WS_T 630-2018 日本血吸虫抗体检测 间接红细胞凝集试验.pdf
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1、ICS 11.020C 61WS中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准WS/T 6302018日本血吸虫抗体检测 间接红细胞凝集试验Detection of antibody against Schistosoma japonicumIndirect haemagglutination test2018-09-26 发布2019-04-01 实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发 布WS/T 6302018I前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由国家卫生标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出。本标准起草单位:安徽省血吸虫病防治研究所、中国疾病预防控制中心寄生虫
2、病预防控制所、浙江省医学科学院寄生虫病研究所、江苏省血吸虫病防治研究所、江西省寄生虫病防治研究所。本标准主要起草人:张世清、汪天平、许静、闻礼永、章乐生、郑彬、熊彦红、梁幼生、林丹丹。WS/T 63020181日本血吸虫抗体检测间接红细胞凝集试验1范围本标准规定了检测日本血吸虫抗体的间接红细胞凝集试验。本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对人体血清中日本血吸虫抗体的检测。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1血吸虫病 schistosomiasis由血吸虫寄生于人和其他哺乳动物所引起的疾病,在我国特指日本血吸虫病(schistosomiasisjaponica)。注:改写GB 1
3、59762015,定义3.12.2间接红细胞凝集试验 indirect haemagglutination test将抗原包被于红细胞表面,成为致敏的载体,然后与相应的抗体结合,通过抗体桥联,出现肉眼可见的凝集现象,以检测样本中的相应抗体。最常用的红细胞为健康人“O”型红细胞。2.3可溶性虫卵抗原 soluble egg antigen血吸虫虫卵经匀浆和超声破碎等处理后离心收集的上清液,含蛋白质、糖蛋白、多糖等多种成分复合物。3仪器设备3.1台式低速离心机最高转速2 500 r/min,或最大相对离心力800 g。3.2平板微量振荡器最高振动频率2 800 r/min,最大振幅6 mm。3.3
4、电热恒温水浴箱控温范围室温+5 99.9,温度分辨率/波动度0.1/0.5。WS/T 630201823.4微量移液器量程范围10 L100 L,增量1 L;量程范围100 L1 000 L,增量5 L。4试剂材料4.1冻干致敏红细胞主要组成成分为日本血吸虫可溶性虫卵抗原、健康人“O”型红细胞和蔗糖,制备方法参见附录A。4.2阳性对照血清感染日本血吸虫的兔混合血清,参见附录A。4.3阴性对照血清正常兔混合血清,参见附录A。4.4稀释液pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS),参见附录A。4.5血凝反应板“V”型微孔有机玻璃血凝板为宜,操作程序参见附录B。5检测步骤5.1样本准备采集末梢血100 L或静
5、脉血2 mL,室温下放置至血块收缩后,800 g 离心5 min,分离出血清后进行检测,参见附录B。5.2样本检测5.2.1待测样本编号,从左到右按 1n 号依次排列。5.2.2阴性对照血清、阳性对照血清各加 100 L 稀释液,使其充分溶解,移液器吹打数次混匀后备用。5.2.3取血凝反应板,横向平放纵向使用。于第 1 列第 1 孔加稀释液 100 L,第 1 列的第 3、4 孔各加稀释液 25 L,第 2 孔不加稀释液。5.2.4于第 1 列第 1 孔加 1 号待测样本 25 L,充分混匀后吸出 25 L 至第 2 孔,再从第 1 孔吸出 25 L至第 3 孔,充分混匀后吸出 25 L 至第
6、 4 孔,充分混匀后吸出 25 L 弃去。5.2.5同上操作,依次进行第 2n 号样本、阴性对照血清、阳性对照血清的倍比稀释,血凝反应板纵向 4 孔的血清稀释度依次为 1:5、1:5、1:10、1:20。5.2.6每支冻干致敏红细胞加 1 mL 稀释液,充分混匀后备用。5.2.7除每列第 1 孔血清稀释孔外,其余血清稀释孔各加致敏红细胞悬液 25 L,血凝反应板置微量振荡器震摇 1 min2 min,封板并置 37 电热恒温水浴箱 30 min,在白色背景下观察结果,参见附录 B。WS/T 630201836结果判定6.1结果判定标准见附录 C。阴性对照血清不出现凝集现象,阳性对照血清出现凝集
7、现象,检测结果视为有效。6.2以呈“”或以上反应强度凝集的血清最高稀释度作为血清的效价,以效价1:10 作为阳性判断标准。WS/T 63020184AA附录A(资料性附录)主要试剂材料制备方法A.1冻干致敏红细胞A.1.1可溶性虫卵抗原取冻干虫卵,0.01%硫柳汞生理盐水配制悬液,组织匀浆器研磨并置20 反复冻融3次,10 000g离心30 min,取上清液。测定蛋白含量后,用硫柳汞生理盐水稀释至0.75 mg/mL,分装到西林瓶,置20 保存备用。A.1.2醛化红细胞A.1.2.1取健康人“O”型红细胞,用生理盐水洗涤3次,移入刻度离心管,800 g 离心10 min,记录压积红细胞体积。A
8、.1.2.2取压积红细胞,每1 mL加 pH 7.2PBS 25 mL混匀,再缓慢滴加2.5%戊二醛2 mL,边滴边摇。室温摇荡1 h,PBS洗涤3次,再用蒸馏水洗涤2次。最后用0.01%硫柳汞生理盐水配成10%醛化红细胞悬液,置2 8 备用。A.1.3鞣化红细胞A.1.3.1配制含0.01%鞣酸的生理盐水,与等量的0.1 mol/L pH 7.2PBS混匀。A.1.3.2取压积醛化红细胞倒入上述溶液中配成1%浓度,置37 恒温水浴振荡器中振摇15 min,用 pH 7.2PBS洗涤3次。A.1.3.3将洗涤后的红细胞倒入0.1 mol/L pH 6.4PBS溶液中配成1%浓度,充分混匀,即为
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