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赤水市人民医院检验科
SOP 文件

输血科SOP文件
（第一版）

二0一0年十一月

目录

1、5% 红细胞悬液的制备………………………………………………1
2、A、B、O血型鉴定……………………………………………………2
3、Rh血型鉴定 ………………………………………………………… 3
4、盐水介质交叉配血………………………………………………… 5
5、凝聚胺交叉配血…………………………………………………… 7

赤 水 市 人 民 医 院 检 验 科

标题： 5% 红细胞悬液的制备
版本号：A
修订号：0
文件编号：XXX-MY-SOP-001
发布日期：2010年10月06日
生效日期：2010年11月01日
发布部门：
编制人： 王兴跃
审核人： 龚光卫
批准人：
页码： 共 1 页

5% 红细胞悬液的制备

一、 制备目的
5% 红细胞悬液一般用于血型鉴定及交叉配血。
二、 试剂与设备
生理盐水、1ml 吸管、试管、离心机
三、 操作步骤
1. 取全血1ml，加等渗盐水2-3ml，充分摇匀离心沉淀，弃去上清液，然后再加生理盐水2-3 ml，按上述方法洗涤，共3次。
2. 最后取压积RBC 5滴，加新鲜等渗生理盐水4 ml，即成5% 红 细胞悬液。（标准RBC 盐水悬液最多存放3天，用ACD溶液冷藏保存最长1周）

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赤 水 市 人 民 医 院 检 验 科

标题：A、B、O血型鉴定
版本号：A
修订号：0
文件编号：XXX-MY-SOP-002
发布日期：2010年10月06日
生效日期：2010年11月01日
发布部门：
编制人： 王兴跃
审核人： 龚光卫
批准人：
页码： 共 2 页

A、B、O血型鉴定
一、方法
试管法
二、原理
1． 正定型：用标准抗-A、抗-B分型血清测定红细胞上有无A抗原或B抗原来确定ABO血型。
2． 反定型：用已知有A抗原、B抗原及H抗原的红细胞测定血清中有无抗-A、抗-B来确定ABO血型。
三、试剂与材料
1.标准抗-A、抗-B血清。
2.标准A、B、O型红细胞：取健康献血员之A、B、O三种血型的红细胞各3份，用生理盐水洗涤3次，分型混合，用红细胞保养液配制成5%悬液，经标准抗血清鉴定特异性合格，分装4℃保存。
3.受检者5%红细胞悬液及其血清。
四、操作程序
1． 正定型：取试管2支，分别标明抗A、抗B，并分别加入标准的抗A、抗B血清各2滴，加受检者的5%红细胞悬液各2滴，离心1000rpm一分钟，先观察试管中上清液有否溶血，然后轻摇试管，肉眼及显微镜观察是否凝集，按下表报告结果。
2． 反定型：取试管3支，分别标明A、B、O，并分别加入5%标准A、B、O型红细胞悬液各2滴，加受检者的血清每管2滴，离心1000rpm一分钟，先观察试管中上清液有否溶血，然后轻摇试管，肉眼及显微镜观察是否凝集，按下表报告结果。
ABO血型正反定型结果判断 （“+”为凝集，“-”为不凝集）

分型血清+受检者红细胞
受检者血型
受检者血清+标准红细胞
抗-A血清 抗-B血清
A型红细胞 B型红细胞 O型红细胞
+ -
- +
- -
+ +
A
B
O
AB
- + -
+ - -
+ + -
- - -
五、质量保证措施
1.分型血清质量效能符合要求，用毕速放冰箱4℃保存，以免效价下降及细菌污染。
2.试剂红细胞以二个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤。
3.所用试管、滴管、破片要清洁干燥，防止溶血。
4.操作时应先加血清、再加红细胞恳液，以免使血清中抗体被稀释。
5.离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性出现。
6.如室温过低，应将试管放入37℃水浴箱中保温。
7.判断结果应仔细核对、记录、避免笔误。
六、临床意义
1.防止输ABO血型不合，引起输血反应。临床上多采用正向定型，只有结果可疑时再做反向定型。
2.避免ABO血型不合，引起器官移植中的超急性排斥。
3.用于母子血型不合，引起新生儿溶血病的诊断。
4.用于可疑血迹，毛发和亲缘鉴定，以及与某些疾病相关的调查等。
七、参考资料
1．«全国临床检验操作规程»第二版
2．试剂盒说明书

标题：Rh血型鉴定
版本号：A
修订号：0
文件编号：XXX-MY-SOP-003
发布日期：2010年10月06日
生效日期：2010年11月01日
发布部门：
编制人： 王兴跃
审核人： 龚光卫
批准人：
页码： 共 2 页

Rh血型鉴定
一、 方法：试管法
应用标准抗-D血清与被检红细胞发生凝集与否而定，发生凝集者即有D抗原，为Rh阳性，反之则为Rh阴性。
二、试剂与材料
1． 标准Rh抗血清：抗-D。
2． 受检者5%红细胞悬液。
三、操作程序
1． 取试管1支，作抗D标记，加入抗-D血清2滴，再加受检者5%红细胞悬液2滴，混匀后离心1000rpm一分钟，观察凝集结果。
2． 结果判断：凝集为Rh阳性，不凝集为Rh阴性。
四、质量保证措施
1． 如抗-D检测管不凝集，应进一步用抗人球蛋白试验证实，以排除Du的因素。
2． Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，同时由于Rh抗原、抗体凝集反应的凝块比较疏松，观察结果时应轻轻转动试管，不要用力摇动。
3． 为避免发生假阴性，受检者红细胞应新鲜。
4．阳性对照取3人O型红细胞混和配成。阴性对照一般应选择AB型血清一滴，测定时加5％阳性红细胞悬液一滴和试剂一滴混匀，。
5．抗D试剂质量效能正常,在有效期内使用。
五、临床意义
1.血型不合输血引起的溶血反应：“天然”产生的RH抗体极为少见，几乎所有的Rh抗体都是由于输入血型不合的血液或胎母Rh血型不合等同种免疫作用而产生的。因机体已产生Rh抗体．在输入Rh血型不合的血液时，将会发生溶血性输血反应，甚至导致死亡。
2.新生儿溶血病： 若胎儿与母亲Rh抗原不同，母亲受到胎儿血液中不配合的血型抗原刺激，可以产生相应的血型抗体。大约5％的Rh阴性产妇含有抗D抗体。如果发生在第一胎，一般对胎儿无明显影响。如再次妊娠Rh阴性胎儿时，可产生新生儿溶血病。
六、参考资料：1．«全国临床检验操作规程»第二版； 2．试剂盒说明书

标题：盐水介质交叉配血
版本号：A
修订号：0
文件编号：XXX-MY-SOP-004
发布日期：2010年10月06日
生效日期：2010年11月01日
发布部门：
编制人： 王兴跃
审核人： 龚光卫
批准人：
页码： 共 2 页

盐水介质交叉配血
一、方法
盐水介质交叉配血法
二、原理
用以检测受血者（献血者）血清（浆）中有无破坏献血者（受血者）红细胞的抗体。如存在相应的抗体，则交叉管中将发生凝集或溶血现象，此即为交叉不合，反之则为相合。
三、试剂与材料
1．受血者血清（浆）
2．受血者5%红细胞悬液
3．献血者血清（浆）
4．献血者5%红细胞悬液
四、操作程序 见下表：

主 管 次 管
受血者血清（浆） （滴） 2 /
受血者5%红细胞悬液 （滴） / 2
献血者血清（浆） （滴） / 2
献血者5%红细胞悬液 （滴） 2 /
混匀，离心1000~2000rpm 1~2分钟，肉眼及显微镜观察结果。
五、结果判断
1． 主、次、混合管均无凝集、无溶血现象，表示无配血禁忌，可 以输血。
2． 主、次、混合管均有凝集和/或溶血现象，表示有配血禁忌，绝不可输血。
六、临床意义
减少临床输血反应,减轻病人输血危险,提高输血质量
七、质量保证措施
1．先核病人姓名，标本是否合格，试管上联号与化验单上联号是否相同，是否有抽血者姓名，以防血标本混调。
2．病人血液及献血员红细胞配成5%左右红细胞悬液，不要太浓太稀。
3．必须做正反血型鉴定保证ABO血型。
4．结果观察时，除肉眼观察外，尚需显微镜观察。
5．要注意真、假凝集的鉴别。
八、参考资料
1．«全国临床检验操作规程»第二版

标题：凝聚胺交叉配血
版本号：A
修订号：0
文件编号：XXX-MY-SOP-005
发布日期：2010年10月06日
生效日期：2010年11月01日
发布部门：
编制人： 王兴跃
审核人： 龚光卫
批准人：
页码： 共 2 页

凝聚胺交叉配血
一、方法
凝聚胺介质交叉配血
二、 原理
凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM）降低介质的离子强度，减少RBC周围的阳离子云，以促进RBC和血清（浆）中的抗体结合；其后加入凝聚胺（Polybrene）溶液，以中和RBC表面带有的负电荷，使RBC产生非特异性的凝集；最后加入悬浮液（Resuspending），中和凝聚胺的作用，使正常的RBC非特异性凝集散开，结果为阴性。如果RBC被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，结果为阳性。
三、试剂组成
1． LIM（Low Ionic Medium）： 葡萄糖、EDTA（2Na）
2． Polybrene Solution（黑色瓶）： Polybrene、NaCL
3． Resuspending Solution（白色瓶）：柠檬酸钠、葡萄糖
4． Positive Control： 抗-D
四、操作程序
1． 取试管二支，标明主、次侧，主侧管加病人血清（浆）2滴，加供血者5%RBC悬液（洗涤或不洗涤均可）2滴；次侧管加病人5%RBC悬液2滴及供血者血浆2滴。
2． 各加LIM0.6ml（吸管12滴），混匀，再各加Polybrene（黑色瓶）2滴，混匀后离心3400rpm10秒，倒掉上清液，留约0.1mL液体。

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3． 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。
4． 最后各加入2滴Resuspending（白色瓶），轻轻转动试管混合，并同时观察结果。
五、结果判断
1．如果在30秒内凝集散开，表示是由Polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合。
2．如果在30秒内凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不合。

六、质量保证措施
1．先核病人姓名，标本是否合格，试管上联号与化验单上联号是否相同，是否有抽血者姓名，以防血标本混调。
2．病人血液及献血员红细胞配成5%左右红细胞悬液，不要太浓太稀。
3．必须做正反血型鉴定保证ABO血型。
4．可以用EDTA（或枸椽酸钠）之血浆代替血清使用。
5．若病人血清（浆）含肝素（如洗肾患者），须多加4～6滴Polybrene以中和肝素。
6．试剂用前要回复室温再行操作。本试剂盒的操作方法也适用于抗体鉴定。
7．反应可疑时，可进一步用显微镜观察结果。在冬天室温极低时，交叉配血时由于某些病人血清中可能含有冷凝集素等原因而导致假阳性的结果。若有此怀疑时，建议在加入Resuspending时，将试管立即置于37℃水浴中轻轻转动混合，并在30秒内观察结果。
七、参考资料
1.«全国临床检验操作规程»第二版
2.试剂盒说明书