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环孢素A慢性肾毒性及丹参保护作用

　　【关键词】 环孢菌素类；药物毒性；丹参
　　摘要： 目的 探讨环孢素A(CsA)慢性肾毒性的发生机制及丹参对其的保护作用。方法 将雄性大鼠随机分为对照组、模型组及丹参组,分别给予橄榄油、CsA+葡萄糖及CsA+丹参注射液。观察给药前和给药28d后各组大鼠24h的尿量及肾功能；观察给药28d后各组大鼠血浆肾素-血管紧张素系统(RAS)及肾脏组织学变化。结果 CsA能诱导肾小球滤过率下降，增加尿中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的排泄，血浆肾素活性、血管紧张素II水平明显升高，导致肾间质纤维化和小动脉病变等；丹参能使血浆PRA、AngⅡ水平减低，并能改善肾脏功能及病理变化；各组之间血浆醛固酮水平无变化。结论 CsA的慢性肾毒性损伤可能与RAS的激活，尤其是与AngⅡ的增加有关；丹参能使血浆PRA、AngⅡ水平降低，对CsA的慢性肾毒性有明显的保护作用。
　　关键词：环孢菌素类；药物毒性；丹参
　　Cyclosporin-induced chronic nephrotoxicity and preventive effects of salvia compound
　　Abstract： Objective To explore the mechanism of cyclosporin-induced chronic nephrotoxicity and the preventive effects of salvia　Thirty adult male rats were randomly allocated into 3　A received olive oil as　rats in group B received cyclosporin A (CsA) and glucose　rats in group C received CsA and compound salvia　amounts of urine in 24 hours and renal function were measured before and after the drugs were　levels of plasma renin activity(PRA),plasma angiotension II (Ang II) and Aldosterone(ALD) were also measured after the rats were given CsA and compound salvia injection for 28 days,and also the changes of renal tissues were assessed by histological　CsA can induce the decrease of glomerular filtration rate (GFR) ,increase the excretion of n-acetyl-β-d-glucosaminidasein urine ,and increase the levels of PRA and Ang II in blood obviously ,and induce the tubulointerstitial fibrosis and the injury of renal arterioles .But salvia compound can decrease the levels of PRA and Ang II,improve the function of kidneys and the pathological changes .There was not significant difference in ALD levels among 3　Cyclosporin-induced chronic nephrotoxicity may be related to the activation of renin-angiotensin system (RAS) ,especially to the increase of AngⅡ　compound can decrease the levels of PRA and AngⅡ,and have preventive effects on chronic nephrotoxicity.
　　Key words：cyclosporins;drug toxicity;salvia compound

　　环孢素A(cyclosporin A,CsA)是目前器官移植术后广泛使用的免疫抑制剂，但肾毒性是限制其临床应用的主要副作用。拮抗CsA引起的肾间质纤维化，是器官移植后保障患者长期存活的重要措施之一。慢性肾毒性机制目前尚不十分清楚，有报道认为，与肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)密切相关〔1〕。本研究采用口服剂型CsA慢性肾毒模型，观察慢性肾毒性时肾脏功能、RAS及病理的变化，探讨慢性肾毒性的发生机制，并应用丹参为干预措施，观察其对CsA慢性肾毒性的保护作用。
　　1 材料与方法
　　11 动物 雄性SD大鼠30只，体重220～280g。
　　12 实验用药 CsA口服液，含CsA100mg/ml。使用前用橄榄油稀释，使CsA浓度为25g/L；复方丹参注射液，含丹参2g/ml。
　　13 实验方法 采用随机区组设计将动物随机分为对照组、模型组及丹参组，每组10只。对照组为 橄榄油(CsA溶剂)；模型组为CsA和葡萄糖；丹参组为CsA加复方丹参注射液。按实验设计，控制室温为20～25℃，3组大鼠给予低盐饮食1周，收集24h尿液，记录尿量，然后断尾采血。此后在灌服橄榄油或CsA前30min，对照组和模型组大鼠每天经腹腔注射5%葡萄糖注射液4ml/；丹参组大鼠每天注射复方丹参注射液4ml/。然后对照组大鼠每天灌服橄榄油12ml/；模型组、丹参组大鼠每天分别灌服CsA 12ml/。观察期间大鼠自由进食进水，各组大鼠每7d称体重1次，调整CsA、橄榄油及丹参用量。灌药后第28d，各组动物分别再入代谢笼收集24h尿液，记录尿量，断尾采血。血标本用于检测血肌酐和钠；尿标本用于检测尿肌酐、钠及N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)。第29d动物在乙醚麻醉下，经大鼠内眦采血3ml，迅速注入放在冰水溶液中冷却的酶抑制剂抗凝管中摇匀，4℃下1000r/min离心5min，分离血浆，放入冰箱-20℃保存。待标本收集齐后，同时检测血浆肾素、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及醛固酮(ALD)的含量。然后在严格的无菌条件下开腹，取左肾标本固定于40g/L多聚甲醛液中，用于常规病理检查。
　　14 测定方法 血、尿标本肌酐测定采用去蛋白终点法，钠的测定采用火焰光度法，按标准公式计算内生肌酐清除率(Ccr) 及滤过钠排泄分数(FENa)；NAG测定采用对硝基酚比色法，结果以酶单位与同一样品尿肌酐比值表示(U/g Cr)。肾素活性、血管紧张素Ⅱ及醛固酮的放射免疫分析按试剂盒说明书操作。放射性测量使用SN-682型γ计数器。
　　15 病理检查 常规石蜡切片，苏木素-伊红染色。应用MPIAS-500多媒体彩色病理图文分析系统,在100倍视野下观察、测量。病理观察及半定量评分标准参照有关报道〔2,3〕，观察20个以上高倍视野。肾小管损伤标准：细胞空泡变性，肾小管塌陷(与间质纤维化和肾小管膜增厚无关)及肾小管肿胀；肾间质损伤标准：单个核细胞浸润，间质细胞空泡变性，水肿及间质纤维化、瘢痕化；肾小球小动脉病变：观察并计算100个肾小球，计数入球小动脉受损伤的百分比，其病变病理特征为入球小动脉的玻璃样变或肌性增厚。标准：0为正常；05为5%组织损伤；1为5%～20%损伤；15为21%～35%损伤；2为36%～50%损伤;25为51%～65%损伤；3为65%损伤。

　　16 统计分析 各组间的比较采用方差分析，进一步两两比较用Student-Newman-keuls方法。
　　2 结果
　　21 用药前后各组大鼠尿量及内生肌酐清除率(Ccr)结果
　　表1 各组大鼠用药前和用药后尿量及Ccr比较
　　注：与对照组比较,a P005,b P001；与模型组比较c P005,d P001；与本组用药前比较， e P001
　　22 用药前后各组大鼠FENa及NAG结果
　　表2 各组大鼠用药前和用药后FENa及NAG比较
　　注：与对照组比较,a P005,b P001；与模型组比较,d P001；与本组用药前比较，e P001
　　23 用药第29d后各组大鼠血浆肾素、血管紧张素Ⅱ、ALD浓度 (表3)
　　表3 各组大鼠用药第29d后血浆肾素、血管紧张素Ⅱ、ALD浓度
　　注：与对照组比较,a P005,b P001；与模型组比较，c P005
　　24 各组大鼠肾病理组织学半定量评分 对照组大鼠仅有轻度肾小管上皮细胞浊肿及间质纤维化改变；模型组大鼠均有明显不同程度的病理改变，表现为肾小管上皮细胞浊肿及空泡变性,小管塌陷及小管肿胀；间质可见有局灶性分布的条状纤维
　　化，单核细胞浸润及间质扩增，入球小动脉玻璃样变。与对照组比较差异均有统计学意义；丹参组上述病变明显减轻，与模型组比较肾小管病变差异有统计学意义(P001)，间质及小动脉病变差异有统计学意义(P005)。
　　表4 各组大鼠肾病理组织学半定量评分比较
　　注：与对照组比较,b P001；与模型组比较,c P005,d P001
　　3 讨论
　　CsA的慢性肾毒性的机制至今仍不清楚，Lee等〔4〕提出RAS系统在疾病的发病中占有重要作用。实验证明，长期输注AngⅡ可引起明显的肾间质细胞增生和纤维化〔5〕。应用血管紧张素转换酶抑制剂及AngⅡ受体阻滞剂均能部分阻止CsA 诱导的肾内血管收缩〔6-8〕，缓解肾毒性作用的发生。本研究发现，CsA能诱导肾小球滤过率下降，增加尿中NAG的排泄；使血浆PRA、AngⅡ水平升高；肾间质纤维化和小动脉病变等，表明CsA能激活RAS系统，AngII水平的升高可诱导肾血管收缩，引起肾缺血性损伤，导致肾间质纤维化，提示RAS的激活特别是AngⅡ的上调，参与了CsA 诱导的肾毒性作用。 尽早干预RAS成为防治CsA肾毒性的重要策略之一。本研究将丹参预防性地应用于CsA慢性肾毒模型中，发现丹参对激活的RAS系统有抑制作用，同时丹参能提高肾小球滤过率改善肾功能，减轻肾小管空泡变性及间质纤维化等病理改变，表明丹参对CsA慢性肾毒性有很好的保护作用。其保护的机制可能是通过多种途径：降低RAS系统的活性，减轻肾血管收缩，改善肾缺血性损伤，减轻肾间质纤维化；丹参是传统的活血化淤中药，可降低红细胞压积及全血或血浆粘稠度，扩张小血管，改善肾皮质毛细血管的血流动力学〔9〕；有抑制成纤维细胞增殖并促其凋亡的作用〔10〕,从而减轻CsA引起的慢性肾间质纤维化。本研究各组之间血浆醛固酮水平差异无统计学意义(P005)，尽管CsA对RAS有明显的刺激作用，但血浆醛固酮的分泌并不受影响，可能与CsA诱导肾上腺选择性地抵抗AngⅡ的作用有关〔4〕。
　　参考文献
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