DB5132T88-2023牦牛肉PCR-膜芯片技术检验方法DIS.docx
《DB5132T88-2023牦牛肉PCR-膜芯片技术检验方法DIS.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《DB5132T88-2023牦牛肉PCR-膜芯片技术检验方法DIS.docx(12页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、ICS 07.080A 04DB5132四川省( 阿坝藏族羌族自治州) 地方标准DB 5132/ T 882023牦牛肉PCR膜芯片技术检验方法Identification of Yak Meat with PCR-membrane Chip Technology2023 - 10 - 26 发布2023 - 12 - 25 实施阿 坝 藏 族 羌 族 自 治 州 市 场 监 督 管 理 局发 布DB5132/ T 882023目次前言II引言III1 范围12 规范性引用文件13 术语和定义、缩略语13.1 术语和定义13.2 缩略语14 原理25 设备与材料26 主要试剂27 实验用水28
2、 检验步骤28.1 PCR 引物及探针28.2 样品处理与 DNA 提取38.3 多重 PCR 反应体系48.4 膜芯片制备48.5 杂交显色48.6 结果判读59 结果表述510 生物安全及检测过程中防止交叉污染的措施5参考文献7III前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由阿坝藏族羌族自治州农业农村局提出并归口。本文件起草单位:四川省龙日种畜场、西南民族大学、成都产品质量检验研究院有限责任公司、成 都鸿宜瑞信息技术咨询有限公司。本文件主要起草
3、人:何明珠、江明锋、史贇学、赵睿骁、蒲华荣。引言本文件的发布机构提请注意,声明符合本文件时,可能涉及到专利号为ZL201910400450.2一种牦 牛肉鉴定试剂盒相关的专利的使用。本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。该专利持有人已向本文件的发布机构承诺。他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下, 就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下联系方式获得:专利持有人姓名:江明锋(西南民族大学),文勇立(西南民族大学),王誉(西南民族大学)。请注意:除上述专利外,本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专
4、利的 责任。DB5132/ T 882023牦牛肉PCR-膜芯片技术检验方法1 范围本文件规定了牦牛肉动物源性成分的PCR-膜芯片技术检测方法。本文件适用于水牛、黄牛、猪、羊、鸡、兔、鸭、狗、牦牛肉及其制品的动物源性成分检测,检出 限为1%。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测GB/T 34796 水溶液中核酸的浓度和纯度检测3 术语和定义、缩略语3
5、.1 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1 聚合酶链式反应polymerase chain reaction;PCR在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤, 体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。3.1.2 多重聚合酶链式反应multiplex PCR在同一PCR反应体系中加入两对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应。3.1.3 膜芯片技术membrane Chip Technology将预先制备的DNA探针有序的固定于尼龙膜表面,然后与标记的样品杂交,通过对杂交信号的检测 分析,得出样品的遗传信息(基因序列及表
6、达的信息)。3.2 缩略语PCR:polymerase chain reaction;聚合酶链式反应DNA:Deoxyribo Nucleic Acid;脱氧核糖核苷酸SSC:Saline Sodium Citrate buffer;杂交印记缓冲液PCR Master Buffer:PCR缓冲液dNTP:deoxy-ribonucleoside triphosphate;脱氧核糖核苷三磷酸 Taq Polymerase:Thermus aquaticus聚合酶8SSPE:核酸杂交缓冲液Mix:PCR的预混物,含有Taq酶、dNTP混合物、MgCl2及优化的缓冲体系ddH2O:双重蒸馏水4 原理
7、针对牦牛肉及市场常见假冒牦牛肉动物源性成分特异基因片段设计引物,对DNA模板进行多重聚合 酶链式反应扩增,扩增产物与固定有目标基因特异性探针的膜芯片进行杂交,经化学显色后可在杂交点 上形成肉眼可见的杂交信号。5 设备与材料除实验室灭菌及常规设备外,其他设备和材料如下:5.1pH 计(0.01 级)5.2 天平(感量 0.1g)5.3 PCR 仪5.4 生物安全柜5.5 膜芯片杂交仪(MFS-8)5.6 尼龙转印膜(厚度 6mm 孔径 0.45m 负电荷)6 主要试剂6.1 动物组织基因组 DNA 提取试剂盒。6.2 15 SSC 缓冲液。6.3 去活化液(100 mmol/L,NaOH)。6.
8、4 去活化清洗液(2SSPE,0.1% SDS)。6.5 杂交清洗液(2SSPE, 0.5% SDS)。6.6 孵育液(碱性磷酸酶标记的链霉亲和素按 12 000 的比例加入孵育液中)。6.7 孵育清洗液 1(2SSPE,0.5% SDS)。6.8 孵育清洗液 2(0.3 mol/L NaCl、20 mmol/L NaH2PO4、20 mmol/EDTANa2,其 pH 为 7.4)。6.9 显色液(BCIP/NBT、5- 溴-4-氯 -3- 吲哚磷酸和氯化硝基四氮唑兰)。6.10 PCR 引物及探针(引物浓度 20mol/L、探针浓度 5mol/L)。6.11 PCR Master Buff
9、er(100 mmol/L Tris-HCl,15 mmol/L MgCl2, pH = 8.0)。6.12 dNTPs(100mol/L)。6.13 Taq Polymerase(0.05U/L)。7 实验用水实验用水符合GB/ T 6682-2008分析实验室用水规格和试验方法 中一级水的要求。8 检验步骤8.1 PCR 引物及探针引物和探针序列见表 1。表 1PCR 引物信息物种目的基因引物 / 探针序列(5-3)内参actin 基因F :5-GAGCGCAAGTACTCTGTGTGGAT-3R :5-biotin-AGAAGCATTTGCGGTGGACG-3探针 :5-Aminolin
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- DB5132T88 2023 牦牛 PCR 芯片 技术 检验 方法 DIS
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【Fis****915】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【Fis****915】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。