元胡止痛胶囊的含药血清对痛经模型动物的影响.pdf

2010 年 8 月第 20 卷第 8 期中国比较医学杂志CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINEAugust，2010Vol.20No.8檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵殝殝殝殝研究报告 基金项目 浙江省分析测试基金项目(04003)。作者简介 方远书(1968 )，男，兽医师，主要研究方向:实验动物学。E-mail:F19680103 。通讯作者 何忠平(1964 )，男，主任药师，研究方向:动物实验与管理。E-mail:jhshaoyq 。元胡止痛胶囊的含药血清对痛经模型动物的影响方远书，何忠平，张辉，裘颖儿(浙江省金华市食品药品检验所，金华321000)【摘要】目的采用血清药理学实验方法，观察元胡止痛胶囊的含药血清对痛经模型动物的影响。方法缩宫素诱发大鼠痛经模型和前列腺素 E 诱发小鼠痛经模型法，对大鼠离体子宫收缩活动的影响。结果元胡止痛胶囊的含药血清能减少缩宫素所致大鼠扭体反应次数和前列腺素 E1所致小鼠扭体反应次数，并能拮抗缩宫素对大鼠离体子宫的收缩作用。结论元胡止痛胶囊的含药血清对痛经模型动物有镇痛作用，并对大鼠离体子宫收缩有解痉作用。【关键词】元胡止痛胶囊;含药血清;痛经;模型，动物【中图分类号】R-33【文献标识码】A【文章编号】1671-7856(2010)08-0035-03Effect of the Drug Containing Serum of Yuanhuzhitong Capsule inAnimal Model of DysmenorrheaFANG Yuan-shu，HE Zhong-ping，ZHANG Hui，Qiu Ying-er(Jinhua Institute for Food and Drug Control，Jinhua，Zhejiang 321000，China)【Abstract】ObjectiveTo observe the effect of the drug-containing serum of a traditional Chinese medicine，Yuanhuzhitong capsule，on animal model of dysmenorrhea.MethodsOxytocin-induced rat model of dysmenorrhea andprostaglandin E-induced mouse model of dysmenorrhea were prepared，and were treated with the drug containing serum.The effect of the drug-containing serum on isolated rat uterus was examined as well.ResultsThe drug containing serum ofYuanhuzhitong capsule reduced the times of oxytocin-induced and prostaglandin E1-induced writhing response，and excertedantagonistic effect on the oxytocin-induced contraction of isolated rat uterus.ConclusionThe drug containing serum ofYuanhuzhitong capsule has an analgesic effect on rat and mouse models of dysmenorrhea，and excerts a spasmolytic effecton the contraction of isolated rat uterus.【Key words】Yuanhuzhitong capsule;Drug-containing serum;dysmenorrhea;Model，rat元胡止痛胶囊是浙江天一堂药业公司生产产品，具有理气、活血、止痛之功能，对气滞血瘀的胃痛、肋痛、头痛及月经痛有较好的治疗作用，主要由元胡、白芷等组成。本实验采用血清药理学实验方法，选择含药血清对缩宫素诱发大鼠痛经模型和前列腺素 E 诱发小鼠痛经模型的作用，及对缩宫素引起的大鼠离体子宫收缩的作用。来比较不同时间段的含药血清的作用强弱，以确定其药效关系。1材料和方法1.1试验材料与仪器元胡止痛胶囊，批号 080504，规格 2.5 g，浙江天一堂制药公司;缩宫素注射液，南京新天生物化学制药有限公司，批号 080705;注射用前列腺素 E1，哈药集团第六制药厂，批号 090106;已烯雌酚注射液，上 海 通 用 药 业 股 份 有 限 公 司，批 号 080403。Medlab-u/Ac501H 生物信号采集处理系统，南京美易科技有限公司产品，张力换能器(10g)，北京新航兴业科贸易有限公司。1.2动物新西兰家兔，金华市药检所动物中心提供，合格证号 SCXK(浙)2006 0078。SD 大鼠，浙江省实验中心提供，合格证号 SCXK(浙)2009 0039。ICR小鼠，金华市药检所动物中心提供，合格证号 SCXK(浙)2009 0040。1.3含药血清的制备取新西兰家兔 40 只，体重 2.5 3.0 kg，每只兔均灌胃给药，剂量 1 mL/kg(给药剂量=临床常用量 动物等效剂量系数 培养基内的稀释度)，每天早、晚各 1 次，连续给药 7 d，各兔分别于最后一次给药后后马上取血(以 0 h 表示)、0.5h、1.5 h、3 h 取血 1 mL，置 4 保存 2 h，待血液凝固，血清析出后，3 000 r/min 离心 10 min，取血清，40 只兔血清合并在一起，置 20 冰箱保存备用。1.4对缩宫素所致大鼠扭体反应的影响 1雌性大鼠 30 只，体重(200 20)g，随机分为 5组，连续皮下注射己烯雌酚(人工造成动物处于相同的动情期，并提高子宫平滑肌对药物的敏感性)10 d，每日 1 次(首日 0.8 mg/只，第 2 天至第 9 天0.4 mg/只，第 10 天 0.8 mg/只)，皮下注射己烯雌酚的大鼠第 5 天开始给受试药，连续灌胃 7d。末次给己烯雌酚 24 h 后，再给一次实验药物，40 min 后腹腔注射缩宫素 2 U/只，记录给缩宫素 30 min 内大鼠发生的扭体反应次数(大鼠腹部收缩内凹，躯干与后肢伸展，臂部与侧肢体内旋，为子宫收缩即痛经的指标)。1.5对前列腺素 E1所致小鼠扭体反应的影响 2雌性小鼠 50 只，体重(20 2)g，随机分为 5 组，连续皮下注射己烯雌酚 10 d。(第 1 天、第 10 天为0.2 mg/只，其余每天注射 0.1 mg/只)，在注射己烯雌酚的第 5 天开始，连续灌胃给药 7 d，末次给己烯雌酚 24 h 后，再给 1 次受试药物，40 min 后腹腔注射前列腺素 E112.5 g/10 g，观察 30 min 内小鼠发生的扭体反应次数。1.6对大鼠离体子宫的影响营养液与温度的选择:参照不同的文献，笔者通过反复的预试验，最后选定文献 3 方法，在此温度与营养液条件下子宫既能够消除自律收缩，又能保持其敏感性。大鼠 120 200 g，雌性，实验前 24 h按 0.2 mg/100 g 体重皮下注射己烯雌酚促使动物处于动情期，以提高子宫对药物的敏感性。实验开始前将动物处死，剪取 2 cm 长之子宫，固定于盛有子宫营养液的麦氏浴槽中(15 mL)，另一端与张力换能器连接，换能器与电脑相连，调节样品前负荷为 1 g(从电脑中可以直接量出子宫肌张力)，麦氏浴槽中不断通入 O2，速度每秒 1 2 个气泡。待子宫活动平稳后，从浴槽上方加入 0.05 U(浴槽终浓度为 0.003 U/mL)缩宫素，子宫平滑肌开始收缩，并且能在最高处稳定 30 min，我们在缩宫素作用 10min 后加入含药血清，观察子宫收缩情况。2结果2.1对缩宫素所致大鼠扭体反应的影响由表 1 可见，与 0 时间取血的元胡止痛胶囊含药血清比较，其 0.5、1.5、3 h 取血的含药血清能明显减少大鼠扭体反应次数，其中 1.5 h 取血的含药血清作用最强。表 1对缩宫素所致大鼠扭体反应的影响(珋x s，n=10)Tab.1Effect on writhing response of oxytocin-induceddysmenorrhea model rats(珋x s，n=10)取血时间(h)Time to take blood剂量(mL/kg)Dose扭体次数Writhing number00.215.9 2.60.50.27.3 2.21.50.21.9 0.73.00.28.8 2.9注:与 0 h 取血血清组比，P 0.01，P 0.05Note:vs.the serum taken at 0 h2.2对前列腺素 E1所致小鼠扭体反应的影响由表 2 可见，与 0 时间取血的元胡止痛胶囊含药血清比较，其 0.5、1.5、3 h 取血的含药血清能明显减少小鼠扭体反应次数，其中 1.5 h 取血的含药血清作用最强。表 2对前列腺素 E1所致小鼠扭体反应的影响(珋x s，n=10)Tab.2Effect on writhing response of prostaglandin E-induceddysmenorrhea model mice(珋x s，n=10)取血时间(h)Time to take blood剂量(mL/kg)Dose扭体次数Writhing number00.232.3 5.00.50.221.7 3.61.50.213.8 3.73.00.228.2 3.9注:与 0 h 取血血清组比，P 0.01，P 0.05Note:vs.the serum taken at 0 h63中国比较医学杂志 2010 年 8 月第 20 卷第 8 期Chin J Comp Med，August 2010，Vol.20.No.8表 3对缩宫素所致大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响(珋x s，n=6)Tab.3Effect on the contraction of isolated rat uterus smooth muscle of oxytocin-induced dysmenorrhea model rats(珋x s，n=6)取血时间(h)剂量(mL)加缩宫素肌张力(g)加药后肌张力(g)抑制率(%)Time to take bloodDoseMuscle tension after oxytocinMuscle tension after drugInhibition00.52.89 1.262.80 1.3100.50.53.01 1.521.32 1.1256.11.50.52.85 1.360.86 0.6669.83.00.52.92 1.351.95 1.3233.2注:同组之间加缩宫素后与再加含药血清后肌张力比较p 0.01，p 0.05Note:Comparison of the muscle tension between the same groups after adding of oxyntocin and that after further adding of drug-containing serum2.3元胡止痛胶囊不同时间取血的含药血清对大鼠离体子宫的影响由表 3 可见，当加入含药血清后子宫肌张力降低，不同时间取血，其作用不同，1.5 h 取的含药血清作用最强。3讨论元胡止痛胶囊，具有理气、活血、止痛之功能，对气滞血瘀的胃痛、肋痛、头痛及月经痛有较好的治疗作用。痛经多与子宫平滑肌痉挛性收缩、子宫供血不足或子宫炎症有关。缩宫素和前列腺素 E1可从不同机制引起子宫平滑肌痉挛(类痛经反应)，是较公认的痛经模型 4。注射己烯雌酚是给动物催情，人工造成动物处于相同的动情期，并提高子宫平滑肌对药物的敏感性。本试验采用不同时间取血的元胡止痛胶囊含药血清，观察其对动物痛经模型作用。结果元胡止痛胶囊含药血清能明显缓解缩宫素和前列腺素 E1所致的大鼠、小鼠扭体反应，其中 1.5h 取的含药血清作用最强。我们用 HPLC 测定不同时间取血的血清中延胡索乙素含量，结果血清中延胡索乙素含量从高到低依次为 1.5、0.5、3.0 h 取的血清，说明镇痛作用主要是延胡索乙素，并与含量呈正比关系。由于中药口服后其有机成分常在胃肠道内受到消化液和肠菌微生物生态转化，也就是说中药中的有效成分并不一定就是在体内直接发挥作用的成分，用含药血清进行药理实验更能反应其发挥药理作用的有效成分，通过本实验，我们认为其镇痛作用的有效成分主要是延胡索乙素。参考文献:1 芮菁，吴燕敏，唐元泰，等.经痛宁颗粒剂治疗痛经的药理研究J.中药药理与临床，2001，17(3):26 27.2 嵇波，张露芬，朱江，等.痛经模型建立和评价方法的思考J.中国药理学通报，2008，24(6):712.3 H.Gerhard Vogel，WolfgangH.Vogel.著，杜冠华，李学军，张永祥，译.药理学实验指南新药发现和药理学评价M.北京:科学出版社，2001:913.4 孙海燕，曹永孝，刘静，等.小鼠痛经模型的建立J.中国药理学报通报，2002，18(2):233 235.修回日期 2010-05-2573中国比较医学杂志 2010 年 8 月第 20 卷第 8 期Chin J Comp Med，August 2010，Vol.20.No.8