实验室安全[1].pdf

实验室安全实验室安全 LABORATOTY SAFETY 首都医科大学基础医学实验教学中心首都医科大学基础医学实验教学中心 病原生物与免疫实验室病原生物与免疫实验室 陈海伦陈海伦 E.mail：,Tel：[phone] 主要内容主要内容 OUTLINE 生物安全生物安全 化学安全化学安全 实验废弃物处理实验废弃物处理 意外事故应急处理意外事故应急处理 火、电和其他安全火、电和其他安全 3 生物安全的定义生物安全的定义 1.狭义狭义 避免避免危险生物因子危险生物因子对人、环境和社会造成的危害或潜在对人、环境和社会造成的危害或潜在危害而采取的危害而采取的防护设施防护设施（硬件）和（硬件）和管理措施管理措施（软件），（软件），达到对人、环境和社会的安全防护的目的。达到对人、环境和社会的安全防护的目的。2.广义广义 针对由针对由现代生物技术现代生物技术的开发和应用可能产生的的开发和应用可能产生的负面影响负面影响所采取的有效预防和控制措施。所采取的有效预防和控制措施。中国环境报2000-9-6 是国家安全的组成部分。是国家安全的组成部分。是指生物的正常生存和发展以及人类的生命和健康不受是指生物的正常生存和发展以及人类的生命和健康不受人类的生物技术活动和其他开发利用活动侵害和损害的人类的生物技术活动和其他开发利用活动侵害和损害的状态。状态。政法大学环境资源法研究所所长王灿发 教授 4 实验室生物安全实验室生物安全 Laboratory Biosafety 1.概述概述 2.微生物危险度分级和生物安全防护微生物危险度分级和生物安全防护 3.生物安全管理生物安全管理 4.生物安全和基因工程生物安全和基因工程 5 针对生物危害提出实验室生物安针对生物危害提出实验室生物安全全 当前世界存在两类生物危害当前世界存在两类生物危害 1.各类传染病各类传染病：新发：新发/再现再现/高致病性高致病性/抗原变异抗原变异/多重耐药多重耐药/全球传播全球传播 2.生物恐怖生物恐怖/生物武器生物武器 实验室感染贯穿了整个微生实验室感染贯穿了整个微生物学的发展历史物学的发展历史！为什么要重视实验室生物安全？为什么要重视实验室生物安全？6 SARS的教训的教训 2004年年5月月9日，中国疾控中心的工日，中国疾控中心的工作人员关闭病毒所大门，准备终末作人员关闭病毒所大门，准备终末消毒消毒 photocome图图 7 实验室相关感染实验室相关感染 （laboratory-associated infection,LAI）8 世界各国世界各国LAI的原因的原因 19301930-19501950年年 19501950-19631963年年 感染原因感染原因 例数例数%例数例数%工作接触工作接触 274274 20.420.4 180180 28.128.1 气溶胶气溶胶 173173 12.912.9 161161 25.125.1 意外事故意外事故 215215 16.016.0 158158 24.624.6 饲养动物饲养动物 139139 10.410.4 8383 13.013.0 临床样本临床样本 175175 13.013.0 1717 2.72.7 处理废弃玻璃器皿处理废弃玻璃器皿 2020 1.51.5 1515 2.32.3 尸体解剖尸体解剖 9898 7.37.3 1212 1.91.9 未确定未确定 248248 18.518.5 1515 2.32.3 合计合计 13421342 100100 641641 100100 引自顾华引自顾华（浙江（浙江CDC）9 实验室常见危险实验室常见危险和和LAI的直接原因的直接原因 溢出和泼洒溢出和泼洒 吸入危险吸入危险 食入危险食入危险 眼眼结膜接触结膜接触 锐器损伤锐器损伤 针头、注射器针头、注射器 碎玻璃碎玻璃 动物或动物寄生虫抓、咬伤动物或动物寄生虫抓、咬伤 处理血液及有潜在病理学危害的处理血液及有潜在病理学危害的材料材料 烧伤、冻伤、腐蚀伤烧伤、冻伤、腐蚀伤 不明原因不明原因 82！气溶胶！气溶胶！操作失误操作失误事故事故感染感染 10 生物气溶胶（生物气溶胶（bioaerosol）气溶胶气溶胶 悬浮于气体中、直径悬浮于气体中、直径0.001100m，固态或液态微粒。，固态或液态微粒。含微生物的气溶胶则称为生物气溶含微生物的气溶胶则称为生物气溶胶。胶。100 m快速沉降快速沉降 100 m 5 m飞沫被呼吸道粘膜捕获飞沫被呼吸道粘膜捕获 5 m 吸入后直接达到肺泡吸入后直接达到肺泡 11 气溶胶产生的实验途径气溶胶产生的实验途径 轻度（轻度（10个个）玻片凝集实验玻片凝集实验 倾倒菌液倾倒菌液 火焰烧灼接种环火焰烧灼接种环 接种鸡胚和抽取培养液接种鸡胚和抽取培养液 中度（中度（11100个）个）动物实验动物实验 细菌接种细菌接种 菌液混悬或滴洒菌液混悬或滴洒 摔碎含菌培养皿摔碎含菌培养皿 重度（重度（100个）个）离心管破裂离心管破裂 打碎（开）干燥菌种安瓿打碎（开）干燥菌种安瓿 注射器针头脱落使菌液喷出注射器针头脱落使菌液喷出 混合震荡混合震荡 超声粉碎超声粉碎 12 生物气溶胶的特点生物气溶胶的特点 无色无味无色无味、无孔不入无孔不入，不知不觉被感染不知不觉被感染。与自然感染相比与自然感染相比，症状不典型症状不典型，病程复杂病程复杂，难以及时诊治难以及时诊治，影响预后影响预后。现有常规疫苗现有常规疫苗（非呼吸道免疫途径非呼吸道免疫途径）的预防效果不理想的预防效果不理想，如如肺炭疽肺炭疽。容易在人与人容易在人与人、人与动物人与动物、动物与动物之间传播动物与动物之间传播。可以远距离或较远距离传播可以远距离或较远距离传播。气溶胶导致实验室感染的威力超乎想象气溶胶导致实验室感染的威力超乎想象!13 实验室生物安全的目的实验室生物安全的目的 使实验室在处理或保存感染性材料时，保证使实验室在处理或保存感染性材料时，保证安全。安全。安全安全 人人 环境环境 实验对象实验对象 14 实验室生物安全与防护的重要性实验室生物安全与防护的重要性 建立病原微生物研究的安全平台建立病原微生物研究的安全平台 医院感染控制医院感染控制 传染病预防与控制传染病预防与控制 动物防疫动物防疫 出入境检验检疫出入境检验检疫 生物防护（国防）生物防护（国防）-美国美国RODS GOARN（global outbreak alert and response network 全球疾病、战争爆发预警和应急网络）全球疾病、战争爆发预警和应急网络）15 实验室生物安全的有关法规实验室生物安全的有关法规 国际国际 WHO：Laboratory Biosafety Manual，实验实验室生物安全手册室生物安全手册 1983一版一版 1993二版二版 2004三版三版 美国美国CDC/NIH：微生物和生物医学实验室生微生物和生物医学实验室生物安全手册物安全手册（BMBL）1993一版，首次提出生物危险度和实验室安全分级一版，首次提出生物危险度和实验室安全分级 1999 四版，实验室生物安全管理金标准四版，实验室生物安全管理金标准 16 实验室生物安全的有关法规实验室生物安全的有关法规 国内国内 2002，卫生部，卫生部微生物和生物医学实验室生物安全通用准则微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS233-2002）2004年年5月，月，实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求（GB19489-2004）2004年年8月，月，生物安全实验室建筑技术规范生物安全实验室建筑技术规范（GB 503462004）2004年年12月，国务院令月，国务院令病原微生物实验室生物安全管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例 2005年年12月月,卫生部卫生部可感染人类的高致病性病原微生物菌可感染人类的高致病性病原微生物菌/毒种或样毒种或样本运输管理规定本运输管理规定 2006年年1月月,卫生部卫生部人间传染的病原微生物名录人间传染的病原微生物名录 2006年年3月月,国家环境保护总局国家环境保护总局病原微生物实验室生物安全环境管病原微生物实验室生物安全环境管理办法理办法 2006年年8月卫生部月卫生部人间传染的高致病性病原微生物实验室生物安全人间传染的高致病性病原微生物实验室生物安全管理审批办法管理审批办法 17 微生物的危险度分级微生物的危险度分级 危险等级危险等级 中国中国 WHO 分级要素分级要素 主要的传染因子主要的传染因子 4 1 没有或极低的个体和群体危险。没有或极低的个体和群体危险。已知不太可能引起健康成年已知不太可能引起健康成年人或动物人或动物患病。患病。正常微生物群正常微生物群/条条件致病菌件致病菌 3 2 中度个体危险，低度群体危险。中度个体危险，低度群体危险。能引起人或动物疾病。能引起人或动物疾病。实验室暴露可能引起严重感染，但具有有效地预防和治实验室暴露可能引起严重感染，但具有有效地预防和治疗措施，传播危险有限。疗措施，传播危险有限。含病原微生物含病原微生物的的临床标本临床标本 2 3 高度个体危险，低度群体危险。高度个体危险，低度群体危险。引起人或动物的严重疾病或致死，潜在的气溶胶传播；引起人或动物的严重疾病或致死，潜在的气溶胶传播；一般不会由个体之间传播，具有有效地预防和治疗措施。一般不会由个体之间传播，具有有效地预防和治疗措施。大量培养和研究大量培养和研究的病原微生物、的病原微生物、朊粒等朊粒等 1 4 高度个体、群体危险。高度个体、群体危险。引起人或动物非常严重的疾病和危及生命的实验室感染；引起人或动物非常严重的疾病和危及生命的实验室感染；尚未发现或已宣布消灭的病原；极易发生个体之间传播尚未发现或已宣布消灭的病原；极易发生个体之间传播（气溶胶或传播途径不明），没有有效地预防和治疗措（气溶胶或传播途径不明），没有有效地预防和治疗措施。施。主要是病毒，如主要是病毒，如出血热病毒、脑出血热病毒、脑炎病毒、天花病炎病毒、天花病毒等毒等 18 名录涉及的病原微生物包括：名录涉及的病原微生物包括：1.法定报告传染病所涉及的病原微生物（法定报告传染病所涉及的病原微生物（38种疾病）种疾病）2.法定报告传染病以外常见传染病的病原微生物法定报告传染病以外常见传染病的病原微生物 3.国外新发现和已消灭传染病的病原微生物国外新发现和已消灭传染病的病原微生物 3个表格个表格 表表1：病毒病毒（附朊粒附朊粒）表表2：细菌（广义）细菌（广义）表表3：真菌真菌 Cellular PrPScrapie PrPCellular PrPScrapie PrP人间传染的病原微生物名录人间传染的病原微生物名录 卫生部卫生部2006年年1月月11日公布日公布 19 表表1 病毒分类名录病毒分类名录 共共160种病毒种病毒 高致病性（高致病性（1/2类）类）80种：出血热种：出血热/天花天花/脑炎脑炎/SARS/HIV/禽流感禽流感/狂犬病毒等狂犬病毒等BSL34 3/4类：类：腺病毒腺病毒/伴随病毒伴随病毒/肝炎病毒肝炎病毒/肠道病毒肠道病毒/人类疱疹病毒人类疱疹病毒/流感病毒流感病毒/B19病毒等病毒等BSL2 20 朊粒（朊粒（Prion）21 表表2 细菌、放线菌、衣原体、立克次体、螺旋体分类名录细菌、放线菌、衣原体、立克次体、螺旋体分类名录 共共155种种 高致病性（高致病性（2类）类）10种：种：炭疽杆菌、布鲁菌、土拉热弗朗西丝菌、结核杆菌、鼠疫杆菌、霍乱弧菌流行株等炭疽杆菌、布鲁菌、土拉热弗朗西丝菌、结核杆菌、鼠疫杆菌、霍乱弧菌流行株等BSL-3 3 类：类：致病性大肠杆菌、志贺菌、沙门菌、空肠弯曲菌、幽门螺杆菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、致病性大肠杆菌、志贺菌、沙门菌、空肠弯曲菌、幽门螺杆菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、肺炎支原体等肺炎支原体等BSL-2。22 表表3 真菌分类名录真菌分类名录 共共59种。种。高致病性（高致病性（2类）：类）：4种。种。3类：类：白假丝酵母菌、毛霉菌、癣菌、皮炎芽生菌、新生隐球菌、卡氏肺孢菌等白假丝酵母菌、毛霉菌、癣菌、皮炎芽生菌、新生隐球菌、卡氏肺孢菌等BSL-2 23 生物安全防护生物安全防护（bio-safety containment）避免发生实验室相关感染及避免发生实验室相关感染及生物因子对环境的污染而采生物因子对环境的污染而采取的取的防范意识防范意识和和措施措施。1.一级屏障（一级屏障（primary barriers）生物安全柜（生物安全柜（BSC）个人防护装备（个人防护装备（PPE）2.二级屏障（二级屏障（secondary barriers）实验室建筑设计和设施。实验室建筑设计和设施。24 生物安全柜生物安全柜（Biological safety cabinets，BSCs）直接操作具有传染性生物病原时所使用的箱形安全设备。直接操作具有传染性生物病原时所使用的箱形安全设备。根据结构、气流流速和方式、排风系统的不同分为：根据结构、气流流速和方式、排风系统的不同分为：I级级 可保护操作者和环境，不能保护操作对象。可保护操作者和环境，不能保护操作对象。II级级（A1、A2、B1、B2和和B3）在在I级级BSC的基础上，增加了保护实验对象。的基础上，增加了保护实验对象。III级级 将所有的危险性实验材料都封闭在完全密闭的通风将所有的危险性实验材料都封闭在完全密闭的通风柜内，对实验室工作人员、实验对象和环境提供最柜内，对实验室工作人员、实验对象和环境提供最大限度地保护。大限度地保护。25 II级级BSC III级级BSC 定向负压式气流定向负压式气流HEPA滤器滤器 高效空气过滤器高效空气过滤器：是指在额定风量、有效滤过面积和气流阻力在：是指在额定风量、有效滤过面积和气流阻力在245Pa以下时，以下时，可将空气中可将空气中99.97、直径、直径0.3 m的粒子有效捕获的空气过滤器。的粒子有效捕获的空气过滤器。26 II-A型型BSC 的气流流向的气流流向 4 约35%气体从上方HEPA 滤器排出，滤掉污染物。65%气体流入下方HEPA 滤器，产生再循环洁净气流避免柜内产品污染。1 流入：气流流入操作台面下的前方的隔栅内，而不进入工作区域避免了污染。2 气流路径：入流顺操作台后向上，和后隔栅进入的向下流动气流相遇，混合流入回风腔，然后在进入风机入口前形成负压包围正压。3 风机顶部产生正压如有泄漏，将被负压环绕避免泄漏.27 生物安全柜的使用生物安全柜的使用 1.定期检测，运行正常时才能定期检测，运行正常时才能使用使用 2.在使用中不能打开玻璃观察在使用中不能打开玻璃观察挡板挡板 3.时刻注意气流稳定时刻注意气流稳定 4.消毒消毒 5.在浸有消毒剂的湿毛巾上进在浸有消毒剂的湿毛巾上进行操作，以吸收可能溅出的行操作，以吸收可能溅出的液滴。液滴。6.在在BSC内操作时不能进行文内操作时不能进行文字工作。字工作。你看出这张照片操作中的你看出这张照片操作中的存在问题了吗？存在问题了吗？28 个人防护装备个人防护装备（PPE，Personal Protective Equipment）实验服、隔离衣、连体衣、实验服、隔离衣、连体衣、正压防护服正压防护服 手套、鞋袜手套、鞋袜 塑料围裙塑料围裙 护目镜、安全眼镜护目镜、安全眼镜 面罩、防毒面具面罩、防毒面具 早稻田大学防护眼镜早稻田大学防护眼镜 29 紧紧急急洗洗眼眼器器 紧紧急急喷喷淋淋器器 30 生物安全防护水平生物安全防护水平（bio-safety level,BSL）根据操作不同危险度等级微生物所需、按照根据操作不同危险度等级微生物所需、按照一级屏障一级屏障和和二级屏障二级屏障的不同组合，构建成具有不同防护级别的实验的不同组合，构建成具有不同防护级别的实验室（室（BSL 14）规范的实验室设计规范的实验室设计+安全设备配置安全设备配置+PPE+严格遵守严格遵守SOP。P1P4 (Physical protection)，BSL-1BSL-4(Biosafety level)BSL-1/2：基础实验室基础实验室 BSL-3：生物安全防护实验室生物安全防护实验室 BSL-4:高度生物防护实验室高度生物防护实验室 31 BSL-1 一般无须使用生物安全柜等专用安全设备一般无须使用生物安全柜等专用安全设备 工作人员在实验室应穿工作服，带防护眼镜工作人员在实验室应穿工作服，带防护眼镜 工作人员手上有皮肤破损或皮疹时应戴手套工作人员手上有皮肤破损或皮疹时应戴手套 32 BSL-2 操作对人或环境具有中等潜在危害的微生物。操作对人或环境具有中等潜在危害的微生物。麻疹病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒、乙型肝炎病毒、HIV 血清学检测、志贺菌、沙门菌、衣原体等。血清学检测、志贺菌、沙门菌、衣原体等。国际辐国际辐射标志射标志 33 缓冲区缓冲区 压差压差 BSL-3 四大防护措施：四大防护措施：负压密闭、空气过滤、人员消毒、生物安全柜负压密闭、空气过滤、人员消毒、生物安全柜 34 生物安全防护水平（生物安全防护水平（BSL14）危害危害 等级等级 防护防护 级别级别 实验室实验室 用途用途 操作规则操作规则 一级屏障一级屏障(BSCPPE)二级屏障二级屏障（安全设施）（安全设施）1级级 BSL-1 基础教学基础教学/研究研究 GMT 工作服工作服 洗手池，开放实验台洗手池，开放实验台 2级级 BSL-2 初级卫生初级卫生服务诊断服务诊断/研究研究 BSL-1加：限制进入加：限制进入 生物危害警示标志生物危害警示标志 废弃物净化处理废弃物净化处理 生物安全手册生物安全手册 I型或型或II型型BSC、实验服、手套、帽实验服、手套、帽子、口罩子、口罩 BSL-1加：加：高压灭菌设备高压灭菌设备 3级级 BSL-3 特殊诊断特殊诊断/研究研究 BSL-2加：加：所有废弃物和实验服的所有废弃物和实验服的净化处理净化处理 I型或型或II型型BSC 双层防护服和手套、双层防护服和手套、专业防护口罩、呼专业防护口罩、呼吸防护装置吸防护装置 BSL-2加：加：走廊和实验室隔离走廊和实验室隔离 自动关闭双门自动关闭双门 气流定向、无再循环气流定向、无再循环 4级级 BSL-4 危险病原危险病原体体 研究研究 BSL-3加：加：进入前更换防护服进入前更换防护服 离开前淋浴离开前淋浴 任何物品无害化处理任何物品无害化处理 型型BSC或或II型型BSC 外加全身正压防护外加全身正压防护服服 BSL-3加：加：独立建筑或单独隔离独立建筑或单独隔离区、双门直通式高压区、双门直通式高压灭菌器（穿过墙壁）灭菌器（穿过墙壁）GMT：微生物学操作技术规范；：微生物学操作技术规范；BSC：生物安全柜。：生物安全柜。35 生物安全管理生物安全管理 1.硬件（防护设施）硬件（防护设施）1级屏障安全设备、个人防护装置；级屏障安全设备、个人防护装置；2级屏障级屏障实验室设施实验室设施 2.软件（软件（管理措施）管理措施）法律法规、技术标准的制定和执行法律法规、技术标准的制定和执行 生物安全实验室建设生物安全实验室建设 实验室生物安全管理保障体系建设实验室生物安全管理保障体系建设 实验室生物安全管理文件的制定实验室生物安全管理文件的制定 物质安全数据单物质安全数据单（Material Safety Data Sheets，MSDS）人员意识、素质提高及培训人员意识、素质提高及培训 监督检查及执法监督检查及执法 责任制及责任追究责任制及责任追究 36 实验室生物安全保障管理体系建设实验室生物安全保障管理体系建设 强化生物安全意识，强调责任心强化生物安全意识，强调责任心 建立规范化、法制化和日常化的管理体系和制度建立规范化、法制化和日常化的管理体系和制度 组织保障组织保障 生物安全委员会生物安全委员会 生物安全管理责任制管理责任、个人责任生物安全管理责任制管理责任、个人责任 制度保障制度保障 生物安全相关政策、法规生物安全相关政策、法规 生物安全手册生物安全手册 生物安全制度生物安全制度 标准操作程序标准操作程序(Standard Operation Procedure,SOP）监督、检查监督、检查 37 生物安全制度生物安全制度 1.1.人员培训制度人员培训制度 2.2.实验室准入制度实验室准入制度 3.3.安全计划审核制度安全计划审核制度 4.4.安全检查制度安全检查制度 5.5.事件、伤害、事故和职业性疾病报告制事件、伤害、事故和职业性疾病报告制度度 6.6.危险标识制度危险标识制度 7.7.记录制度记录制度 38 SOPSOP SOPStandard Operation Procedure 1.感染性材料的安全操作感染性材料的安全操作 2.个人防护用品使用规范个人防护用品使用规范 3.锐器的安全操作锐器的安全操作 4.BSC和其他仪器设备的安全使用和其他仪器设备的安全使用 5.意外事故应对方案和应急预案意外事故应对方案和应急预案 6.消毒、灭菌消毒、灭菌 7.废弃物处理废弃物处理 8.感染性物质的储存、运输及管理感染性物质的储存、运输及管理 39 BSL-1、2实验室安全管理规定实验室安全管理规定 生物安全水平：生物安全水平：_ 责任人：责任人：_ 紧急联系电话：紧急联系电话：_ 必须得到上述责任人必须得到上述责任人 的授权方可进入的授权方可进入 授权人员方可进入授权人员方可进入 进入规定进入规定 1.限制进入限制进入 未经批准人员未经批准人员 儿童儿童 与实验室无关动物与实验室无关动物 2.生物危害警告标志生物危害警告标志 BSL-2以上级别实验室以上级别实验室 3.实验室的门应保持关闭实验室的门应保持关闭 4.进入动物房应经过特别批准进入动物房应经过特别批准 40 人员防护规定人员防护规定 1.在实验室工作时必须穿在实验室工作时必须穿工作服或防护服。工作服或防护服。2.可能直接或意外接触血液、体液及其他潜在感染性材料或感染性动物时，应戴可能直接或意外接触血液、体液及其他潜在感染性材料或感染性动物时，应戴上合适的上合适的手套手套。手套用后应。手套用后应先消毒再摘除先消毒再摘除，随后必须，随后必须洗手。洗手。3.处理完感染性实验材料和动物及离开实验室工作区域前，必须处理完感染性实验材料和动物及离开实验室工作区域前，必须洗手。洗手。4.严禁穿着实验室防护服、戴着手套离开实验室（包括去卫生间）。严禁穿着实验室防护服、戴着手套离开实验室（包括去卫生间）。5.一次性手套不得清洗和再次使用。一次性手套不得清洗和再次使用。6.为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害，必须戴为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害，必须戴安安全眼镜、面罩（全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。面具）或其他防护设备。7.不得不得在实验室内穿在实验室内穿露脚趾露脚趾的鞋子。的鞋子。8.禁止禁止在实验室工作区域在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆、处理隐形眼镜、触摸皮肤。进食、饮水、吸烟、化妆、处理隐形眼镜、触摸皮肤。9.禁止禁止在实验室工作区域在实验室工作区域储存食品和饮料。储存食品和饮料。10.在实验室内用过的在实验室内用过的防护服防护服不得和日常服装放在同一柜子内。不得和日常服装放在同一柜子内。41 基本操作规范基本操作规范 1.严禁口吸移液管严禁口吸移液管。严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。2.所有操作要按尽量所有操作要按尽量减少气溶胶减少气溶胶和微小液滴形成的方式进行。和微小液滴形成的方式进行。3.应应限制使用皮下注射针头和注射器限制使用皮下注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液 皮下注射针头和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途皮下注射针头和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途 4.必须制订并执行必须制订并执行溢出物处理溢出物处理的标准操作程序。的标准操作程序。出现溢出、事故及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室主管报告出现溢出、事故及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室主管报告 实验室应如实记录并保存暴露和处理记录实验室应如实记录并保存暴露和处理记录 5.污染液体在排放到生活污水管道前污染液体在排放到生活污水管道前必须清除污染必须清除污染。根据所处理微生物因子的危险度评估结果准备污水处理系统。根据所处理微生物因子的危险度评估结果准备污水处理系统。6.文件纸张必须保证在实验室内没有受到污染才可带出实验室。文件纸张必须保证在实验室内没有受到污染才可带出实验室。42 减少气溶胶的操作减少气溶胶的操作 1.最好使用一次性接种环。最好使用一次性接种环。d 2-3mm，闭环，柄长度小于，闭环，柄长度小于6cm 以减小抖动。以减小抖动。微型电加热器灭菌，或在酒精灯内焰中燃烧。微型电加热器灭菌，或在酒精灯内焰中燃烧。2.2.直接涂抹的直接涂抹的痰液标本在干燥前痰液标本在干燥前严禁对载玻片加严禁对载玻片加热。热。3.3.禁止禁止向空气中直接排放注射器的气泡向空气中直接排放注射器的气泡 要将多余的液体或气泡推入用抗感染材料浸湿的脱要将多余的液体或气泡推入用抗感染材料浸湿的脱脂棉或有脱脂棉的小瓶中。脂棉或有脱脂棉的小瓶中。43 移液操作移液操作 1.应使用移液辅助器，应使用移液辅助器，严禁用口吸取严禁用口吸取。2.所有移液管应带有所有移液管应带有棉塞棉塞。3.不能不能向含有感染性物质的溶液中向含有感染性物质的溶液中吹入气体吹入气体。4.感染性物质感染性物质不能不能使用移液管反复使用移液管反复吹吸混合吹吸混合。5.不能不能将液体从移液管内将液体从移液管内用力吹出用力吹出。6.污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液消毒液的防碎的防碎容器中。移液管应当在消毒剂中浸泡适当时间后再进容器中。移液管应当在消毒剂中浸泡适当时间后再进行处理。行处理。7.盛放废弃移液管的容器应当放在生物安全柜内。盛放废弃移液管的容器应当放在生物安全柜内。8.有固定皮下注射针头的有固定皮下注射针头的注射器不能用于移液注射器不能用于移液。9.工作台面应当放置一块浸有工作台面应当放置一块浸有消毒液消毒液的布或吸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其按感染性废弃物处理。的纸，使用后将其按感染性废弃物处理。44 防锐器刺、割伤防锐器刺、割伤操作操作 1.1.使用使用塑料器材塑料器材代替玻璃器材。代替玻璃器材。2.2.禁止禁止用手处理破碎的玻璃器具。用手处理破碎的玻璃器具。3.3.用过的针头用过的针头禁止禁止折弯、剪断、折断、重新盖折弯、剪断、折断、重新盖帽，禁止用手直接从注射器取下。帽，禁止用手直接从注射器取下。4.4.用过的针头必须用过的针头必须直接直接放入防穿透的容器中。放入防穿透的容器中。5.5.非一次性利器必须放入非一次性利器必须放入厚壁容器厚壁容器中并运送到中并运送到特定区域消毒，最好进行高压灭菌。特定区域消毒，最好进行高压灭菌。6.6.从胶塞瓶中拔出针头前，要用适当的抗感染从胶塞瓶中拔出针头前，要用适当的抗感染材料浸湿的脱脂棉材料浸湿的脱脂棉包裹包裹针头和塞子。针头和塞子。7.7.动物接种需动物接种需固定固定。滴鼻、口腔接种时，使用。滴鼻、口腔接种时，使用钝的针头钝的针头或套管，在或套管，在BSCBSC中操作。中操作。45 感染性标本的安全操作感染性标本的安全操作 1.标本容器标本容器 最好使用最好使用塑料制品塑料制品，盖好无泄漏。，盖好无泄漏。正确粘贴正确粘贴标签标签。标本的要求或说明书不能卷在容器外面，要分开标本的要求或说明书不能卷在容器外面，要分开放置，最好放在防水袋里。放置，最好放在防水袋里。2.标本在设施内的传递标本在设施内的传递 应使用应使用二级容器二级容器 金属或塑料制品金属或塑料制品 耐高压灭菌或耐化学消毒剂，耐高压灭菌或耐化学消毒剂，定期清除污染。定期清除污染。盛标本容器应盛标本容器应固定固定、直立直立。3.标本的接收、外包装打开标本的接收、外包装打开 应在安全柜中进行，备好消毒液。应在安全柜中进行，备好消毒液。46 血清的分离操作血清的分离操作 1.只有经过严格只有经过严格培训培训的人员才能进行这项工作。的人员才能进行这项工作。2.血液和血清应当小心吸取，而血液和血清应当小心吸取，而不能倾倒不能倾倒。严禁。严禁口吸。口吸。3.操作时应戴操作时应戴手套手套以及眼睛和黏膜的保护装置。以及眼睛和黏膜的保护装置。4.移液管使用后应移液管使用后应完全浸入完全浸入适当的适当的消毒液消毒液中并浸中并浸泡适当的时间，然后再丢弃或灭菌清洗后重复泡适当的时间，然后再丢弃或灭菌清洗后重复使用。使用。5.带有血凝块等的废弃标本管，在加盖后应当放带有血凝块等的废弃标本管，在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌和或焚烧。在适当的防漏容器内高压灭菌和或焚烧。6.应备有适当的应备有适当的消毒剂消毒剂来清洗喷溅和溢出标本。来清洗喷溅和溢出标本。47 洗板机洗板机 酶标仪酶标仪 移液器移液器 最易导致实验室感染发生的设备最易导致实验室感染发生的设备 组织搅拌器组织搅拌器 离心机离心机 摇床摇床 48 最易导致实验室感染发生的设备最易导致实验室感染发生的设备 离心管破裂！离心管破裂！49 预防措施预防措施 推荐使用有螺旋口盖子的试管。推荐使用有螺旋口盖子的试管。使用塑料试管。使用塑料试管。定期检查离心机和试管定期检查离心机和试管。使用可封闭的离心桶使用可封闭的离心桶。引自顾华引自顾华（浙江（浙江CDC）50 冰箱与冰柜的使用冰箱与冰柜的使用 1.定期除霜和清洁定期除霜和清洁 清理出所有在储存过程中破碎的安瓿和试管等物品。清理出所有在储存过程中破碎的安瓿和试管等物品。清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护。清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护。清理后要对内表面进行消毒。清理后要对内表面进行消毒。2.标注清楚标注清楚 储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名称、储存日期和储存者的姓名。称、储存日期和储存者的姓名。未标明的或废旧物品应当高压灭菌后丢弃。未标明的或废旧物品应当高压灭菌后丢弃。3.应当保存一份冻存物品的清单。应当保存一份冻存物品的清单。4.非防爆冰箱内禁放易燃溶液非防爆冰箱内禁放易燃溶液 冰箱门上应注明用途。冰箱门上应注明用途。51 消毒灭菌消毒灭菌 洗手洗手 普通肥皂、流水冲洗。脚控、肘控水龙头。普通肥皂、流水冲洗。脚控、肘控水龙头。工作台面工作台面 每天至少每天至少消毒消毒一次，活性物质溅出后要随时消毒。一次，活性物质溅出后要随时消毒。所有培养物、所有培养物、组织、体液及其它具有潜在危险性的组织、体液及其它具有潜在危险性的废废弃物弃物 在运出实验室前必须在运出实验室前必须灭活灭活（最好高压）。（最好高压）。工作服工作服 应先在实验室中消毒，然后统一洗涤。应先在实验室中消毒，然后统一洗涤。实验设备实验设备 在运出修理或维护前必须进行消毒。在运出修理或维护前必须进行消毒。文件、纸张等文件、纸张等 清理破碎物的簸箕、抹布、纸巾等清理破碎物的簸箕、抹布、纸巾等 引自顾华引自顾华（浙江（浙江CDC）52 菌毒种及样本的管理：菌毒种及样本的管理：专人负责、严格的制度、应急措施、报告制度。专人负责、严格的制度、应急措施、报告制度。菌（毒）种及样本的运输菌（毒）种及样本的运输 1.按规定申报，分类包装，三层密封按规定申报，分类包装，三层密封 2.生物危险标识、警告、提示用语生物危险标识、警告、提示用语 3.双人接收、清点，建立接受档案双人接收、清点，建立接受档案 菌（毒）种及样本保藏和销毁菌（毒）种及样本保藏和销毁 1.保藏机构需符合资质保藏机构需符合资质 2.编号、登记、记录清晰、编号、登记、记录清晰、3.保藏条件：双层包装、真空冷冻干燥、液氮螺口塑保藏条件：双层包装、真空冷冻干燥、液氮螺口塑料管料管 4.销毁：销毁：审批、复核、高压蒸汽灭菌审批、复核、高压蒸汽灭菌 53 实验室工作区的管理规定实验室工作区的管理规定 1.保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关物品。保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关物品。2.清除污染清除污染 每天工作结束后必须清除工作台面的污染。每天工作结束后必须清除工作台面的污染。发生具有潜在危害性材料溢出应立即清除污染。发生具有潜在危害性材料溢出应立即清除污染。所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须清除污染。利用之前，必须清除污染。3.如果开窗，应安装纱窗防止节肢动物进入。如果开窗，应安装纱窗防止节肢动物进入。54 生物安全管理内容生物安全管理内容 实验室主任、主管：实验室主任、主管：1.制定生物安全管理计划、安全手册或操作手册。制定生物安全管理计划、安全手册或操作手册。2.常规的实验室安全培训，建立培训、考核制度。常规的实验室安全培训，建立培训、考核制度。3.将特殊危害告知实验室人员，要求他们阅读生物安将特殊危害告知实验室人员，要求他们阅读生物安全或操作手册，并遵循标准的操作和规程，全或操作手册，并遵循标准的操作和规程，确保所确保所有实验室人员都了解这些要求，并监督其执行。有实验室人员都了解这些要求，并监督其执行。4.实验室感染的控制及应急处理。实验室感染的控制及应急处理。5.适宜的医学评估、监测、治疗和记录。适宜的医学评估、监测、治疗和记录。55 健康和医学监测健康和医学监测 1.BSL1实验室工作人员的监测实验室工作人员的监测 安全意识和规范的实验室操作技术的重要性。安全意识和规范的实验室操作技术的重要性。上岗前的体检，并记录其病史。上岗前的体检，并记录其病史。疾病和实验室意外事故应迅速报告。疾病和实验室意外事故应迅速报告。2.BSL2实验室工作人员的监测实验室工作人员的监测 必须有录用前或上岗前的体检。记录个人病史，并进必须有录用前或上岗前的体检。记录个人病史，并进行一次有目的的职业健康评估。行一次有目的的职业健康评估。实验室管理人员要保存工作人员的疾病和缺勤记录。实验室管理人员要保存工作人员的疾病和缺勤记录。禁止高度易感人群（如孕妇或免疫损伤人员）在高危禁止高度易感人群（如孕妇或免疫损伤人员）在高危险实验室中工作险实验室中工作 56 药箱内备有：药箱内备有：医用酒精医用酒精 创口贴创口贴 烫伤油膏烫伤油膏(或万花油或万花油)鱼肝油鱼肝油 1 1硼酸溶液或硼酸溶液或2 2醋酸溶液、醋酸溶液、1 1碳酸氢钠溶液碳酸氢钠溶液 2020硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠溶液 医用镊子和剪刀、纱布、药棉、棉签、绷带等。医用镊子和剪刀、纱布、药棉、棉签、绷带等。急救箱急救箱 57 实验室感染的控制实验室感染的控制 与与 事故记录与报告事故记录与报告 1.有专门部门或人员负责实有专门部门或人员负责实验室感染控制验室感染控制 2.有疾控系统指定的医疗救有疾控系统指定的医疗救治单位治单位 3.有免疫计划并进行相应的有免疫计划并进行相应的免疫接种和记录免疫接种和记录 保证实验室内的通讯畅通！保证实验室内的通讯畅通！电话、网络、传真电话、网络、传真 1.发现与实验病原微生物发现与实验病原微生物所致疾病相关症状如：所致疾病相关症状如：发热、咳嗽、腹泻等，发热、咳嗽、腹泻等，向生物安全负责人报告；向生物安全负责人报告；2.到定点医院就诊；到定点医院就诊；3.涉及高致病性病原微生涉及高致病性病原微生物的应做好隔离防护；物的应做好隔离防护；4.密切接触者应同样做好密切接触者应同样做好隔离防护。隔离防护。58 生物安全和基因工程生物安全和基因工程 基因工程基因工程 包括包括 利用载体系统的重组体利用载体系统的重组体DNA 技术技术 利用物理或化学方法把异源利用物理或化学方法把异源DNA直接导入有机体的直接导入有机体的技术。技术。不包括不包括 细胞融合技术，原生质体融合技术；细胞融合技术，原生质体融合技术；传统杂交繁殖技术；传统杂交繁殖技术；诱变技术，体外受精技术，细胞培养或者胚胎培养诱变技术，体外受精技术，细胞培养或者胚胎培养技术。技术。59 DNA 的发的发现和重组现和重组 重组重组DNA技术技术 不同来源的遗传信息组合不同来源的遗