《粮油检验__粮食中黄曲霉毒素B1检测__胶体金快速定量法》讨论稿.doc

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中华人民共和国粮食行业标准
XX/T XXXXX—XXXX

粮油检验 粮食中黄曲霉毒素B1检测 胶体金快速定量法
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Detection of Aflatoxin B1 in Grain—Rapid Quantitative Method of Colloidal Gold Technique

（本稿完成日期：）
XXXX - XX - XX发布
XXXX - XX - XX实施
        发布

XX/T XXXXX—XXXX
前  言
本标准是按照GB/T 1.1—2009 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则》及GB/T 20001.4—2001《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》的要求进行编写。
本标准的附录A为规范性附录。
本标准由国家粮食局提出。
本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。
本标准负责起草单位：湖北省粮油食品质量监测站、北京博欧实德生物技术有限公司、国家粮食局科学研究院、北京市粮食食品检验所、中国储备粮管理总公司、河南省粮油饲料产品质量监督检测中心、安徽省粮油产品质量监督检测站、辽宁省粮油检验监测所、广东省粮食科学研究所、湖南省粮油产品质量监测中心、浙江省粮油产品质量检验中心。
本标准主要起草人：田国军、倪姗姗、刘利、熊宁、李华、王松雪、尚艳娥、袁小平、尹成华、季一顺、崔国华、陈嘉东、覃世民、应胜建。

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粮油检验 粮食中黄曲霉毒素B1检测 胶体金快速定量法
1　 范围
本标准规定了黄曲霉毒素B1的胶体金快速定量检测方法的原理、试剂、材料、仪器设备、样品制备、样品测定与结果表述。
本方法适用于小麦、大米和玉米等谷物中黄曲霉毒素B1快速定量筛查的测定，检测限为2μg/kg。
2　 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 2761 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量
GB 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测
3　 原理
利用免疫层析原理，试样提取液中黄曲霉毒素B1与检测条中胶体金微粒发生呈色反应，颜色深浅与试样中黄曲霉毒素B1含量相关。反应完成后，用读数仪测定颜色深浅，根据颜色深浅计算出试样中黄曲霉毒素B1浓度。
4　 试剂及材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T 6682中三级水。
4.1黄曲霉毒素B1胶体金快速定量检测卡1) 美国Charm公司生产的ROSA胶体金快速定量检测卡是通过粮食行业验证的产品，提供此信息仅为了方便本标准的使用者，而不是对ROSA真菌毒素快速定量检测系统的认可。任何可以得到与其方法结果相同的产品均可使用。
)：技术要求参考GB/T 27404-2008，具体见附录A。
4.2稀释缓冲液:根据产品使用说明书要求配制。
4.3提取液：70%甲醇溶液。
5　 仪器设备
实验室常规仪器、设备：
5.1　 天平:分度值0.01g。
5.2　 小型粉碎机：粉碎粒度能够全部通过20目筛。
5.3　 离心机：不低于4000r/min。
5.4　 涡旋振荡器。
5.5　 孵育器:可调节时间、温度（±1℃）。
5.6　 读数仪。
6　 样品制备
6.1　 扦样与分样：按GB 5491 执行。
6.2　 样品处理
6.2.1　 取有代表性的样品500g，粉碎，过20目筛，混匀；
6.2.2　 称取10.00g样品至具塞锥形瓶中，加入20mL70%甲醇溶液，剧烈震摇1min-2min，离心（4000r/min）1min(或静置)，取上清液100μL于另一离心管中，加入1.0mL稀释缓冲液（4.2），充分混匀后即为待测溶液。
注1：因黄曲霉毒素B1胶体快速定量产品生产厂家的不同，待测溶液制备方法不同，如提供黄曲霉毒素B1胶体金快速定量产品使用说明，则按照黄曲霉毒素B1胶体金快速定量产品使用说明中规定方法进行操作。
7　 样品测定
7.1　 取出冷藏放置的试剂盒，待恢复室温后，从试剂盒中取出检测条，打开后平放于孵育器中，做好标记，并设置孵育温度45℃，孵育时间5min。
7.2　 准确移取300μL稀释提取液（6.2.2），缓慢加入检测条加样孔中，关闭孵育器盖。
7.3　 孵育5min后观察检测条，若出现下述情况，视为检测条无效。
a) C线（质控线）不出现、弥散或严重不均。
b) T1或T2线（检测线）严重不均。
c) 稀释提取液或质控液掩盖或模糊了T1、T2线或C线。
d) 显色微粒没有通过T1、T2线或C线。
7.4　 检测条在每次检测时必须出现质控色带，孵育时间不能超过7min。
7.5　 孵育完成后，选取读数仪黄曲霉毒素B1检测频道中“MATRIX00”样品测定类型进行测定，测定需在2min内完成。若读数仪显示“30+”时，需将样品稀释后，读数仪设定为“MATRIX01”样品测定类型重新进行测定。稀释方法为：移取300μL稀释提取液于离心管中，加入1.0 mL稀释缓冲液后混匀用于测定。
注2：因黄曲霉毒素B1胶体快速定量产品生产厂家的不同，孵育器和读数仪的使用方法不同，如提供黄曲霉毒素B1胶体金快速定量产品使用说明，则按照黄曲霉毒素B1胶体金快速定量产品使用说明中规定方法进行操作。
8　 结果表述
试样中黄曲霉毒素B1含量以微克每千克（µg/kg）为单位，数值由读数仪直接显示和读取。
9　 重复性
在同一实验室，由同一操作者使用相同仪器，按相同的测定方法，对同一被测试对象进行相互独立测试的两次独立测试结果的绝对差值不应大于算术平均值的20%。
附录A
（规范性性附录）
胶体金快速定量检测产品性能评价要求

A.1 准确性评价
采用2µg/kg、10µg/kg和40µg/kg三个水平的阳性样品，每个浓度水平测定不低于6次，通过偏差来表述，3个浓度水平的偏差均应控制在-20%～＋20%之间；
A.2 精密度评价
采用黄曲霉毒素B110µg/kg的阳性样品，每个浓度水平测定不低于6次，通过批内变异系数来表述，变异系数应≤25%；
A.3 检测限
计算20份阴性样品测定均值加3倍标准差，其结果应小于或等于产品灵敏度标示值；
A.4 批间稳定性评价
采用10µg/kg左右浓度水平的阳性样品，不得低于6个批次，每个批次测定不低于2次，批内测定取平均值，通过批间变异系数来表述，变异系数应≤20%。