畜肠道中常见菌，或者死后被侵入，从病料中检出该菌并不能说明它就是病原。必须进行肠内容物毒素检查。,1,方法：,回肠内容物加适量灭菌生理盐水作,1-3,倍稀释离心取上清，滤过除菌滤液静脉注射家兔（,1-3ml,），小鼠（,0.1-0.3ml,）,数分钟至,10,小时内死亡，证明有毒素存在。,2,为了进一步证明是否为魏氏梭菌毒素及毒素型，必须进行毒素中和试验。,方法：上述滤液,3,份。,I+C,型魏氏梭菌抗毒素血清,+D,型魏氏梭菌抗毒素血清,37,作用,40min,静脉注射小鼠或兔子,+,生理盐水,观察,12h,记录结果如下：,D,型抗毒素血清可保护,C,型抗毒素血清也可保护,A,型毒素,C,型抗毒素血清不能保护,D,型毒素,D,型抗毒素血清不保护,C,型抗毒素血清可保护,B,型或,C,型毒素,C,型也不保护,可能是,E,型或不是魏氏梭菌毒,素，再用,E,型血清试验确定,E,型能保护,E,型毒素,。,E,型不能保护,不是魏氏梭菌毒素,。,不能区分,B,型或,C,型毒素时，滤液中加入,0.250.5%,胰酶，,37,作用,30-60min,，离心沉淀取上清再与,C,型抗血清进行中和保护试验。,C,型抗毒素血清不能保护,B,型毒素,C,型抗毒素血清能保护,C,型毒素,（原因,B,型毒素中的,毒素尚为不显毒性的原生毒素时，可被,C,型,血清中和；,原生毒素被细菌产生的蛋白酶激活，显示出毒力，,C,型血清就不能中和它了）。,（六）免疫防治,羊快疫，羊猝狙，肠毒血症，三联苗防治,六、肉毒梭菌,一种腐生性细菌，分部广泛，不能在活的机体内生长繁殖。在一定条件下，生长繁殖产生肉毒毒素，人畜食入毒素污染的食物饲料引起中毒。肉毒毒素是迄今已知化学毒素及细菌毒素中毒性最强的一种，比,KCN,强,10000,倍，,1g,杀死,20,亿只老鼠，,100,万个人。,七、气肿疽梭菌,又名费氏梭菌，俗称黑腿病杆菌，引起气肿疽。主要发生于牛，症状主要是肌肉丰满部位发生气性水肿，受害肌肉呈暗红色，故又称为黑腿病。,八、腐败梭菌,引起人和动物的恶性水肿，还引起羊快疫。,九、诺维梭菌,按照其毒素差异，可分,4,个菌型：,A,型：引起人和动物恶性水肿，又称水肿梭菌，公羊因斗殴引起头部感染而发生,“,大头病,”,。,B,型：引起绵羊的黑疫，患病动物皮下静脉显著充血，使皮肤呈暗黑色外观。,C,型：引起水牛骨髓炎，表现为骨髓的渐进性坏死与化脓,（仅发病于印尼）。,D,型：引起牛的细菌性血红尿，（我国尚无报道）。,十、破伤风梭菌,引起人畜的破伤风，以骨骼肌发生强直性痉挛的症状为特征。,必须有伤口才感染。,破伤风梭菌，革兰染色 破伤风梭菌是细的末端有芽胞的革兰阳性杆菌。芽胞中心不染氏。（革兰染色，放大,1000,倍,）,本次小节,炭疽杆菌是炭疽的病原，该病有重要的公共卫生意义,该菌在形态上有双重性，以其荚膜和毒素致病，该菌的微生物学诊断十分重要,致病性梭菌很多，它们在形态、培养特点、所致疾病方面各有特点，但多以毒力强大的外毒素致病，其中以气肿疽梭菌、腐败梭菌、诺维氏梭菌较为重要,