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应用正交设计法筛选天麻钩藤饮优化处方研究
【摘要】 目的：筛选中药复方天麻钩藤饮的优化处方，分析探讨其最佳配伍关系和配伍剂量。方法：SD大鼠采用钳夹左肾动脉加灌服附子汤制备大鼠高血压肝阳上亢证模型，根据中医理论并通过正交设计选择两个天麻钩藤饮正交组方，与原方、卡托普利进行降压作用对照研究，筛选出天麻钩藤饮优化处方，再应用正交设计观察优化处方不同配伍剂量的降压效果，找出最佳剂量配比。结果：天麻钩藤饮及其优化处方均有明显的降压作用()。结论：天麻钩藤饮及其优化处方均有明显的降压作用，天麻钩藤饮优化处方的最佳配伍剂量为天麻6g、钩藤15g、石决明18g、桑寄生9g、川牛膝9g。
【关键词】 高血压 肝阳上亢证 大 鼠 天麻钩藤饮 正交试验
天麻钩藤饮出自清代胡光慈《杂病证治新义》一书，是具有平肝潜阳功效的经典古方，临床应用证实该方对高血压病肝阳上亢证患者血压明显改善。但其原方共有11味中药，并且每味中药没有剂量记载，多数临床及动物实验都是按照各自临床经验进行，没有统一标准，使实验难以重复。笔者采用正交试验设计法，以高血压肝阳上亢证大鼠血压为评价指标，对天麻钩藤饮进行优化处方及寻找其最佳剂量配比，并探索其配伍规律，现报道如下。
　　1 天麻钩藤饮优化处方筛选
　　优化处方筛选方案 天麻钩藤饮由11味中药组成，将每一味中药作为一个因素，每个因素设“有”和“无”两个水平(即有此药和无此药)，选择L12(211)正交表设计配方，共得12个配方。根据中医理论结合笔者临床经验，选取天麻钩藤饮正交1方、正交2方与天麻钩藤饮原方进行降压作用比较研究。
　　实验动物 清洁级SD大鼠90只，雌雄各半，体质重180～220g，湖南长沙市开福区东创实验动物技术服务部提供。动物许可证号：scxk(湘)20060001。
　　药物制备 附子汤(造模用)，制附子20g，煎煮90min，浓缩至200ml(含生药/ml);天麻钩藤饮原方:天麻10g，钩藤15g(后下)，石决明20g(先煎)，山栀、黄芩各6g，川牛膝10g，杜仲、益母草、夜交藤、茯苓各12g，桑寄生9g，水煎取200ml(含生药/ml);天麻钩藤饮正交1方：天麻10g，钩藤15g(后下)，石决明20g(先煎)，川牛膝10g，桑寄生9g，水煎取200ml(含生药/ml);天麻钩藤饮正交2方：天麻10g，钩藤15g(后下)，杜仲12g，山栀、黄芩各6g，水煎取200ml(含生药/ml)。以上药材均由南宁市一心药业有限公司提供。卡多普利(江苏常州制药厂生产)，磨粉后双蒸水溶解配制成200ml(/ml)。
　　仪 器 ALCNIBP无创尾动脉血压测定仪(上海奥尔科特生物科技有限公司)
　　肝阳上亢证高血压模型 按文献方法[1,2]，采用钳夹左肾动脉加灌服附子汤制作大鼠肝阳上亢证高血压模型。钳夹左肾动脉以血管结扎后有血液回流，并结合顾德官等报道的标准及国外较多采用的血压标准：手术后凡血压比术前增高20mmHg(大于正常血压 3 个标准差值)且高于 150mmHg者确定为高血压大鼠模型成功。术后2周加灌服附子汤4周，制备肝阳上亢证高血压大鼠模型。根据形为学改变，包括外观毛色光泽度降低、双眼结膜颜色加深变红、性情易激惹、饮水量增加及旋转时间缩短等，确定为模型成功。造模时间共6周。
　　分组与给药 将90只大鼠，随机分为六组，每组15只。正常组给予蒸馏水灌胃8周;其余五组造模后，模型组给予蒸馏水灌胃;卡多普利组按/(kg·d)，给予卡多普利溶液灌胃;天麻钩藤饮组按/(kg·d)，给予天麻钩藤饮溶液灌胃;天麻钩藤饮正交1方组按/(kg·d)，给予天麻钩藤饮正交1方溶液灌胃;天麻钩藤饮正交2方按5g/(kg·d)，给予天麻钩藤饮正交2方溶液灌胃。以上剂量均按动物体表面积系数折算，相当60kg成人临床剂量的倍。灌胃容量均为每次20ml/(kg·d)，从第7周开始每天上午8时给药，1天1次，连续给药2周。分笼饲养，正常饮食，自由饮水。
　　实验结果 与模型组比较，第8周末各用药组血压均有降低();与卡托普利组比较，天麻钩藤饮组及天麻钩藤饮正交2方降压疗效不及卡托普利();天麻钩藤饮正交1方降压疗效与西药卡托普利相当()，见表1。表1 各组大鼠血压动态变化比较与造模前比较，*;与第2周末比较，△;与第6周末比较，▲;与模型组比较，#，##;与卡托普利组比较，◇
　　2 天麻钩藤饮优化处方最佳剂量筛选
　　优化处方不同剂量配比方案 根据以上试验结果，选择降压效果最优的天麻钩藤饮正交1方中4 味药物构成4个因素。天麻以6g为1水平、9g为2水平、12g为3水平、15g为4水平;钩藤以12g为1水平、15g为2水平;石决明以18g为1水平、24g为2水平;桑寄生以9g为1水平、12g为2水平;川牛膝以9g为1水平、12g为2水平。采用L8(41×24)混合水平正交表设计，共得8个处方，见表2。表2 天麻钩藤饮优化配方的混合水平正交设计
　　药物制备 附子汤同实验一。天麻钩藤饮正交1方8个处方均煎煮40min，浓缩至200ml液体，各方含生药量：1方/ml，2方/ml，3方/ml，4方/ml，5方/ml，6方/ml，7方/ml，8方/ml。
　　造模及检测方法同优化处方筛选实验
　　分组与给药 取40只清洁级SD健康大鼠，雌雄各半，体质重200±20 g，随机分为八组，每组5只。每只大鼠灌胃容量均为每次20ml/(kg·d)，从第7周开始每天上午8时给药，1天1次，连续给药2周。分笼饲养，正常饮食，自由饮水。
　　实验结果 第8周末各组血压均有降低()， 但差异无统计学意义()。 为观察各因素即处方中各药味的作用是否存在显着性差异,采用每组血压降压差值直观分析法进行分析， 见表3， 4。表3 天麻钩藤饮优化处方的最佳剂量筛选表4 天麻钩藤饮优化处方降压作用的方差分析
　　结果显示，在对大鼠血压的影响中，各因素即处方中各药味的作用存在显着性差异,天麻降压效果最为明显，为主药，钩藤次之，为辅药。天麻随着药量的增大对大鼠的血压影响不理想，故应该取最小剂量;钩藤随着剂量的增加，对大鼠的血压影响明显，故应当取最大剂量;石决明、桑寄生和川牛膝随着药量的增大对大鼠的血压影响不明显，考虑经济因素，在临床及科研应用中取低剂量。因此，天麻钩藤饮优化处方最佳剂量配比为：天麻6g、钩藤15g、石决明18g、桑寄生9g、川牛膝9g。
　　3 讨 论
　　正交设计应用于中药复方研究,有利于分析中药复方配伍的主次关系,发现中药复方最佳配伍,筛选中药复方,指导临床合理用药。本实验在相关的中医理论和临床经验指导下，对中药复方天麻钩藤饮进行两次正交试验设计，从而找出其最佳的组方(药物配伍和剂量)，为指导临床应用和中药复方的二次开发奠定基础。实验结果表明，方中天麻平肝熄风，为君药;石决明、钩藤平肝潜阳，为臣药;桑寄生补益肝肾，为佐药;川牛膝引血下行，为使药。诸药配伍，平肝熄风、滋阴潜阳作用更为突出。药理研究证实，天麻及天麻密环菌菌丝具有降血压、减慢心率、舒张外周血管、增加心脑血管血流的作用;钩藤及其生物碱能抑制细胞外Ca2+经电位依赖性Ca2+通道的内流，抑制细胞内Ca2+释放，此作用与经典钙拮抗剂相似;桑寄生能舒张冠状血管，增加冠脉血流，起到降压作用，另外还有利尿镇静作用，可协同降压;川牛膝苯提取物有显着降压及利尿作用。本实验结果显示，天麻钩藤饮的优化处方以天麻6g、钩藤15g、石决明18g、桑寄生9g、川牛膝9g为最佳剂量配比。
【参考文献】
　1 肖 纯，金益强，胡随瑜，等.潜阳方对高血压肝阳上亢证大鼠模型的实验研究.湖南中医学院学报，1999，19(2)810
　　2 尹时华,金延安,化长林.建立肾性高血压大鼠实验模型的一种新方法.咸宁医院学学报,1999,13(1):1517
　　3 顾德官.实验性高血压大鼠的血压观察.上海第二医学院学报,1985,2:102
　　4 [德]沃格尔,[美]沃格尔编着，杜等译.药理学实验指南.北京:科学出版社，
　　5 黄泰康.现代本草纲药(上卷).北京：中国医药科技出版社，